国家自然科学基金(30200064)
- 作品数：11 被引量：41H指数：4
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- 小鼠骨髓内皮细胞条件培养液体外扩增胚胎及成体造血干/祖细胞的差异及其机制探讨被引量：6
- 2004年
- 本研究比较小鼠骨髓内皮细胞条件培养液 (mBMEC CM)联合FL和TPO对卵黄囊和骨髓造血干 祖细胞体外生长的影响 ,并对其机制进行探讨。取卵黄囊和骨髓单细胞悬液 ,对照组中加入含 10 %FBS的DMEM ,实验组分别加入 10 %mBMEC CM ,FL(5ng ml)和TPO(2ng ml) ,10 %mBMEC CM复合FL和TPO培养 2 4小时后进行集落培养 ,计数CFU GM和HPP CFC的集落数。应用AtlascDNAExpressionArray对卵黄囊和骨髓造血细胞表达的细胞因子受体进行检测。结果表明 :mBMEC CM能扩增卵黄囊和骨髓CFU GM和HPP CFC ,其与FL和TPO联合后扩增能力明显增强 ;mBMEC CM扩增骨髓CFU GM和HPP CFC的能力明显强于其扩增卵黄囊CFU GM和HPP CFC的能力。检测到小鼠卵黄囊及骨髓造血细胞存在差异表达的细胞因子受体 ;卵黄囊造血细胞表达PDGF Rβ ,PDGF Rα和促肾上腺皮质激素释放因子受体 ,而在骨髓造血细胞中未检测到上述受体的表达 ;在骨髓造血细胞中表达的IFN γR ,GM CSFR ,多巴胺D2受体和卵泡刺激素受体则未在卵黄囊造血细胞中检测到mRNA的表达。结论 :mBMEC CM能支持卵黄囊和骨髓造血祖细胞的体外扩增 ,其与FL和TPO联合后扩增能力明显增强 ;mBMEC CM对骨髓造血祖细胞表现出更强的扩增作用。
- 那晓东王绮如赵自平
- 关键词：骨髓卵黄囊造血调控体外扩增
- 人卵黄囊间质干细胞的分离纯化及诱导成脂的实验研究
- 2003年
- 目的 :分离纯化及体外定向诱导人卵黄囊间质干细胞 (YS -MSC)分化为脂肪细胞。方法 :显微分离人卵黄囊 ,经酶消化得到卵黄囊细胞 ,卵黄囊细胞经贴壁培养、传代纯化得到人YS -MSC ,流式细胞仪检测YS -MSC表面抗原表达 ,钙钴法测定碱性磷酸酶 (AKP)活性 ;地塞米松、消炎痛、胰岛素定向诱导YS -MSC分化为脂肪细胞。油红O检测中性脂肪。结果 :人卵黄囊间质干细胞易于分离、纯化 ,体外培养增殖潜能大。卵黄囊间质干细胞CD2 9、CD4 4、CD16 6及CD10 5表达阳性 ,CD34、CD4 5和CD86为阴性 ;AKP弱阳性。卵黄囊间质干细胞经成脂诱导转化为大小不等的园形或椭圆形细胞 ,可见胞浆内有少量微小脂滴形成 ,随时间延长 ,胞浆中脂滴相互融合 ,胞核被挤于细胞的一侧 ,经油红O染色脂滴染橘红色 ,符合脂肪细胞的生物学特征。结论 :人卵黄囊间质干细胞与成体间质干细胞表型一致 ,在体外可以分化为脂肪细胞。
- 那晓东朱美玲赵自平余伟华张秀明项鹏李树浓
- 关键词：干细胞胚胎发育分化卵黄囊
- 小鼠卵黄囊内皮细胞的体外培养及其细胞因子表达的检测被引量：1
- 2003年
- 目的 :分离纯化小鼠卵黄囊内皮细胞 (YS -EC) ,并检测其细胞因子的表达。方法 :显微分离小鼠卵黄囊 ,经酶消化得到卵黄囊细胞 ,卵黄囊细胞经贴壁培养、传代纯化得到小鼠YS -EC ,酵母碎片吞噬实验检测YS-EC的吞噬功能 ,免疫组化方法检测YS -ECvWF的表达 ,应用AtlascDNAExpressionArray对卵黄囊内皮细胞表达的细胞因子进行检测。结果 :经体外培养纯化的小鼠卵黄囊内皮细胞大小形态均一 ,为圆形或卵圆形贴壁细胞 ,具有克隆形成能力 ,在传代培养过程中可形成血管条索样结构 ,具有吞噬功能 ,表达vWF ,符合内皮细胞的生物学特征。小鼠卵黄囊内皮细胞中有转化生长因子 β2 (TGF - β2 )、干扰素γ(IFN -γ)、胎肝激酶配基 (FL)、骨形态发生蛋白- 4 (BMP - 4 )、巨噬细胞炎性蛋白 - 1β(MIP - 1β)、骨形态发生蛋白 - 2A (BMP - 2A)、fms样酪氨酸激酶 2 (FLT2 )、内皮素 2 (endothelin 2 )、胸腺素β10 (thymosinβ10 )、白细胞介素 6 (IL - 6 )、白细胞介素 9(IL - 9)、白细胞介素 13(IL - 13)、小分子可诱导性化学因子A5 (SCYA5 )和酰基辅酶A结合蛋白 (ACBP)等细胞因子mRNA的表达。结论 :体外培养纯化的小鼠卵黄囊内皮细胞符合内皮细胞的生物学特征 ,有TGF - β2、IFN -γ、FL、BMP - 4、MIP - 1β、BMP - 2A?
- 那晓东王绮如赵自平
- 关键词：卵黄囊细胞因子类内皮细胞
- 抗人成骨肉瘤单克隆抗体-人血清白蛋白-甲氨蝶呤偶联物的抗肿瘤作用被引量：11
- 2004年
- 目的 应用化学交联法制备抗人成骨肉瘤单克隆抗体 (OSMcAb) 人血清白蛋白(HSA) 甲氨蝶呤 (MTX)偶联物并进行体外细胞毒性实验。方法 采用碳二亚胺、活化酯及SPDP法制备OSMcAb HSA MTX间接偶联物 ;同时应用活化酯法制备出OSMcAb MTX ;并进行体外靶细胞结合实验、细胞毒性实验和集落形成抑制实验。结果 化学交联法制备出的偶联物的性质及药物含量稳定。抗体蛋白活性保存良好。集落形成抑制实验中 ,OSMcAb HSA MTX、OSMcAb MTX的IC5 0 (μg/L)分别为 2 .5 5 0± 0 .114、2 .710± 0 .14 5 ,它们杀伤作用均明显大于游离MTX(IC5 0为 5 .5 10± 1.5 2 9) (P <0 .0 5 )。 2 4h细胞毒性实验中 ,OSMcAb HSA MTX、OSMcAb MTX的对MG 63细胞、T2 4细胞的IC5 0 (μg/L)分别为 66.5 :3 785和 79.8:3 0 2 5 ,偶联物杀伤作用在靶细胞明显强于非靶细胞 (P <0 .0 1)。结论 以化学交联法制备OSMcAb HSA MTX偶联物方法可行 ;偶联物OSMcAb HSA MTX在体外具有良好的抗肿瘤作用。
- 詹新立周江南赵自平蒋欣李官成
- 关键词：人血清白蛋白甲氨蝶呤偶联物抗肿瘤作用
- 胶原表面改性CPC对小鼠卵黄囊间质干细胞体外生长与BMP-2表达的影响被引量：1
- 2005年
- 目的 观察胶原表面改性磷酸钙骨水泥 (CPC)对小鼠卵黄囊间质干细胞体外生长与骨形态发生蛋白 2 (BMP 2 )表达的影响。方法 分离、纯化及传代培养小鼠卵黄囊间质干细胞 ,用0 .5 %Ⅰ型胶原对CPC进行表面改性 ,检测胶原表面改性CPC对卵黄囊间质干细胞增殖分数的影响 ,扫描电镜观察卵黄囊间质干细胞在胶原表面改性CPC表面的黏附生长情况 ,逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)检测与胶原表面改性CPC共培养卵黄囊间质干细胞BMP 2mRNA的表达。结果 胶原表面改性CPC有利于卵黄囊间质干细胞黏附生长 ,共培养 6d ,卵黄囊间质干细胞的增殖分数为 1.12 9,并可检测到BMP 2mRNA的表达。结论 胶原表面改性CPC能支持小鼠卵黄囊间质干细胞体外生长 ,并促进其BMP 2mRNA的表达。
- 赵自平那晓东蔡道章周江南
- 关键词：间质干细胞胶原卵黄囊BMP-2体外生长
- 超声脱细胞异种松质骨材料的抗原性与生物相容性被引量：4
- 2010年
- 背景:异种骨是一种复合组织,来源广泛,一直是骨修复研究领域热衷于制备、改良、开发的植骨材料,其抗原主要分布于骨组织的有核细胞,充分脱细胞是去除异种骨抗原的有效手段。目的:观察超声脱细胞异种松质骨材料的抗原性与生物相容性。方法:提取新鲜松质骨、常规材料和超声材料上清,检测抗原特异性淋巴细胞刺激增殖指数;将常规材料和超声材料分别植入SD大鼠体内,以假手术组做对照。流式细胞分析仪检测其外周血CD4+、CD8+淋巴细胞亚群的百分率及CD4+/CD8+淋巴细胞比值的变化;与骨髓基质细胞的接触培养,观察两种材料对基质细胞增殖指数的影响,扫描电镜观察骨髓基质细胞在超声材料和常规材料表面的黏附和增殖情况。结果与结论:新鲜松质骨刺激指数值最高,超声材料组刺激指数值接近于1,与常规材料组比较有显著性差异(P<0.05)。术后第2周,常规材料组CD4+T细胞亚群百分率为32.89%,与假手术组(28.72%)比较,差异有显著性意义(P<0.05),超声材料组与假手术组比较无显著差异(P>0.05);常规材料组和超声材料组CD8+T细胞亚群百分率分别为16.28%和13.49%,两组差异有显著性意义(P<0.05),均高于假手术组(10.07%)(P<0.01),常规材料组和超声材料组CD4+/CD8+T细胞比值无显著性差异;2周后各组动物CD4+、CD8+T细胞亚群百分率逐渐回落,至术后6周3组之间差异无显著性意义。常规材料和超声材料对骨髓基质细胞的增殖均产生接触抑制效应,常规材料的抑制作用稍强,但差异无显著性意义(P>0.05)。扫描电镜观测骨髓基质细胞在超声材料表面黏附生长,培养至5d呈亚融合状态,细胞密度明显高于常规材料组。结果提示,实验所制备的超声材料,其抗原性较常规材料弱,有利于骨髓基质细胞的黏附生长,表现出良好的生物相容性。
- 赵自平蔡道章那晓东欧宣成吴冬冬
- 关键词：异种骨生物材料抗原性生物相容性
- 小鼠胎肝间充质干细胞的体外成骨诱导及复合陶瓷化骨的实验研究
- 2005年
- 目的探讨小鼠胚胎肝脏间充质干细胞的体外分离培养方法,并观察其成骨分化潜能及与陶瓷化骨支架材料的复合能力。方法将小鼠胎肝组织制成单细胞悬液行原代和传代培养,流式细胞仪检测其表面标志。用化学成骨诱导体系对纯化的胎肝间充质干细胞行成骨诱导,并进行成骨功能检测。将其与经过型胶原表面改性的陶瓷化骨复合培养,观察细胞在其上的黏附生长情况。结果原代培养的胎肝间充质干细胞,具有集落形成能力,为梭形或多角形,易于传代,传代细胞与原代细胞大小、形态相似。流式细胞仪检测表明,传代后的细胞CD29、CD44阳性,CD34、CD45阴性,表达间充质干细胞的特征标志。成骨诱导7d后碱性磷酸酶染色可见有较多阳性细胞,型胶原免疫组织化学染色呈强阳性;14d后,细胞碱性磷酸酶活性定量检测明显增高;28d后,矿化结节染色呈阳性。将细胞与经胶原表面改性后的煅烧陶瓷化骨复合培养,扫描电镜见载体上有大量细胞黏附于材料表面。结论小鼠胎肝间充质干细胞易于获取及传代;体外成骨诱导后可向成骨细胞方向分化;能在陶瓷化骨支架材料上黏附生长。
- 王剑龙周江南赵自平郑治
- 新型天然陶瓷化骨组织工程支架材料的制备和特性研究被引量：3
- 2004年
- 目的 作者用物理化学方法自制新型的陶瓷化骨材料 ,测试其理化性质及力学强度 ,为骨组织工程研究提供可供选择的支架材料。方法 将猪肋骨分为未处理骨、脱蛋白骨和脱蛋白脱脂骨三组 ,经不同煅烧温度及时间处理得到多种陶瓷化骨。用扫描电镜观察其形貌特征 ,用X -射线能谱和X -射线衍射分析材料成份 ,并对材料的力学性能进行分析测定。结果 各种处理所得到的陶瓷化骨保持原骨组织的天然网状孔隙系统 ;所含的原子均只有钙和磷 ,比值约 1 72 ;主要成份均为羟基磷灰石 ;90 0℃煅烧 2h以上条件所得陶瓷化骨中的羟基磷灰石呈细结晶状态 ,有较高抗压强度 ,90 0℃煅烧 1h以下条件所得骨抗压强度很低。结论 猪骨通过不同预处理后煅烧所得的陶瓷化骨理化性能相同 ,皆保持天然多孔结构 ,90 0℃煅烧 2h以上有较好抗压性能 ,仅含钙磷原子 ,化学成份为细结晶羟基磷灰石 ,但是否是一理想支架材料 ,尚需要进一步验证其降解性和组织相容性。
- 王剑龙郑治赵自平
- 关键词：骨组织工程
- 符合骨支架材料条件的陶瓷化骨的制备和性能研究被引量：5
- 2004年
- 目的:研究不同条件所形成的陶瓷化骨的理化性能,探讨合适的条件以使获得的陶瓷化骨满足骨支架材料所需的条件。并进一步探讨其生物学性能及细胞相容性。方法:不同预处理的猪肋骨进行分组,再经不同煅烧温度及时间处理得到多种陶瓷化骨;测定其理化性能和生物相容性。将小鼠间充质干细胞分别接种于单纯陶瓷化骨、Ⅰ型胶原改性的陶瓷化骨表面共培养,观察细胞在载体上的粘附生长情况。结果:各种处理所得到的陶瓷化骨主要成份均为羟基磷灰石;900℃煅烧2h以上条件所得陶瓷化骨有较高抗压强度,有良好的生物相容性和细胞相容性。胶原表面改性后的煅烧骨上细胞增殖较快。结论:不需通过预处理900℃煅烧2h以上条件所得的陶瓷化骨有较高抗压强度,有良好的生物相容性和细胞相容性,胶原改性后更有利于细胞的粘附和增殖,有望成为骨组织工程研究中理想的支架材料。
- 王剑龙郑治赵自平
- 关键词：陶瓷化骨抗压强度生物相容性胶原
- 复合bFGF的磷酸钙骨水泥对小鼠骨髓间质干细胞体外生长的影响被引量：3
- 2003年
- 目的 :观察复合bFGF的磷酸钙骨水泥对小鼠骨髓间质干细胞体外生长的影响。方法 :分离、纯化及传代培养小鼠骨髓间质干细胞 ,检测复合bFGF的磷酸钙骨水泥对骨髓间质干细胞集落产率和骨髓间质干细胞增殖分数的影响。结果 :单纯CPC对骨髓间质干间细胞增殖有抑制作用 ,复合bFGF的CPC不仅可抵消了单纯CPC对骨髓间质干间细胞增殖的抑制作用 ,还能促进其增殖 ,所形成的集落数为空白对照组的 10 6 .7% ,增殖分数达 1.0 92。结论 :复合bFGF的CPC对骨髓间质干细胞的增殖有促进作用。
- 郑治赵自平王剑龙
- 关键词：磷酸钙骨水泥BFGF
