天津市科委资助项目(06YFJMJC08300)
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 相关作者：邓为民杜涌瑞许静静张秋月顾欣更多>>
- 相关机构：天津医科大学天津市中心妇产科医院更多>>
- 发文基金：天津市科委资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 卵巢癌腹水中肿瘤干/祖细胞的筛选及鉴定
- 2010年
- 目的:从人卵巢癌腹水细胞中分离肿瘤干/祖细胞并进行鉴定。方法:采用无血清培养法从腹水中分离培养球形体细胞(ASC);用流式细胞仪检测腹水ASC和腹水细胞(AC)中SP(side population)亚群含量;采用PCR和Western blot方法测定两种细胞干/祖细胞相关标志物ABCG2、Oct-4、Nanog基因和蛋白的表达;NOD/SCID小鼠检测其体内致瘤性。结果:腹水球形体细胞和腹水细胞中SP亚群分别为0.9%,0.2%;腹水球形体细胞较腹水细胞高表达干/祖细胞相关标志物Oct-4、ABCG2、Nanog;1×104个球形体细胞就能在NOD/SCID鼠中成瘤,而1×106个腹水细胞也不能成瘤。结论:无血清培养法可以从卵巢癌患者腹水中筛选出肿瘤干/祖细胞。该结果可为今后研究卵巢癌的发生、复发机制及筛选其化疗药物提供简便实用的体外模型。
- 王翠环高燕贺晓英杜涌瑞姚智邓为民
- 关键词：卵巢肿瘤腹水液肿瘤干细胞生物学标记
- 抗CD_(44) mAb A3D8对腹水源卵巢癌球形体形成细胞凋亡的影响及机制被引量：1
- 2012年
- 目的观察抗CD44单克隆抗体(mAb)A3D8对腹水源卵巢癌球形体形成细胞(A-SFC)凋亡的影响,并探讨其机制。方法将常规培养的A-SFC随机分为观察组和对照组,观察组加入A3D8至其终浓度为2 mg/L,对照组不加药。培养24 h后用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率;用罗丹明123试剂盒测算细胞线粒体膜电位;用Western blot法检测A-SFC细胞中的CDK2、cyclin A、Bcl-2和Caspase-3。结果观察组细胞凋亡率11.62%±1.01%、线粒体膜电位损失率31.32%±3.47%,对照组分别为6.02%±0.79%、17.65%±2.03%,两组细胞凋亡率和线粒体膜电位损失率相比P均<0.05。观察组CDK2、cyclin A、Bcl-2、Caspase-3蛋白相对表达量分别为对照组的79%、64%、95%、160%。结论 A3D8可促进A-SFC凋亡,其机制可能与A3D8下调CDK2、cyclin A、Bcl-2表达,上调Caspase-3蛋白表达,促进线粒体膜电位损失有关。
- 张秋月杜涌瑞许静静谷超邓为民
- 关键词：细胞凋亡
- 人卵巢癌细胞系干/祖细胞分离及其鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的:自人卵巢癌细胞系SK-OV-3中分离干/祖细胞并进行鉴定。方法:采用无血清球形体形成法从SKOV-3中分离培养卵巢癌干/祖细胞;采用实时定量PCR和蛋折质印迹法测定球形体细胞干/祖细胞相关标志ABCG2、Oct-4、Nanog基因和蛋白的表达;流式细胞仪检测其耐药性;双层软琼脂检测其克隆形成能力;NOD/SCID小鼠检测其体内致瘤性。结果:球形体细胞表达干/祖细胞相关标志Oct-4、ABCG2、Nanog;对顺铂高耐药;在双层软琼脂上克隆形成率达(13.67±1.48)%;1 000个球形体形成细胞就能在NOD/SCID鼠中成瘤。结论:采用无血清培养基中球形体形成法从SKOV-3细胞系中可以分离出具有干/祖特性的卵巢癌细胞,可为今后研究卵巢癌的发生、发展、复发及其化疗药物筛选提供简便实用的体外模型。
- 王翠环杜涌瑞高燕顾欣赵惠丰李宏钊姚智邓为民
- 关键词：卵巢癌细胞系
- CD44抗体对卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞增殖的抑制作用被引量：1
- 2011年
- 目的:观察抗CD44单克隆抗体A3D8对卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞增殖的作用,并初步探讨其作用机制。方法:用MTS法检测A3D8及顺铂(DDP)对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪法观察A3D8对卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞细胞周期的影响;彗星电泳法检测DNA损伤;通过Western blot法,进一步探讨A3D8作用于卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞后CDK2、cyclin A蛋白表达水平的变化。结果:A3D8作用于卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞后,细胞抑制作用明显增强(P<0.05),而且随着A3D8质量浓度的增加和时间的延长,抑制作用明显增强,与DDP联用,抑制率较单独用DDP增高;A3D8可将细胞周期阻滞于S期;A3D8作用于卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞24h后可引起DNA损伤;A3D8组CDK2、cyclin A蛋白表达水平明显降低。结论:A3D8可能通过阻滞细胞周期发挥抑制卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞增殖的作用。
- 贺晓英王翠环杜湧瑞张秋月许静静邓为民
- 关键词：卵巢肿瘤细胞增殖细胞周期蛋白A
- 抗CD44mAbA3D8对卵巢癌球形体形成细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨抗CD44单克隆抗体(mAb)A3D8对3种卵巢癌球形体形成细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:用MTS法检测A3D8对细胞增殖的影响;采用PI染色及流式细胞仪检测A3D8对细胞周期的影响;用AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测A3D8在细胞凋亡中的作用;用罗丹明123试剂盒检测A3D8对细胞线粒体膜电位的影响;并采用WesternBlotting法检测A3D8作用于3种卵巢癌球形体形成细胞后,CDK2、cyclinA、Bcl-2和caspase-3的改变。结果:A3D8可抑制3种卵巢癌球形体形成细胞的增殖,且此抑制作用呈现剂量和时间依赖性;A3D8可在阻滞S期的同时降低G0/G1期比例;A3D8可促进3种细胞凋亡,与顺铂(DDP)联用,细胞凋亡率较单独使用DDP增高;A3D8的处理可导致3种细胞的线粒体膜电位损失,CDK2、cyclinA、Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3表达上调。结论:A3D8可能是通过影响p21/CDK2/cyclinA途径阻滞细胞周期达到抑制3种卵巢癌球形体形成细胞增殖的结果,并且可通过线粒体途径促进细胞凋亡。
- 许静静杜涌瑞张秋月顾欣谷超李凤舞邓为民
- 关键词：抗原单克隆卵巢肿瘤细胞增殖
- TNFSF15表达下调或缺失对卵巢癌组织中肿瘤新血管形成的影响
- 2012年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子超家族-15(TNFSF15)在人卵巢癌标本中的表达及在小鼠体内TNFSF15对卵巢癌血管生成及卵巢癌生长的影响。方法:应用免疫组化法检测正常组(12例)、卵巢癌组(94例)中TNFSF15的表达情况及微血管密度(MVD);雌性C57BL/6小鼠24只随机分为对照组、重组TNFSF15注射组(实验组)、TNFSF15-shRNA处理组(A组)、shRNA-对照组(B组),每组6只,各组均采用皮下注射ID8细胞制备小鼠荷瘤模型,实验组采用腹腔注射重组TNFSF15蛋白,A、B组采用TNFSF15-shRNA干扰其内源性表达的方法,通过检测小鼠肿瘤组织MVD值并测量肿瘤体积大小,观察其对小鼠卵巢癌细胞系ID8在小鼠C57BL/6体内血管生成及肿瘤生长的影响。结果:与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织标本中TNFSF15表达显著降低(P<0.01),且Ⅲ/Ⅳ期TNFSF15阳性表达率较Ⅰ/Ⅱ期降低(P<0.05);实验组较对照组小鼠肿瘤组织中MVD值降低且肿瘤体积减小(P<0.05),而A组较B组MVD值升高且肿瘤体积增大(P<0.05)。结论:卵巢癌微环境中TNFSF15表达下调或缺失是肿瘤新血管形成的前提条件。
- 宋娟张秋月顾欣许静静李凤舞谷超邓为民
- 关键词：卵巢肿瘤免疫组织化学新血管形成
