天津市科技发展战略研究计划项目(05YFGHHZ00200)
- 作品数：9 被引量：23H指数：4
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- 相关机构：天津科技大学韶关学院更多>>
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- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程理学更多>>
- 重组毕赤酵母发酵牛肉风味肽的中试研究被引量：7
- 2008年
- 研究分泌表达16拷贝牛肉风味肽(beefy meaty peptide,BMP)毕赤酵母工程菌株(Pichia pastoris GS115-16B2)的500L发酵罐中试发酵工艺。在500L发酵罐中采用三步发酵法进行了3批次中试发酵实验,设定菌体培养阶段温度为30℃,pH5.0,诱导表达阶段温度为28℃,pH3.0。在发酵过程中通过调节搅拌速度、通气量和罐压等措施来使DO维持在20%～35%左右,总共发酵126h(诱导时间为96h),当诱导88h后(发酵118h),600nm波长下的光密度值(OD600)达到184.5,菌体湿重达到318.7g/L,目的产物BMP的表达量达到最高为172mg/L,实现了BMP的高效表达。通过中试发酵初步建立了工程菌P.pastoris GS115-16B2的中试发酵工艺,为BMP的进一步研究开发奠定了良好基础。
- 曾松荣王艳萍杨明
- 关键词：毕赤酵母工程菌
- 毕赤酵母表达风味强化肽的分离与纯化
- 2011年
- 为了开发新型风味强化剂,采用硫酸铵分段盐析法、中空纤维超滤、阴离子交换树脂分离等方法,对构建的工程菌P.,postoris GS115-16B2发酵表达的16拷贝风味强化肽的分离纯化效果进行研究.实验结果表明,分离纯化最佳方法为:首先使用中空纤维进行超滤浓缩,经过两次稀释过滤浓缩后的浓缩液再采用离子交换树脂DEAE–52进一步分离纯化.经SDS-PAGE检测,纯化后16拷贝风味强化肽的平均纯度可达93.19%.
- 田雪张宝持白小佳王艳萍
- 关键词：毕赤酵母盐析离子交换树脂分离纯化
- 牛肉风味强化肽(BMP)表达载体的构建被引量：8
- 2008年
- 牛肉风味强化肽(Beefy Meaty Peptide,BMP)最初是从牛肉木瓜蛋白酶的水解物中分离得到的八肽,它与味精和盐具有较好的协同作用,可以呈现出牛肉风味.为了能够大量、廉价地得到这种风味小肽物质,本文根据毕赤酵母密码子偏爱性设计出4拷贝头尾相连的BMP表达基因,并将其进行体外串联,得到8拷贝、12拷贝和16拷贝的BMP表达基因,将其插入到表达载体pPIC9,从而得到4种不同的毕赤酵母的表达载体.
- 王艳萍高文侯建华孟琦
- 关键词：串联基因
- 牛肉风味强化肽(BMP)在毕赤酵母中的高效分泌表达被引量：5
- 2008年
- 牛肉风味强化肽(BeefyMeaty Peptide,BMP)是从牛肉的木瓜蛋白酶水解物中分离得到的一种风味强化八肽,与食盐、MSG有较好的协同呈味的作用,能增强鲜味。将BMP串联基因整合在毕赤酵母GS115基因组中,获得工程菌株P.pastoris GS115-4BMP、P.pastoris GS115-8BMP、P.pastoris GS115-12BMP和P.pastoris GS115-16BMP。将工程菌在BMMY培养基中诱导表达后的蛋白抽提物利用Tricine-SDS-PAGE电泳检测,结果表明:构建的工程菌可以高效表达4拷贝、8拷贝、12拷贝和16拷贝的BMP,为BMP的高效表达和制备奠定了良好的基础。
- 白小佳高文王艳萍
- 关键词：毕赤酵母串联基因
- 发酵液中牛肉风味肽分离纯化方法的比较研究被引量：4
- 2007年
- 使用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对重组酵母发酵液中一种牛肉风味肽(BMP)的稳定性进行了研究,并分别运用D301离子交换层析和Sephadex G-25凝胶过滤层析对其进行了分离纯化,最后利用RP-HPLC对目标肽进行分析检测。结果表明,在pH值为7.4条件下,发酵液中的目标肽于室温下放置0h～8h后仍呈现良好的稳定性。分离纯化结果显示,Sephadex G-25凝胶过滤层析的分离纯化效果优于D301离子交换层析,更适合于分离复杂体系发酵液中的风味肽。
- 杨超杨明韩英素林伟利曾松荣高辉王艳萍
- 关键词：稳定性离子交换层析凝胶过滤层析分离纯化
- 表达牛肉风味肽的重组毕赤酵母部分生物学特性的研究被引量：1
- 2010年
- 对分泌表达16拷贝牛肉风味肽毕赤酵母工程菌株)的生物表型、生长特性、表达特性及遗传稳定性等进行了研究。结果表明:该重组菌株的表型为Mut+;在5L发酵罐中,采用BSM培养基,设定适合的菌体培养温度和pH值,通过调节搅拌速度、通气量和罐压等措施使溶氧(DO)维持在20%～35%,当诱导90h后(发酵110h),目的产物BMP的表达量达到最高为54mg/L,是其摇瓶水平的5.4倍;遗传稳定性分析实验及PCR检测结果证明,重组菌株具有良好的遗传稳定性和重组蛋白表达的稳定性。
- 曾松荣王艳萍杨明
- 关键词：毕赤酵母工程菌生物学特性
- 利用GAP启动子在毕赤酵母中表达牛肉风味强化肽被引量：3
- 2014年
- 牛肉风味强化肽是1种从牛肉木瓜蛋白酶的水解物中分离得到的风味强化八肽。为了提供能够大量且廉价得到这种小肽物质的表达基因,本实验室工作人员构建以甲醇为诱导物并带有16拷贝BMP基因的表达载体pPIC9-16BMP。本文为了提高食品的安全性,避免甲醇作为诱导物,探索用GAP启动子(PGAP)取代AOX1启动子(PAOX1),在毕赤酵母中组成型表达外源蛋白的可能性。应用PCR方法从毕赤酵母染色体中扩增GAP启动子,以其取代诱导型表达载体pPIC9-16BMP上的PAOX1,构建了组成型表达载体pGAP9-16BMP。转化毕赤酵母GS115,对获得的高拷贝转化子毕赤酵母GS115(pGAP9-16BMP)进行组成型表达,并用SDS-PAGE检测到目的产物。
- 王金菊孟琦张永生王菁蕊王艳萍
- 关键词：GAP启动子组成型表达毕赤酵母
- 毕赤酵母16B2菌株表达牛肉风味肽发酵条件的优化被引量：2
- 2008年
- 牛肉风味强化肽(BMP)最初是从牛肉的木瓜蛋白酶水解物中分离得到,其一级结构为:Lys-Gly-Asp-Glu-Glu-Ser-leu-Ala。BMP与食盐、MSG有较好的协同呈味的作用,并且具有很好的热稳定性,适合于食品工业生产中的热处理要求。因此,BMP有望代替MSG成为新一代风味强化剂。文章研究了由毕赤酵母胞外表达多拷贝牛肉风味肽的摇瓶发酵条件。确定最佳表达条件为:Yeast Nitrogen Base(YNB)的初始浓度为1%,诱导期pH为5.5,每24h添加1%的甲醇,诱导时间96h,多拷贝BMP的产量可达到约0.162g/L。
- 王艳萍杨明高文曾松荣林伟利
- 关键词：毕赤酵母发酵
- 表达牛肉风味强化肽P.postoris GS115(pGAP9-16BMP)摇瓶发酵条件的优化
- 2010年
- 从碳源种类及质量浓度、氮源质量浓度、温度、pH等方面对构建的工程菌P.postoris GS115(pGAP9-16BMP)摇瓶发酵条件进行了优化.结果表明,最佳表达条件为:甘油30 g/L,蛋白胨40 g/L,酵母粉20 g/L,挡板三角瓶装液量为30%,菌体生长阶段控制温度32℃,初始pH 6.0,培养96 h.在此条件下,牛肉风味强化肽BMP(Beefy Meaty Peptide)表达量最高为41.9 mg/L.
- 孟琦张宝持王金菊王艳萍
- 关键词：组成型表达毕赤酵母
