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免疫磁珠纯化人呼吸道合胞病毒F蛋白方法的建立被引量：1: 2011年; 目的利用免疫磁珠分离技术(IMS)建立快速纯化人呼吸道合胞病毒(RSV)融合蛋白(F)的方法。方法表达RSV F的重组腺病毒FGAd/F感染293细胞,收获细胞裂解液,利用兔抗人RSV多抗包被表面活化的免疫磁珠富集和纯化F蛋白,同时建立夹心ELISA,检测纯化的F蛋白浓度以及F蛋白的回收率。结果采用IMS成功纯化分子量为145～170 ku区间的二聚体RSV F蛋白,SDS-PAGE分析结果显示F蛋白得到很好的纯化,纯化所得RSV F蛋白浓度为116 mg/L,回收率为41.1%。结论利用IMS可有效地富集和纯化RSV F蛋白。; 方璇何金生唐亚宁付远辉王小波郑妍鹏; 关键词：免疫磁化分离

人呼吸道合胞病毒活疫苗研究进展被引量：14: 2011年; 人呼吸道合胞病毒是引起婴幼儿支气管炎和肺炎的主要原因,也可导致免疫缺陷病人及老年人群显著发病和死亡.人呼吸道合胞病毒疫苗已被世界卫生组织(World Health Organization,WHO)列为全球最优先发展的疫苗之一.经过50多年的研究,尤其是随着重组技术和反向遗传学的出现,对RSV疫苗的研究取得了重要进展,但尚未有疫苗上市.目前主要集中于亚单位疫苗及活疫苗等,其中活疫苗包括减毒活疫苗和活病毒载体疫苗,因其最有可能用于预防婴幼儿RSV感染,而受到了较大关注.以rA2cp248/404/1030ΔSH为代表的RSV减毒活疫苗临床试验显示,其有较好的安全性及免疫保护作用,不产生疾病增强作用是极有潜力的候选疫苗.因此,本文将重点介绍RSV活疫苗研究的主要进展和发展方向.; 何金生付远辉洪涛; 关键词：人呼吸道合胞病毒减毒活疫苗反向遗传学

间接免疫荧光法筛选抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体及其性质的初步鉴定: 2012年; 目的利用活体骨髓瘤细胞与杂交瘤技术,采用间接免疫荧光分析法(IFA)筛选出更多可识别人呼吸道合胞病毒(RSV)的单克隆抗体,并对其体外性质进行鉴定,以期为RSV的被动免疫治疗以及临床诊断奠定基础。方法以RSV通过滴鼻途径免疫小鼠,同时采用实体瘤技术体内制备骨髓瘤细胞。取免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,利用IFA方法筛选经有限稀释法亚克隆获得的可稳定分泌抗RSV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA和Western blot等方法初步分析McAb对RSV蛋白的特异性结合能力,通过免疫酶法(IE)蚀斑减少中和实验和融合抑制实验分析McAb体外保护作用。结果获得4株稳定分泌抗RSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为2A7、3E10、1F10及3G4,经间接ELISA以及Westernblot初步鉴定,获得的4株单克隆抗体可特异性识别RSV蛋白,McAbs 2A7和3E10可分别识别融合糖蛋白(F)蛋白二聚体和单体,McAbs 1F10和3G4可识别黏附糖蛋白(G)蛋白。其中McAbs 2A7与1F10可以在体外抑制RSV对HEp-2细胞的感染,具有中和活性,同时具有融合抑制活性。结论利用IFA法成功筛选了能特异性识别RSV的4种单克隆抗体,初步鉴定显示两种单抗可分别识别F蛋白二聚体和单体,另两种单抗可识别G蛋白。IE法蚀斑减少实验显示两种单抗在体外具有中和活性和融合抑制活性,表明获得的单抗对RSV感染具有一定的预防作用。; 张梅何金生; 关键词：人呼吸道合胞病毒间接免疫荧光单克隆抗体中和活性

呼吸道合胞病毒载体疫苗研究进展被引量：4: 2012年; 人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)是引起婴幼儿下呼吸道感染的最重要的病毒病原,RSV载体疫苗可在人细胞内从头合成,形成的蛋白质构象与RSV自然感染后表达的完全相同,不会导致抗原表位的丧失或变化,形成的免疫力更利于抵抗随后的自然感染;经黏膜途径免疫不会产生疾病增强作用,且能突破母传抗体的干扰,因而受到广泛关注。对近年来RSV载体疫苗的研究进展进行了综述。; 付远辉何金生洪涛; 关键词：呼吸道合胞病毒载体疫苗

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国家自然科学基金(30972604)

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