国家科技攻关计划(2002BA711A02-5)
- 作品数：3 被引量：20H指数：2
- 相关作者：王友亮杨晓仇玮祎吕娅歆程竞更多>>
- 相关机构：军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 肝细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立被引量：17
- 2004年
- 目的 构建在小鼠肝细胞中特异表达Cre重组酶的转基因小鼠。 方法 利用聚合酶链反应(PCR)获得小鼠肝细胞特异性启动子——白蛋白启动子,指导Cre重组酶在肝细胞中特异表达。通过受精卵显微注射的方法,将转基因载体导入小鼠受精卵中,获得转基因小鼠。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转基因小鼠中Cre重组酶转录的组织特异性,并将转基因小鼠与Smad4条件基因打靶小鼠进行杂交,利用PCR和Southern Blot进一步检测Cre重组酶在小鼠体内表达的组织特异性及其介导lox P位点之间发生重组的活性。 结果 获得了白蛋白启动子,构建了转基因载体pAlb-Cre。将转基因载体进行显微注射,共注射了837枚小鼠受精卵。PCR检测显示53只子代小鼠中有7只整合了Cre重组酶基因,Southern杂交结果证实共获得6只基因组上整合Cre重组酶基因的首建者小鼠。RT-PCR结果表明其中3只阳性小鼠的子代鼠在肝脏和睾丸中正确转录了外源基因。将在肝脏和睾丸中正确转录了外源基因的两只阳性鼠与Smad4条件基因打靶的小鼠杂交,通过PCR检测发现Cre转基因与Smad4条件基因打靶双阳性的子代鼠在肝脏中特异表达Cre重组酶,并能介导基因组中loxP序列间的基因重组,此结果通过Southern杂交得到了进一步证实。 结论 成功构建了在小鼠肝细胞中特异表达Cre重组酶?
- 王友亮程萱崔芳程竞吕娅歆杨晓
- 关键词：肝细胞CRE重组酶转基因小鼠聚合酶链反应
- 消化道细胞表达Cre重组酶转基因小鼠的功能鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的:检测白蛋白启动子介导的Cre重组酶转基因小鼠Alb-Cre-2中Cre重组酶的组织分布及其在体内介导基因重组的作用。方法:将Alb-Cre小鼠与Smad4条件基因打靶小鼠交配,利用PCR对Cre重组酶介导重组的组织特异性进行检测;然后,将Alb-Cre-2转基因小鼠与ROSA26报告小鼠交配,利用LacZ染色对双转基因阳性子代小鼠进行检测。结果:PCR结果显示心、肺、胰、脑及消化道中Cre重组酶介导的Smad4基因发生重组;LacZ染色进一步表明Cre重组酶在肝细胞、胃壁细胞、空肠潘氏细胞、回肠杯状细胞、大肠杯状细胞、大肠柱状细胞及空泡细胞中特异性表达,并介导ROSA位点LoxP序列间的重组。结论:Alb-Cre-2转基因小鼠在消化道中具有一定的组织特异性,只在胃壁细胞、空肠潘氏细胞、回肠杯状细胞、大肠杯状细胞,大肠柱状细胞及空泡细胞等细胞类型中特异性表达,并能在体内成功地介导这些消化道上皮细胞基因组上LoxP位点间的重组,是一种研制在消化道特定细胞中特异性基因剔除小鼠的良好工具小鼠。
- 仇玮祎王友亮时令孙岩松滕艳杨晓
- 关键词：壁细胞潘氏细胞杯状细胞CRE重组酶转基因小鼠
- HBV转基因小鼠研究进展被引量：1
- 2005年
- 流行病学研究证实,作为全世界第五位最常见的恶性肿瘤,肝细胞癌(HCC)的发生与人乙型肝炎病毒(HBV)有直接关联,我国尤甚.HBV是影响人类生存最重要的病毒之一,全世界至少有3.5亿人感染,它是一种部分双链的环状DNA病毒,具有随机整合入宿主基因组中的能力.通常认为,乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和转录反式激活蛋白(HBx)是HBV病毒基因组中比较重要的致病因素,但二者的功能却有很大差异[1].由于HBV作用的靶分子目前还不清楚,HBsAg和HBx是通过直接还是间接的作用导致HCC及其作用的分子机制仍旧在争论中.
- 仇玮祎王友亮杨晓
- 关键词：HBV转基因小鼠乙肝病毒表面抗原病毒基因组流行病学研究DNA病毒
