国家自然科学基金(30400469)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 高迁移率族蛋白B1cDNA的克隆与表达
- 2007年
- 目的克隆人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)cDNA,构建重组原核表达载体,对其诱导表达并鉴定,为设计HMGB1 cDNA突变体及诱导表达可竞争性抑制HMGB1炎症效应的突变体蛋白奠定基础。方法提取人新鲜扁桃体组织总RNA,经RT-PCR扩增出人HMGB1 cDNA序列,并克隆至载体pUC18进行序列测定,随后构建于原核表达载体pQE-80L中,经IPTG诱导4小时后,可表达Mr约30 000的蛋白。Western Blotting鉴定所表达的目的蛋白。结果经RT-PCR扩增得到了648bp的cDNA,经序列分析与GenBank中报道的已知序列完全一致,构建了HMGB1蛋白的重组表达质粒,诱导表达了目的蛋白,经Western Blotting证实,在Mr约为30 000处有一条清楚的蛋白带。结论获得了HMGB1 cDNA的克隆与原核表达载体。
- 陈婧袁志强彭毅志
- 关键词：高迁移率族蛋白克隆
- 人高迁移率族蛋白的分子改建及原核表达被引量：2
- 2007年
- 目的构建人高迁移率族蛋白(high mobility group box1protein,HMGB1)突变体及表达与鉴定目的蛋白,为进一步通过HMGB1突变体蛋白与天然HMGB1竞争结合相应受体而抑制其致炎效应奠定了基础。方法在已成功克隆和表达人HMGB1的基础上,采用一步反向PCR致突变法构建人HMGB1cDNA的6个突变体,并分别克隆于原核表达载体pQE-80L上,表达6个相应的重组HMGB1突变体蛋白,并经Western blot鉴定。结果获得人HMGB1cDNA的6个突变体,并成功构建到原核表达载体pQE-80L上,诱导表达且经Western blot鉴定了目的蛋白。结论成功构建人HMGB1突变体,并进行了目的蛋白表达的鉴定。
- 陈婧袁志强彭毅志
- 关键词：HMGB1克隆突变
- 人高迁移率族蛋白突变体抗炎效应的初步研究
- 2007年
- 目的构建6个高迁移率族蛋白-1（high mobility group-1 protein,HMGB1）突变体,从中筛选出与靶细胞膜上受体结合但没有致炎效应的突变体蛋白,并检测其在体外竞争性抑制HMGB1致炎效应的作用。方法在已成功制备HMGB1及其6个重组HMGB1突变体蛋白的基础上,对目的蛋白进行了有效纯化。采用细胞免疫荧光标记、激光共聚焦显微镜筛选出能与THP-1细胞膜上受体结合的突变体。再通过ELISA筛选出没有致炎效应的突变体。进一步筛选出能在体外竞争性抑制HMGB1致炎效应的突变体。结果筛选出的HMGB1M1、M2、M3、M5能在体外竞争性抑制HMGB1的致炎效应,其中M1、M2竞争性抑制作用最强。结论成功筛选出在体外竞争性抑制HMGB1致炎效应的重组突变体,为抗炎治疗提供新型候选制剂。
- 陈婧袁志强彭毅志
- 关键词：高迁移率族蛋白突变蛋白纯化炎症因子
- Primary Research on Anti-inflammation Effect of Mutant Human HMGB1 proteins
- Objective To design and prepare 6 recombinant mutant HMGB1s(Human High Mobility Group Box 1 Protein) and selec...
- 陈婧袁志强彭毅志
- 文献传递
- 重要炎性介质高迁移率族蛋白1研究进展
- 2007年
- 高迁移率族蛋白1（HMGB-1）于20世纪60年代由Johns发现，因其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中有很高的迁移率而得名。它是一种在真核细胞中广泛表达并且高度保守的蛋白，主要作为核内非组蛋白，稳定核小体，参与DNA的转录、复制、修复等。近来研究显示，HMGB-1除在细胞内发挥作用外，还能由被激活的免疫细胞（如巨噬细胞、单核细胞）释放到细胞外，作为潜在的致炎因子，介导内毒素血症和脓毒症的发生，因而其胞外功能成为研究热点。
- 陈婧袁志强彭毅志
- 关键词：高迁移率族蛋白1炎性介质聚丙烯酰胺凝胶电泳HMGB-1真核细胞非组蛋白
