国家自然科学基金(81100949)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
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- 高压氧对四氢吡啶诱导的帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元的线粒体保护作用研究被引量：6
- 2012年
- 目的研究高压氧（HBO）对1-甲基-4-苯基-1、2、3、6-四氢吡啶（MPTP）诱导的帕金森病小鼠多巴胺神经元的线粒体保护作用。方法将48只雄性SPF级C57BL／6小鼠按随机数字表法分为3组，包括对照组（每日给予生理盐水30ml／kg体重腹腔注射）、模型组（每日给予MPTP30mg／kg腹腔注射）、HBO组（每13给予MPTP30mg／kg体重腹腔注射后给予HBO治疗），每组小鼠16只。用免疫组化和Westernblot检测脑组织中酪氨酸羟化酶（TH）、PINK1蛋白和线粒体凋亡通路相关半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的表达水平。结果治疗后，模型组小鼠黑质多巴胺能神经元中TH及PINK1蛋白水平下调，caspase-3蛋白表达上调，与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；HBO组TH及PINK1蛋白水平上调，caspase-3蛋白水平下调，与模型组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论HBO干预可上调MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元PINK1蛋白、TH蛋白水平，同时抑制caspase-3蛋白的水平，起到了保护线粒体并抑制凋亡的作用，最终达到保护黑质多巴胺能神经元的效果。
- 马明明张杰文李玮王雪晶丁雪冰
- 关键词：高压氧6-四氢吡啶半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶酪氨酸羟化酶
- Numb蛋白对α-synuclein蛋白寡泛素化水平的调控
- 2014年
- 目的探索Numb蛋白对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)寡泛素化水平的调控。方法分别将EGFP-N1或EGFP-Numb与HA-α-syn共同转染SH-SY5Y细胞;采用细胞免疫荧光法检测α-syn蛋白和Numb蛋白的亚细胞共定位;使用免疫共沉淀的方法检测Numb蛋白与α-syn蛋白的相互结合;利用Western blot检测Numb蛋白对α-syn蛋白寡泛素水平的调控;在MPP+细胞模型中利用细胞免疫荧光检测Numb对α-syn包涵体形成的影响。结果 Numb与α-syn在细胞质中存在亚细胞共定位;Numb蛋白上调α-syn寡泛素化水平;Numb蛋白通过上调α-syn寡泛素水平促进MPP+诱导α-syn阳性包涵体形成。结论 Numb蛋白上调α-syn蛋白寡泛素水平并促进α-syn包涵体形成。
- 王跃丁雪冰王雪晶张雯雯荆婧马耀华滕军放
- 关键词：Α-SYNUCLEINNUMB包涵体
- Notch信号通路在1-甲基-4-苯基吡啶诱导的人神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用被引量：4
- 2014年
- 目的 探讨Notch信号通路在1-甲基-4-苯基吡啶（MPP＋）诱导的入神经母细胞瘤细胞凋亡中的活性变化及Notch信号通路抑制剂DAPT对凋亡的调控作用.方法 （1）体外培养的SHSY5Y与不同浓度（0、0.5、1、1.5、2 mmol/L）的MPP＋共同孵育0、24、48、72 h.Annexin V-FITC/PI双染及流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测Notch信号通路相关蛋白Notch-1、Jagged-1及Hes-1的表达.（2）将10 μmol/L的γ-分泌酶抑制剂（DAPT）预处理15 min后的SH-SY5Y细胞与1.5 mmol/LMPP＋共同孵育48 h,Annexin V-FITC/PI双染及流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测Notch-1、Jagged-1、Hes-1蛋白表达的变化.结果 MPP＋以剂量（3.20％±0.19％、10.00％±1.72％、20.60％±3.76％、32.80％±5.12％、46.00％±5.06％,均P＜ 0.05）和时间（2.80％±0.21％、12.30％±1.82％、19.60％±2.89％、35.00％±4.78％,均P＜ 0.05）依赖方式诱导SH-SY5Y细胞凋亡,并显著上调Notch信号通路相关蛋白Notch-1、Jagged-1、Hes-1的表达.DAPT可显著抑制MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡（3.10％ ±0.21％比35.50％±4.98％、19.20％±2.98％,均P＜ 0.05）以及Notch-1、Jagged-1、Hes-1蛋白的表达.结论 MPP＋诱导SH-SY5Y细胞凋亡中Notch信号通路活化,DAPT可阻断Notch信号通路激活,减少MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡.
- 巴黎丁雪冰王雪晶马明明何攀张杰文
- 关键词：NOTCH信号通路1-甲基-4-苯基吡啶凋亡Γ-分泌酶抑制剂SH-SY5Y细胞
- LRRK2在肾癌细胞中的表达及其对迁移能力的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨LRRK2蛋白在人肾癌细胞ACHN中的表达及其对迁移能力的影响。方法 Westernblot检测人肾小管上皮细胞(HK2)与人肾癌细胞ACHN中LRRK2蛋白的表达,小室体外迁移实验检测HK2与ACHN细胞迁移能力;体外培养ACHN细胞,分别转染pcDNA-LRRK2及LRRK2-siRNA 24 h,收获细胞Western blot检测LRRK2蛋白的表达,小室体外迁移实验检测ACHN细胞迁移能力的改变。结果 ACHN细胞LRRK2蛋白表达量及迁移能力显著高于HK2细胞(P<0.05);质粒转染方法能有效介导ACHN细胞LRRK2蛋白表达上调(P<0.05),LRRK2蛋白表达上调可以使ACHN细胞迁移能力增强(P<0.05);脂质体转染方法能够有效介导ACHN细胞LRRK2蛋白表达下调(P<0.05),LRRK2蛋白表达下调能够显著抑制ACHN细胞迁移能力(P<0.05)。结论 LRRK2蛋白表达水平可能与人肾癌细胞ACHN恶性程度及侵袭转移特性有关。
- 丁雪冰王雪晶马明明邵凤民朱清
- 关键词：肾癌迁移
- 突变型Notch 3(R90C)蛋白调控自噬诱导VSMC细胞凋亡的分子机制被引量：1
- 2013年
- 目的探讨Notch 3(R90C)突变蛋白诱导VSMC细胞凋亡机制。方法采用真核细胞转染技术将Flag-Notch 3(WT)及Flag-Notch 3(R90C)质粒转入大鼠主动脉血管平滑肌细胞A10,通过Western blot检测Beclin 1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin,MDC)染色检测细胞自噬空泡的变化;PI/Annexin-V-FITC检测细胞凋亡率。结果与转染Flag-Notch 3(WT)组相比,过表达Flag-Notch 3(R90C)下调细胞内源性Beclin 1蛋白的表达,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值降低。与转染Flag-Notch 3(WT)组相比,过表达Flag-Notch 3(R90C)诱导A10细胞自噬空泡聚集减少。与转染Flag-Notch 3(WT)组相比,过表达Flag-Notch 3(R90C)使A10细胞凋亡率增加。结论 Notch 3(R90C)突变蛋白可通过抑制细胞巨自噬水平诱导血管平滑肌细胞凋亡。
- 丁雪冰王雪晶马明明朱清邵凤民
- 关键词：NOTCH自噬
- 突变型TDP-43(A315T)蛋白诱导SH-SY5Y细胞凋亡的机制研究
- 2014年
- 目的探讨TDP-43(A315T)突变蛋白诱导SH-SY5Y细胞凋亡的机制。方法采用真核细胞转染技术将FlagTDP-43(wt)及Flag-TDP-43(A315T)质粒转入SH-SY5Y细胞,通过Western blot检测TDP-43截短型表达及自噬水平的变化;PI/Annexin-V-FITC检测细胞凋亡率;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin,MDC)染色检测细胞自噬空泡的变化。结果与转染Flag-TDP-43(wt)组相比,过表达Flag-TDP-43(A315T)细胞截短型片段Flag-TDP-35及Flag-TDP-25表达明显上调,下调细胞内源性Beclin 1水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值降低。与转染Flag-TDP-43(wt)组相比,过表达Flag-TDP-43(A315T)诱导SH-SY5Y细胞自噬性小泡聚集明显减少。与转染Flag-TDP-43(wt)组相比,过表达Flag-TDP-43(A315T)后SH-SY5Y细胞凋亡率增加。结论 TDP-43(A315T)突变蛋白可通过增加其截短型表达及抑制细胞巨自噬水平诱导SH-SY5Y细胞凋亡。
- 吴守芳江广予马明明丁雪冰王雪晶
- 关键词：SH-SY5Y细胞自噬凋亡
