黑龙江省自然科学基金(D200935)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：李春明杨春艳张斌刘阳徐旭光更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学附属第二医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- bFGF真核表达载体构建后分泌表达促进颌骨种植体周围骨缺损的研究被引量：1
- 2013年
- 目的构建研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)真核表达载体,并在体外进行表达和检测。同时利用bFGF基因修饰的组织工程骨移植修复颌骨种植体周围的骨缺损。方法从骨髓基质干细胞中分离总RNA,进行RT-PCR获得bFGF cDNA。测序证实其结果正确后,构建真核表达载体。并经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切、PCR及测序鉴定。利用Blast程序,搜索NCBI GenBank中与重组质粒(pVAX1-bFGF)中编码bF GF基因同源的序列。通过脂质体将重组质粒转染骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),使用间接免疫荧光法进行表达产物检测。应用基因重组技术使bFGF重组质粒转染BMSCs,筛选出阳性细胞后,复合以多孔矿化骨移植修复颌骨种植体周围骨缺损。通过对缺损处形态及X线、组织学等检查进行评价。同时以外源性注射bFGF修复缺损组作为对照。结果 bFGF基因成功地克隆到真核表达载体pVAX1中;pVAX1-bFGF中编码bFGF的序列与基因库中的bFGF编码序列完全一致;间接免疫荧光表达产物检测结果显示转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光。bFGF基因修饰的组织工程骨成骨能力较外源性注射bFGF组更强,周围的毛细血管大量增殖,骨髓腔通畅,骨缺损完全愈合。结论成功地构建人bFGF真核表达载体,并且此载体可以在体外进行表达。bFGF基因修饰的骨髓基质干细胞所形成的组织工程骨成骨能力更强,对修复颌骨种植体周围骨缺损极其适合。
- 杨春艳刘阳张斌李春明徐旭光
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达载体种植体骨缺损
