中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2060302GXIF-2009-04)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：梁万文黄婷余晓丽陈明李超更多>>
- 相关机构：广西水产研究所广西大学中国水产科学研究院淡水渔业研究中心更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 罗非鱼颗粒蛋白前体cDNA序列与表达分析被引量：2
- 2010年
- 颗粒蛋白前体(Progranulin,PGRN)在先天免疫反应调控及个体生长发育过程中均有重要作用。通过对罗非鱼外周血白细胞全长cDNA文库筛选得到的序列进行生物信息学分析,获得罗非鱼Pgrn全长cDNA序列(GenBank登录号为GQ241348)。该cDNA克隆总长843bp,包含一个完整的开放阅读框,编码206个氨基酸,其中推定信号肽20个氨基酸,两个GRN重复单位均56个氨基酸。研究采用实时定量PCR(Real-time RT-PCR)方法对感染海豚链球菌后奥尼罗非鱼、尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼和吉富罗非鱼4种组织(脑、肝脏、脾脏和头肾)Pgrn mRNA表达情况进行分析。结果显示,Pgrn mRNA在攻毒后4种罗非鱼4种组织中表达均有上调趋势,并且在脾中的表达量最高,提示PGRN在鱼类先天免疫反应调控中起重要作用。另外,奥尼罗非鱼在感染海豚链球菌后6h的脑和肝脏、6h和12h的脾脏和头肾中Pgrn mRNA表达均下调,然后表达升高,这种表达变化在其他三种鱼中不明显,这也许是奥尼罗非鱼抗病力较强的一个原因。研究为从分子水平探讨PGRN在罗非鱼先天免疫反应中的作用机制提供了数据,也为罗非鱼的抗病选育提供了参考分子标记。
- 王瑞陈明黄钧李超甘西余晓丽黄婷梁万文
- 关键词：罗非鱼实时定量PCR抗病育种基因表达分析
- 罗非鱼免疫前后白细胞cDNA差减文库的构建及鉴定被引量：9
- 2010年
- 为筛选罗非鱼链球菌疫苗免疫前后白细胞表达变化基因及探讨鱼类白细胞免疫机理,利用抑制性差减杂交(SSH)技术,以链球菌疫苗免疫前后罗非鱼白细胞cDNA为材料,构建了罗非鱼免疫前后正、负2个cDNA差减文库,并采用地高辛(DIG)标记差减文库cDNA作为探针,进行差异表达片段的筛选鉴定。结果显示:2个文库重组率均在90%以上,插入片段在300～900 bp,接头连接效率超过50%,差减效率非常高效,阳性率均超过70%。杂交筛选后正、负文库各挑选30个阳性克隆进行测序组装聚类,正、负文库各获得16和18条非冗余EST(unigene),所得序列经GenBank同源性分析,正、负文库各有10和11条unigene获得功能注释,且各有6和7条unigene没有同源性匹配,为未知新基因。
- 李超陈明李莉萍黄维义余晓丽黄婷张彬雷爱莹陈福艳梁万文
- 关键词：罗非鱼链球菌差减文库
