国家自然科学基金(30400464)
- 作品数：17 被引量：39H指数：3
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- 相关机构：南方医科大学中国科学院第四军医大学更多>>
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- 人类GAD67基因转染骨髓基质源性神经干细胞及初步检测被引量：1
- 2007年
- 目的利用转基因技术将人类谷氨酸脱羧酶（GAD）67基因转染骨髓基质源性神经干细胞仍MSCs-D-NSCs），获得GAD67修饰的成体专能干细胞。方法以PCR、双酶切及测序鉴定pEGFP-C2-GAD67和pcDNA3.1-GAD67重组子；利用密度梯度离心法分离培养大鼠BMSCs并促其向NSCs方向分化，将编码人类GAD67基因的真核表达质粒pEGFP-C2-GAD67及pcDNA3．1-GAD67分别转染BMSCs-D-NSCs，荧光显微镜下观察并用流式细胞仪检测转染效率。结果pEGFP-C2-GAD67及pcDNA3.1-GAD6，均可扩增出约1800bp目的条带，经双酶切和基因测序证实。荧光显微镜下观察可见大量绿色荧光细胞，两种载体转染效率分别为39.3％和40.5％。结论pEGFP-C2-GAD67及pcDNA3.1-GAD67真核表达载体重组正确，利用脂质体介导人类GAD6，基因能有效转染BMSCs-D-NSCs，为进一步观察其GAD67基因和蛋白的表达提供了前提条件。
- 马宏伟徐如祥姜晓丹刘智良张雪陈镇洲郭爱林苏健王娆张冉黄伟黄永安
- 关键词：转染骨髓基质细胞神经干细胞
- USPIO标记大鼠骨髓源性神经干细胞移植脑皮层影像及形态学初步研究被引量：3
- 2007年
- 目的将超小超顺磁性氧化铁（USPIO）Sinerem标记的大鼠骨髓源性神经干细胞移植鼠脑后，初步观察其在大脑中的活性、迁移和整合情况，确定MRI成像示踪Sinerem标记神经干细胞的可行性。方法分离SD大鼠骨髓基质细胞，体外培养诱导成骨髓源性神经干细胞。将Sinerem氧化铁和神经干细胞共孵育培养过夜。采用普鲁士蓝染色和透射电镜确定细胞内铁的摄取、定位情况。将标记细胞立体定向移植微注射到大鼠脑皮层。在不同时间点以SE序列T2WI行4．7T磁共振干细胞成像示踪，然后用组织学方法观察标记细胞在脑内的转归情况。结果Sinerem标记神经干细胞效率为98％～100％，普鲁士蓝染色显示铁颗粒存在胞质中，电镜显示铁颗粒集中于内涵体／溶酶体中；移植细胞体内的T2WI信号强度明显降低．可在4周时检测到细胞沿胼胝体迁移；组织学检测结果表明标记后的细胞可在脑内存活，并能沿神经纤维迁移。结论USPIO能有效地标记骨髓源性神经干细胞，利用磁共振成像可进行大脑中活体示踪监测。
- 陈中灿徐如祥杨志军姜晓丹樊娟修俊刚代广辉魏丽雷皓
- 关键词：神经干细胞
- 菲立磁标记兔骨髓基质细胞生物学特性的实验研究被引量：2
- 2007年
- 目的初步探索利用菲立磁(FE)和转染试剂多聚赖氨酸(PLL)体外磁性标记兔骨髓基质细胞(BMSC)这一方法的可行性,并确定其标记BMSC的最佳浓度。方法无菌条件下行股骨取髓,采用梯度密度离心法分离获取兔BMSC,体外培养、诱导分化为神经干细胞(NSC),使用不同浓度(5、12.5、25、37.5μg/ml)的FE-PLL标记BMSC。采用普鲁士蓝染色、CCK-8法、流式细胞仪、透射电镜、免疫细胞染色等方法,检测FE-PLL标记兔BMSC的效率及其对细胞生长、分化、凋亡的影响。结果FE可以高效率标记BMSC,被标记的细胞在显微镜下呈淡黄或深黄,颜色深浅与所加FE的剂量呈正相关。流式细胞仪结果显示:5、12.5、25μg/ml各组FE对细胞无不良影响,而37.5μg/ml组凋亡细胞明显增加。CCK-8测定的生长曲线表明:除37.5μg/ml组外,其他各组细胞之间差异无统计学意义。普鲁士蓝染色显示:各组FE-PLL标记BMSC胞质内均可见到细小的蓝色铁颗粒。电镜结果显示:各组FE-PLL标记的BMSC胞质内含有许多包裹铁颗粒的囊泡,其含铁囊泡的数量依FE浓度增加而增加。结论FE可以用来体外标记兔BMSC;其标记效率随FE浓度增加而增高,最佳浓度为25μg/ml。
- 修俊刚柯以铨杨志军代广辉陈中灿姜晓丹邹雨汐
- 关键词：骨髓基质细胞神经干细胞聚赖氨酸生物学标记
- 菲立磁胞内标记食蟹猴骨髓基质细胞
- 2009年
- 目的探索利用菲立磁和转染试剂体外磁性标记食蟹猴骨髓基质细胞(BMSCs)方法的可行性。方法无菌条件下取食蟹猴骨髓,梯度密度离心法分离获取BMSCs,使用菲立磁-多聚赖氨酸复合物(FE-PLL)标记BMSCs,普鲁士蓝染色、电镜和台盼蓝排除实验等方法鉴定FE-PLL标记食蟹猴BMSCs的效率和细胞的活力,倒置相差显微镜和免疫细胞化学方法检测BMSCs的增殖和分化能力。结果菲立磁可以高效率地标记BMSCs,标记效率在99%左右。光镜和电镜下BMSCs胞质内分别可见细小的蓝色铁颗粒和许多包裹铁颗粒的囊泡。FE-PLL标记对BMSCs的活力、增殖和分化等能力没有明显的影响。结论菲立磁可以用来体外标记食蟹猴BMSCs。
- 杨志军罗永春徐如祥柯以铨姜晓丹蔡颖谦杜谋选邹雨汐
- 关键词：骨髓基质细胞神经干细胞菲立磁超顺磁性氧化铁
- Neuronavigator-guided percutaneous radiofrequency thermocoagulation in the treatment of intractable trigeminal neuralgia被引量：18
- 2006年
- 因为它的安全和可行性，三叉的中心(PRTTG ) 的背景经皮的收音机频率 thermocoagulation 与三叉的神经痛(TN ) 为大多数病人被认为是第一种选择。然而，指导 neuronavigator 的 PRTTG 很少被报导了。这研究的目的是为难处理的 TN 的治疗估计 neuronavigator-guidedPRTTG 的安全和功效。在 2000 年 1 月和 2004 年 12 月之间的方法，有难处理的 TN 的 54patients 被注册进这研究并且随机被划分成二个组。在航行组(n=26 ) 的病人少些与框架经历了 PRTTG 没有神经原航空，在控制组(n=28 ) 的神经原航空，和那些收到了 PRTTG。在外科的操作，功效，副作用，和复杂并发症以后的三个月被记录。在控制组的病人被跟随在上面为 10 ～ 54 个月(平均数， 34 ± 5 ) ，并且那些在航行组被跟随在上面为 13 ～ 58 个月(平均数， 36 ± 7 ) 。pain-freesurvival 曲线的 Kaplan-Meier 分析被用于审查幸存数据，并且木头等级测试被用来比较二个组的幸存曲线。结果航行组的立即的完全的疼痛消除率是 100% ，而它在控制是 95% 。持续疼痛消除的比例评估 at12，在过程以后的 24 和 36 个月在航行组，和 54%,40% 是 85% ， 77% ，和 62% ，并且 35% 在控制。在控制组的复发在然后是比那更普通的航空组。第一和第二年里的年度复发率在然后是 15% 和 23% 航空组，并且 46% ， 60% 在控制组。除了最小的面部忧郁感觉，没有副作用和复杂并发症在航行组被注意。没有神经原航空，结论指导 Neuronavigator 的 PRTTG 比 PRTTG 是为有更好短期、长期的结果和更低的复杂并发症率的难处理的 TN 的治疗的一个安全、有希望的方法。
- XU Shu-jun ZHANG Wen-hua CHEN Teng WU Cheng-yuan ZHOU Mao-de
- 关键词：三叉神经痛电凝治疗
- 超顺磁性氧化铁颗粒用于分子成像和神经细胞成像的研究进展被引量：2
- 2006年
- 柯以铨修俊刚杨志军徐如祥
- 关键词：超顺磁性氧化铁细胞示踪细胞成像
- 大鼠海马CA3区内神经元和星形胶质细胞的空间形态(英文)
- 2005年
- 背景:星形胶质细胞能够积极参与脑内的神经活动,与神经元之间存在双向的空间信息联系。目的:观察大鼠海马CA3区神经元锥体细胞及其周围星形胶质细胞的分布,重塑两者之间的三维构象。设计:以实验动物为研究对象,随机对照的实验研究。单位:一所大学医院的神经外科、一所军医大学的神经科学研究所。材料:实验2001-10/2003-06在南方医科大学珠江医院神经外科和解放军第四军医大学全军神经科学研究所完成。出生30d的SD雄性大鼠由解放军第四军医大学实验动物中心提供。方法:采用脑片膜片钳全细胞记录、细胞内荧光黄染色、免疫荧光和激光共聚焦显微镜相结合的技术。主要观察指标:主要观察神经元的放电类型及其周围星形胶质细胞的空间分布。结果:根据放电形式的不同主要把海马锥体细胞分为两类:位相型和非位相型放电神经元。激光共聚焦显微镜下单层光学图像和三维立体重建显示许多星形胶质细胞紧密围绕在细胞内荧光黄染色锥体细胞周围并形成紧密接触。两类神经元与星形胶质细胞形成接触的部位存在区别。非位相型放电神经元的树突和胞体周围都有许多星形胶质细胞形成接触的部位,而位相型放电神经元则仅位于树突。结论:不同特性海马神经元周围星形胶质细胞的空间分布可能存在差异。
- 杨志军徐如祥饶志仁魏玲王晓斌姜晓丹
- 关键词：海马星形细胞膜片钳术
- 迷走神经阻断对哮喘诱导延髓内脏带及下丘脑室旁核和视上核Fos蛋白表达的影响
- 2005年
- 目的:研究支气管哮喘状态下迷走神经向脑传递免疫信息的作用。方法:实验于2003-10/2004-06在解放军第一军医大学珠江医院神经外科进行。清洁级雄性豚鼠20只单纯随机分为4组:假手术+生理盐水;手术+生理盐水;假手术+卵蛋白;手术+卵蛋白。建立豚鼠哮喘模型,在致敏状态下切断或假切断颈部双侧迷走神经,术后2周用卵蛋白经呼吸道激发豚鼠哮喘发作,2h后处死动物,用免疫组织化学ABC法观察延髓内脏带(MVZ)、下丘脑室旁核(PVN)和视上核(SON)Fos蛋白的表达。结果:假手术和手术组豚鼠给予生理盐水刺激后,仅在MVZ背内侧部、中间网状带和腹外侧部、SON和PVN内发现少数浅染的Fos蛋白阳性细胞。假手术组豚鼠卵蛋白激发后,MVZ,PVN和SON内可发现大量Fos蛋白表达,分别为(498.00±134.28),(99.27±15.32),(305.10±84.68)个,手术组豚鼠卵蛋白激发后上述核团内的Fos蛋白表达量则明显减少,分别为(239.78±48.28),(62.36±19.02),(127.14±57.01)个,两者比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:迷走神经在支气管哮喘免疫应答中,可能是传递呼吸道免疫信息的重要途径之一。
- 杨志军徐如祥魏玲姜晓丹蔡颖谦杜谋选
- 关键词：迷走神经切断术延髓下丘脑室旁核视上核
- 大鼠延髓内脏带与下丘脑室旁核、视上核往返投射通路参与高渗调节反应的研究(英文)被引量：1
- 2006年
- 目的探讨延髓内脏带(MVZ)与下丘脑室旁核(PVN)和视上核(SON)之间是否存在往返渗透压投射通路。方法通过给予大鼠饮用3%氯化钠的方法制作高渗刺激模型,并用WGA-HRP逆行追踪、抗Fos、抗酪氨酸羟化酶(TH)或加压素(VP)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学相结合的四重标记方法,观察MVZ、PVN和SON中WGA-HRP、Fos、TH、VP和GFAP阳性分布及表达状况。结果高渗刺激后MVZ、PVN和SON内Fos阳性细胞明显增多;GFAP阳性结构也明显增多,其分布与Fos阳性细胞分布基本一致,表现为胞体肥大、突起粗长。星形胶质细胞(AST)紧密包绕在神经元周围形成神经元-AST复合体(N-ASC)。结论神经元和AST以N-ASC的形式共同参与渗透压调节反应,体内存在MVZ和SON或PVN之间往返的渗透压调节通路。
- 王娆彭苹杨志军徐如祥饶志仁段丽姜晓丹
- 关键词：星形胶质细胞渗透压胶质纤维酸性蛋白
- Lack of telomerase activity in rabbit bone marrow stromal cells during differentiation along neural pathway被引量：6
- 2006年
- 客观：沿着神经小径和 glial 房间的效果在 vitro 在他们的承诺的区别期间在兔子骨头髓 stromalcells (BMSC ) 调查 telomerase 活动 telomerase 的表示上的导出线的神经营养的因素(GDNF ) 。方法: BMSC 从兔子髓被获得并且把组划分了成控制， GDNF (10 ng/ml ) group.Cytokine？NSC 媒介(由我们的实验室准备了，专利没有。ZL02134314。4 ) 与 10%fetal 补充了牛的浆液(FBS ) 被用来导致 BMSC 区别神经小径。Fluorescentimmunocytochemistry 被采用识别 Nestin，神经原特定的 endase (NSE ) ，和 gial fibrillary 的表情酸的蛋白质(GFAP ) 。细胞和细胞周期的地位的生长曲线分别地被分析。在区别期间， telomerase 活动用 telomeric 重复扩大 protocol-enzyme-linked 免疫吸着剂试金(TRAP-ELISA ) 被检测。结果：BMSC 成功地被导致区分神经小径并且表示了胎儿的神经上皮，成熟神经原和 glial 房间的特定的标记。Telomeraseactivities 在沿着神经小径的区别期间在 BMSC 是无法发现的。房间生长曲线，房间周期地位和 telomerase 表示的类似的变化在二 groups.Conclusions 被观察：兔子 BMSC 不沿着神经小径在区别期间显示 telomerase 活动。GDNF 几乎不在增长和 BMSC 的 telomerase 活动上显示出很少影响。
- 陈镇洲徐如祥姜晓丹滕晓华李贵涛邹雨汐
- 关键词：骨髓基质细胞细胞分化
