公共文化服务平台

共 4 条记录，以下是 1-4

全选清除导出

排序方式：

小鼠Dishevelled 2表达质粒的构建及其在RAW264.7细胞中的表达被引量：1: 2011年; 目的构建小鼠Dishevelled 2(Dvl2)表达质粒,并检测其转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7后的表达,为进一步研究Dvl2在破骨细胞分化和骨重建中的作用、筛选调节骨重建潜在靶点奠定基础。方法根据GenBank小鼠Dvl2 cDNA序列设计两条特异性引物,提取RAW264.7细胞总RNA,以RT-PCR获得Dvl2的开放阅读框(ORF),并将其克隆到真核表达质粒pEZ-M29上,酶切电泳,测序鉴定构建的pEZ-M29/Dvl2质粒。用脂质体介导瞬时转染RAW264.7细胞,通过荧光显微镜观察转染效果,实时定量RT-PCR检测Dvl2基因表达情况。结果成功构建pEZ-M29/Dvl2表达载体,酶切电泳和测序结果与目的基因相符;转染RAW264.7细胞后48 h,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达;实时定量RT-PCR可见实验组Dvl2基因较对照组强烈过表达。结论成功构建小鼠Dvl2真核表达质粒pEZ-M29/Dvl2,瞬时转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7可显著提高Dvl2的mRNA水平。; 黄旭赵鹃毛英杰谷志远; 关键词：DISHEVELLED 表达质粒 RAW264.7细胞破骨细胞

Dishevelled 2 siRNA载体的构建和有效干扰质粒的筛选: 2011年; 目的构建和筛选特异性抑制Dishevelled 2(Dvl2)表达的siRNA载体,为进一步研究Dvl2在破骨细胞分化及骨重建中的作用、筛选调节骨重建潜在靶点而奠定基础。方法根据目的基因设计5个siRNA靶点,与pMAGic 4.0载体形成重组质粒,转化DH5α感受态细胞,含抗生素的LB琼脂平板上筛选转化子,菌落PCR鉴定阳性克隆,测序验证正确的转化子,质粒抽提,Lipofectamine 2000将质粒瞬时转染RAW264.7细胞,通过绿色荧光信号观察转染,实时定量RT-PCR检测Dvl2基因表达的变化。结果菌落PCR和测序证实所构建的siRNA质粒目的基因大小、序列与预期相符,能有效抑制RAW264.7细胞Dvl2基因的表达,其中3号质粒抑制效率最高。结论成功构建并筛选出特异性抑制Dvl2 mRNA表达的siRNA载体,可用于包装病毒颗粒和构建Dvl2表达抑制的稳定转染RAW264.7细胞。; 赵鹃黄旭毛英杰; 关键词：SIRNA RAW264.7细胞破骨细胞

EphB4/ephrinB2逆向信号对RAW264.7破骨细胞分化中PDZ结构域蛋白表达变化的研究被引量：2: 2011年; Eph受体是酪氨酸蛋白激酶受体家族中最大的亚家族,ephrin(Eph受体相互作用蛋白)是其配体,它们是膜结合蛋白,相互依赖进行信号转导.内居蛋白(syntenin)与Pick1属于PDZ结构域(PSD-95/Dlg-/Zo-1 domain)蛋白,报道称能与ephrinB配体结合,但是否受Eph受体调控尚未见报道.以RAW264.7细胞株为研究对象,通过蛋白质印迹及/或免疫荧光分析显示RAW264.7细胞经RANKL诱导的破骨细胞表达ephrinB2、内居蛋白(syntenin)和Pick1三个蛋白质.将提前成簇的可溶性EphB4蛋白加入培养液,与ephrinB2配体结合,用来研究EphB4/ephrinB2逆向信号对syntenin和Pick1表达水平变化的影响.免疫印迹及Real-time RT-PCR分析结果显示,在EphB4-Fc实验组中Pick1的蛋白质及mRNA水平都有明显增加,然而在EphB4-Fc实验组与Fc对照组别间syntenin的蛋白质及mRNA水平未见明显变化.免疫共沉淀结果显示,syntenin和Pick1不能与ephrinB2共沉淀.以上结果初步探索了体外破骨细胞分化过程中,EphB4/ephrinB2逆向信号对PDZ结构域蛋白(ephrinB2配体潜在的下游信号分子)表达变化的调控.; 毛英杰黄旭赵鹃史月华谷志远; 关键词：EPHB4 EPHRINB2

破骨细胞促进骨重建的研究进展被引量：5: 2011年; 骨重建在口腔医学领域具有重要的价值,而破骨细胞对于骨重建具有不可替代的促进作用。目前,以破骨细胞-成骨细胞耦联为靶向,即利用破骨细胞促进骨重建的研究和应用极少。本文就骨吸收和骨生成间的动态耦联、破骨细胞对骨重建的促进作用、破骨细胞促进骨重建的分子机制等研究进展作一综述。; 赵鹃黄旭刘丽; 关键词：破骨细胞骨重建

全选清除导出

共1页<1>

浙江省自然科学基金(Y2100333)