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国家自然科学基金(30871172)

作品数:6 被引量:14H指数:3
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文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 6篇医药卫生

主题

  • 5篇肾小管
  • 5篇小管
  • 4篇细胞
  • 3篇上皮
  • 3篇上皮细胞
  • 3篇肾间质
  • 3篇肾间质纤维化
  • 3篇转化生长因子
  • 3篇纤维化
  • 3篇化生
  • 3篇间质
  • 3篇间质纤维化
  • 3篇CIP4
  • 2篇生长因子Β
  • 2篇转化生长因子...
  • 2篇转化生长因子...
  • 2篇连环素
  • 2篇环素
  • 2篇Β连环素
  • 1篇上皮细胞转分...

机构

  • 5篇华中科技大学

作者

  • 5篇曾锐
  • 5篇徐钢
  • 4篇周巧丹
  • 4篇白寿军
  • 4篇张亚敏
  • 4篇许楚瓯
  • 4篇裴广畅
  • 3篇刘丽丽
  • 2篇刘晓城
  • 2篇韩敏
  • 2篇李彩霞
  • 2篇葛树旺
  • 1篇周欢
  • 1篇张娟
  • 1篇刘萍
  • 1篇罗昀
  • 1篇位红兰
  • 1篇寇沛
  • 1篇刘林

传媒

  • 5篇中华肾脏病杂...
  • 1篇Journa...

年份

  • 1篇2012
  • 2篇2011
  • 1篇2010
  • 2篇2009
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
肾间质纤维化中DJ-1抑制抗纤维化因子PTEN的表达被引量:5
2009年
目的观察肾小管上皮细胞转分化过程中PTEN的表达和分布,并研究上调DJ-1对PTEN表达和分布及P13K—Akt通路活化的影响。方法以人。肾小管上皮细胞为研究对象,10μg/L TGF—β1刺激72h诱导人肾小管上皮细胞转分化;Western印迹法检测正常组和TGF—β1干预组细胞内PTEN、E—cadherin和α-SMA蛋白表达;RT—PCR法检测两组细胞内PTEN mRNA表达水平。脂质体法介导pEGFP—N1-DJ-1或空载体转染人肾小管上皮细胞,倒置荧光显微镜和Western印迹鉴定转染效率后,Western印迹法检测正常组、pEGFP-N1-DJ-1转染组和空载体转染组细胞内PTEN蛋白表达;RT—PCR法检测各组细胞内PTEN mRNA表达。pEGFP-N1-DJ-1转染前1h用P13K抑制剂LY294002预处理,Western印迹检测正常组、pEGFP.N1一DJ-1转染组和空载体转染组及LY294002预处理1h后pEGFP-N1-DJ-1转染组的p-Akt和Akt蛋白的表达。激光共聚焦显微镜下观察正常组、TGF-β1干预组和pEGFP—N1-DJ.1转染组细胞内PTEN蛋白的分布。结果正常组细胞表达E—cadherin和PTEN,几乎不表达α-SMA;TGF—β1干预组α—SMA表达显著高于正常组(P〈0.05),而E—cadherin表达显著低于正常组(P〈0.05),PTEN mRNA和蛋白表达均显著低于正常组(P〈0.05)。pEGFP-N1-DJ-1和空载体转染后,细胞绿色荧光表达均在80%以上;pEGFP—N1-DJ-1转染组细胞内DJ-1表达显著高于正常组(P〈0.05),而PTEN mRNA和蛋白表达均显著低于正常组(P〈0.05);pEGFP—N1-DJ-1转染组p-Akt表达显著高于正常组(P〈0.05),但经LY294002干预后与正常组表达基本一致。正常组细胞内PTEN分布于细胞质和细胞核;TGF—β1干预组细胞质内PTEN几乎完全消失,而细胞核PTEN略有增加;pEGFP—N1-DJ-1转染组细胞核表达PTEN,但细胞质几乎无PTEN表达,这与TGF—β1干预组相似。结论肾间质纤维化中高表达DJ-1可抑制PTEN表达,并促进P13K—Akt通路�
位红兰曾锐张娟罗昀刘林徐钢
关键词:肾小管DJ-1PTENP13KAKT
CIP4在肾间质纤维化中的表达及作用被引量:5
2010年
目的 观察骨架调节蛋白CIP4(Cdc42 interacting protein-4)在肾纤维化过程中表达水平、细胞内定位及高表达的CIP4基因对人肾小管上皮细胞E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达和β连环素(β-catenin)酪氨酸磷酸化水平的影响.方法 体外实验以人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)为研究对象,10 μg/L TGF-β1刺激72 h诱导HK-2细胞转分化;Western印迹法检测各组细胞内CIP4、E-cadherin、vimentin蛋白的表达;RT-PCR法检测细胞内CIP4 mRNA表达水平;激光共聚焦显微镜观察CIP4在细胞内定位.体内实验以SD大鼠为研究对象,5/6肾切除法制作慢性肾纤维化模型;常规检测BUN和Scr水平;Masson染色检测肾组织纤维化水平;免疫组化法检测肾组织内CIP4蛋白的表达和分布.脂质体法介导含野生型CIP4的重组真核表达质粒pcDNA3.1-CIP4或pcDNA3.1-Zeo(空载体)转染HK-2细胞,Wetern印迹法检查转染的效率.稳定转染成功后,Wetern印迹法检测正常组、pcDNA-CIP4转染组和空载体转染组细胞内E-cadherin、vimentin蛋白的表达和β-catenin酪氨酸磷酸化水平.结果 正常HK-2细胞表达E-cadherin和少量的CIP4,几乎不表达vimentin.TGF-β1干预组细胞vimentin蛋白表达增加(P<0.05),E-cadherin蛋白表达减少(P<0.05),CIP4 mRNA和蛋白表达均显著增多(P<0.05).CIP4在正常细胞内大部分在细胞膜,少量在细胞质,在转分化的HK-2细胞表达显著增多,并向细胞质和细胞核聚集.假手术组大鼠肾功能正常,肾组织内未见明显纤维化组织,CIP4在肾小管表达较少,肾小球内几乎不表达;模型组大鼠BUN和Scr增高,肾组织内可见明显纤维化组织,CIP4在肾小管表达明显增加.pcDNA3.1-CIP4转染组较正常组和空载体转染组细胞内CIP4表达增多(P<0.05),β-catenin酪氨酸磷酸化水平和vimentin蛋白表达增加(P<0.05),而E-cadherin蛋白表达减少(P<0.05).结论 CIP4高表达可能参与肾�
白寿军张亚敏周巧丹曾锐李彩霞裴广畅许楚瓯葛树旺周欢徐钢刘晓城
关键词:纤维化肾小管上皮细胞Β连环素CIP4
CIP4对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响被引量:3
2011年
目的观察骨架调节蛋白CIP4(Cdc42 interacting protein 4)对转化生长因子β1(TGF—β1)诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化(EMT)的影响,并探讨其产生的机制。方法10μg/L TGF—β1刺激72h诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)向间充质转分化。Western印迹法检测各组细胞内E—cadherin和α-SMA蛋白的表达。倒置显微镜观察细胞形态的变化。根据GenBank人CIP4的完全cDNA序列,设计1条特异性干扰CIP4表达的RNA片段(CIP4-siRNA)和含野生型CIP4的重组真核表达质粒(pcDNA3.1-hCIP4),利用lipofactamine2000将其转染HK-2细胞。Western印迹法检测对照组、TGF—B1刺激组、CIP4-siRNA转染组、pcDNA3.1-CIP4转染组细胞内CIP4、E—cadhefin和α-SMA蛋白的表达,共聚焦显微镜观察E—cadhefin和仪.SMA蛋白的分布改变;用P13K—Akt特异性抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)1panol/L干预TGF—β1刺激的HK-2细胞48h,Western印迹法检测对照组和干预组CIP4表达的变化。结果TGF一[31干预后HK一2细胞E—cadhefin蛋白表达显著减少(P〈0.05),α—SMA蛋白表达显著增多(P〈0.05),细胞形态由典型的上皮细胞向肌成纤维细胞转变,表明TGF-β1诱导。肾小管上皮细胞EMT模型成功。CIP4-siRNA抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞表达CIP4后,E—cadhenn蛋白表达显著增多(P〈0.05),α—SMA蛋白表达显著减少(P〈0.05),部分逆转了上述TGF—β1诱导的肾小管上皮细胞EMT。pcDNA3.1-hCIP4转染使CIP4高表达后,HK-2细胞E—cadhefin蛋白表达显著减少(P〈0.05),α-SMA蛋白表达显著增多(P〈0.05),诱导了肾小管上皮细胞EMT。用渥曼青霉素干预TGF—β1刺激的HK-2细胞48h,CIP4可能蛋白表达显著减少(P〈0.05)。结论TGF—β1通过P13K—Akt途径上调CIP4表达,CIP4可能进一步参与TGF—β1诱导的肾小管上皮细胞EMT过程。
白寿军张亚敏曾锐许楚瓯刘丽丽周巧丹李彩霞裴广畅葛树旺徐钢刘晓城
关键词:转化生长因子Β1肾小管上皮细胞CIP4PI3K-AKT
Role of Protein Kinase C in Advanced Glycation End Products-induced Epithelial-Mesenchymal Transition in Renal Proximal Tubular Epithelial Cells被引量:2
2009年
The role of protein kinase C (PKC) activation in advanced glycation end products (AGEs)-induced epithelial-mesenchymal transition in renal proximal tubular epithelial cells was investigated. HKC cells were divided into three groups: normal group, AGE-BSA group (100 mg/L AGE-BSA) and AGE-BSA+PKC inhibitor (10 μmol/L chelerythrine chloride) group. PKC activity was measured by PKC assay kit. The expression of Vimentin, and phosphorylated β-catenin was detected by using Western blotting, and the content of TGF-β1 was examined by ELISA method. The intracellular disposition of Vimentin was observed by fluorescence microscopy. As compared with normal group, PKC activity was increased significantly in AGE-BSA group. The expression of Vimentin, phosphorylated β-catenin, and TGF-β1 was enhanced significantly in AGE-BSA group. The expression of Vimentin, phosphorylated β-catenin, and TGF-β1 was significantly blocked by chelerythrine chloride. High expression of Vimentin, phosphorylated β-catenin, and TGF-β1 induced by AGE-BSA may be mediated via the activation of PKC signal transduction pathway.
葛树旺曾锐罗昀刘琳位红兰张娟周欢徐钢
肾小管上皮细胞转分化中CIP4与β连环素的相互作用
2012年
目的探讨在大鼠肾脏纤维化组织中CIP4(Cdc42-interactingprotein4)的表达和分布,以及在转化生长因子B1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)-间质细胞转分化(EMT)模型中,CIP4与β连环素(β—catenin)之间的相互作用关系。方法体内实验用sD大鼠5/6肾切除法建立肾纤维化模型,根据Masson染色结果观察肾脏组织纤维化程度;用免疫组织化学染色观察CIP4在模型组和假手术组的表达和分布。体外实验用HK-2细胞株作为研究对象,使用TGF-β1(10μg/L)刺激72h建立EMT模型。Western印迹法检测E钙黏蛋白(E—cadherin)和a平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达变化,同时检测CIP4和β—catenin的表达水平;免疫荧光法观察CIP4和β-catenin在两组细胞中的共定位关系;免疫共沉淀方法检测CIP4和β—catenin之间的相互作用关系;用脂质体2000将质粒pcDNA4.0-CIP4瞬时转染至HK-2细胞,Western印迹法检测高表达CIP4对上述指标的影响,以及高表达CIP4与TGF-β1刺激对β—catenin入核的影响。结果体内实验,CIP4在假手术组和5/6肾切除组大鼠肾组织中都有表达,在纤维化的肾脏组织中表达上调,主要分布在肾小管中,且在上皮细胞侧基底膜处聚集。体外实验,与对照组相比,EMT模型组HK-2细胞CIP4和OL—SMA蛋白表达明显增高,分别是对照组的1.8倍和2.5倍,同时E—cadherin表达量减少(均P〈0.05),B—catenin表达量无明显变化。免疫荧光结果显示对照组CIP4与β-catenin主要分布于细胞膜,且在细胞膜上存在部分共定位;模型组中,CIP4与β-catenin在细胞膜上分布减少,细胞核内表达增多,细胞核内存在部分共定位现象。免疫共沉淀结果表明在以上两组细胞中,CIP4和β—catenin均存在相互作用。单独转染CIP4目的基因质粒的HK-2细胞中,CIP4与α-SMA表达上调,分别为对照组的3.5倍与1.7倍,并
许楚瓯张亚敏刘萍周巧丹曾锐白寿军裴广畅韩敏刘丽丽徐钢
关键词:纤维化转化生长因子Β1Β连环素CIP4转分化
Erbin在肾间质纤维化中的表达和作用被引量:2
2011年
目的探讨Erbin在肾脏间质纤维化中表达量的变化及上调Erbin对转化生长因子β1(TGF—β1)诱导大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)转分化的影响。方法体内实验采用SD大鼠5/6肾切除法建立肾纤维化动物模型,收集并检测各组血清中Scr、BUN水平;Masson染色观察肾问质纤维化程度;免疫组化及Western印迹检测Erbin的分布与表达。体外实验采用TGF—β1(10μg/L)刺激NRK52E细胞72h建立上皮细胞一间充质转分化(EMT)细胞模型;免疫荧光及Western印迹法检测E钙黏蛋白(E-cadhefin)和仪平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化;RT—PCR及Western印迹法检测Erbin的表达变化。用脂质体2000将质粒Prk5-mye-Erbin瞬时转染至NRK52E细胞,Western印迹法观察上调Erbin表达后对上述各种指标的影响。结果(1)假手术组大鼠肾功能正常[Scr(33.96±7.28)μmol/L、BUN(8.11±2.55)mm01/L],Masson染色未见肾间质纤维化,Erbin在肾小管表达较少;模型组大鼠Scr[(140.52±61.11)μmol/L1、BUN[(34.23±7.66)mmol/L]均显著高于假手术组(均P〈0.05),肾间质可见明显纤维化,Erbin在肾小管表达也明显增加,是假手术组的2.9倍(P〈0.01)。(2)正常NRK52E细胞表达E—cadhefin,少量表达Erbin和α-SMA。TG-β 1刺激后,NRK52E细胞E—cadhefin表达显著减少,Erbin和α-SMA则表达增加(均P〈0.05);而转染质粒Prk5-myc-Erbin可逆转TGF-β1诱导的NRK52E细胞E-cadhefin表达下调,并可抑制d—SMA表达上调(均P〈0.05)。结论Erbin在肾间质纤维化中表达增加,上调Erbin表达可抑制TGF—B1诱导NRK52E发牛EMT,提示Erbin在肾脏纤维化中可发挥保护作用。
周巧丹寇沛许楚瓯曾锐白寿军裴广畅张亚敏韩敏刘丽丽徐钢
关键词:纤维化肾小管上皮细胞ERBIN
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