中国博士后科学基金(20060400199)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：陈刚韩江董家鸿杨日高李学成更多>>
- 相关机构：成都军区昆明总医院解放军第324医院中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 携带IL-13基因大鼠肝干细胞系的建立被引量：3
- 2009年
- 目的构建包含IL-13基因片段的慢病毒载体,培养IL-13基因工程大鼠肝干细胞(肝卵圆细胞,HOC,WB-F344细胞),将IL-13基因重组至WB-F344细胞中,使之可分泌大鼠IL-13。方法人工合成大鼠IL-13基因,利用pWPXL-MOD(TG-005)载体构建包含大鼠IL-13基因片段的质粒;制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装元件载体质粒,四质粒载体(组成为pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G及目的穿梭质粒)分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,培养48 h后,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,定量PCR检测病毒滴度。将构建好的慢病毒感染WB-F344细胞,5 d后采用real-time PCR检测WB-F344细胞中IL-13的表达水平,Western blot检测重组蛋白表达水平。结果成功构建了IL-13过表达慢病毒载体,并获得IL-13基因工程大鼠肝干细胞;将IL-13基因重组至WB-F344细胞基因组中,并可在细胞中进行转录,慢病毒感染WB-F344细胞存在IL-13 mRNA表达,可分泌大鼠IL-13。结论构建的基因工程WB-F344细胞能显著分泌大鼠IL-13,感染后的WB-F344细胞的IL-13表达水平显著高于感染前,满足动物实验要求。
- 陈刚韩江刘永康艾军华董家鸿
- 关键词：慢病毒白介素-13肝卵圆细胞肝干细胞
- 携带IL-13基因肝干细胞对冷缺血大鼠移植肝脏保护作用的研究被引量：4
- 2010年
- 目的以基因工程干细胞治疗的方式来改善缺血-再灌注状况,使移植肝脏更好地耐受缺血-再灌注,以减少移植术后的并发症,延长移植器官存活期。方法利用已建立的Wistar大鼠冷缺血原位肝移植(OLT)模型,术中经受体大鼠门静脉输入IL-13基因修饰的或未修饰的肝卵圆细胞(HOC)即转染组和未转染组,分别于术后1、3、7及14d检测受体大鼠肝脏功能变化、组织学变化、胆管上皮细胞(BEC)的增殖情况、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达、肝组织中HO-1 mRNA的表达,并观察移植大鼠术后的存活情况。结果转入IL-13基因的HOC对冷保存损伤的肝脏有一定的保护作用;术后7d,肝移植组和未转染组的α-SMA表达较转染组明显(P<0.05);术后3d,未转染组和转染组的BEC增殖指数明显低于肝移植组(P<0.05)。转染组术后各时相点的HO-1 mRNA表达水平均明显高于相应时相点的其他各组的水平(P<0.05);移植术中经门静脉输入HOC对缺血性胆管损伤所诱导的BEC增殖有一定的抑制作用,对BEC具有一定的保护作用;肝移植组生存率明显低于假手术组和转染组(P<0.05)。结论IL-13的持续表达能促进术后移植肝内HO-1 mRNA的表达,这有利于对供肝的保护,有利于受体大鼠术后肝功能的恢复。促进HO-1 mRNA的表达是IL-13对BEC的具有保护作用的机理之一。
- 陈刚李学成吴国庆杨日高晋云韩江董家鸿
- 关键词：白介素-13肝干细胞
