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国家自然科学基金(30130110): 作品数：39 被引量：171H指数：7; 相关作者：杨辉何家全刘仕勇张治元姚忠祥更多>>; 相关机构：第三军医大学新桥医院第三军医大学中南大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划留学人员科技活动项目择优资助经费更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

Mash1在室管膜前下区神经干细胞向GABA能神经元分化中的作用被引量：2: 2007年; 目的研究Mash1在室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞向γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)能神经元分化中的作用。方法体外分离培养新生0d昆明小鼠的SVZa神经干细胞,构建Mash1与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)正义、反义融合蛋白表达质粒,转染SVZa神经干细胞,GFP活体荧光标记SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测在Mash1作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例和分化为GABA能神经元的比例。结果pEGFP-Mash1-质粒、pEGFP-Mash1+质粒双酶切鉴定构建成功,核转染结果表明:GFP融合蛋白表达阳性;pEGFP-Mash1+组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组(P<0.05);pEGFP-Mash1-组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显低于空白对照组;pEGFP-Mash1+组SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例明显高于空白对照组(P<0.05);pEGFP-Mash1-组SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例明显低于空白对照组(P<0.05)。结论pEGFP-Mash1-质粒、pEGFP-Mash1+质粒构建成功;Mash1可以促进SVZa神经干细胞向神经元方向分化,而且主要表现为促进SVZa神经干细胞向GABA能神经元分化。; 陈锦华张治元尹昌林杨辉; 关键词：室管膜前下区神经干细胞分化

Dlx5 mRNA在室管膜前下区神经干细胞中的表达规律及其对神经元分化的影响被引量：3: 2006年; 目的研究D lx5 mRNA在培养的室管膜前下区(anterior subventricu lor zone,SVZa)神经干细胞(NSCs)中的表达规律及其对SVZa NSCs方向分化的影响。方法提取每一代培养的SVZa NSCs的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测D lx5及Er81 mRNA表达的情况;将重组质粒pEGFP-mD lx5用电穿孔的方法转染不表达D lx5 mRNA代次的NSCs,再检测D lx5 mRNA的表达情况,并将转染细胞分化后进行免疫荧光染色,分析基因转染细胞与神经元分化的关系;另外,还用100 ng/m l的骨形态发生蛋白-2(BMP-2)处理不表达D lx5 mRNA的NSCs,24 h后检测D lx5 mRNA的表达情况。最后将不同D lx5 mRNA表达情况的NSCs分化后用流式细胞仪检测神经元分化的比例。结果细胞传代至第4代时D lx5 mRNA表达消失,相应地,其神经元分化比例为(8.34±0.36)%,比表达D lx5 mRNA的第3代NSCs的(19.16±0.75)%明显下降;用D lx5基因转染该代NSCs后,外源转染基因能够使内源性D lx5 mRNA恢复表达,神经元分化比例也明显升高,为(35.66±0.58)%,免疫荧光染色也证实基因转染细胞分化成了神经元;而BMP-2处理也能诱导D lx5 mRNA重新表达,神经元分化比例也有一定程度上升,与第3代NSCs的相似,为(22.27±0.12)%。除第3代NSCs分化组与BMP-2诱导组神经元分化比例差异无统计学意义外,其余各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论随着传代次数的增加,到第4代时,SVZa NSCs D lx5 mRNA表达消失,而外源性D lx5基因转染及BMP-2可以诱导其重新表达;D lx5基因能使新生大鼠来源的SVZa NSCs向神经元方向分化。; 高方友杨辉张治元何家全刘仕勇邱克军; 关键词：室管膜下区神经干细胞细胞分化

重组质粒pEGFP-mDlx5的构建及其在SVZa神经干细胞中的表达研究被引量：1: 2006年; 目的构建真核表达重组质粒pEGFP-mDlx5,并了解它在室管膜前下区(SVZa)神经干细胞(NSCs)中的mRNA及融合蛋白表达情况。方法运用DNA重组技术自原核表达载体上将小鼠来源的mDlx5基因克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)载体上,并用双酶切、测序进行鉴定;将重组质粒用电穿孔的方法转染SVZa NSCs,荧光显微镜下动态观察荧光变化情况;培养24h后提取转染细胞的总RNA及总蛋白,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)了解其mRNA表达情况,用Western blot 检测其蛋白表达情况。结果重组质粒通过双酶切产生了0．78 kb目的插入片段及4．68 kb载体片段;测序后证实0．78 kb片段碱基序列与mDlx5基因完全同源;重组质粒转染SVZa NSCs 8 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,12 h后逐渐增多,24-48 h达高峰,且稳定表达较长时间;24 h后通过 RT-PCR检测到mRNA表达,Western blot检测到58 kD目的蛋白表达。结论新构建的真核表达重组质粒pEGFP-mDlx5通过鉴定,结构正确:转染到SVZa NSCs后能在其中表达、发挥功能,为后续研究奠定了基础。; 高方友杨辉张治元何家全刘仕勇邱克军; 关键词：重组质粒绿色荧光蛋白室管膜前下区神经干细胞

体外培养神经干细胞分化为类胰岛样组织的研究被引量：18: 2003年; 目的　观察体外培养的神经干细胞是否可以被诱导分化为类胰岛样组织。方法　体外培养神经干细胞 ,在胰岛素等外源性复合成分 (ITS)诱导分化后 ,分别进行胰腺上皮干细胞特异性标志物CK 19、胰腺 β细胞特异性成分胰岛素和胰腺α细胞特异性成分胰高糖素等的免疫细胞化学染色鉴定。结果　体外培养的神经干细胞经诱导分化 3d后 ,在神经干细胞集落附近可见散在或成群分布的上皮样细胞 ,并呈CK 19免疫阳性反应。继续培养 2～ 4周后 ,上皮样细胞增多 ,细胞圆形或呈鹅卵石样排列 ,进一步增生形成类胰岛样组织 ,其中大多数细胞呈胰岛素免疫反应阳性 ,少数细胞呈胰高糖素免疫反应阳性。结论　体外培养的神经干细胞具有向类胰岛样组织分化的潜能 ,它能分化为胰岛的α细胞和 β细胞。; 姚忠祥李巍李成仁秦茂林刘建军陈兴书周德山; 关键词：体外培养神经干细胞细胞角蛋白-19 胰高糖素细胞移植

Mash1在室管膜前下区神经干细胞向神经元分化中的作用被引量：1: 2006年; 目的研究Mashl在室管膜前下区(SVZa)神经干细胞向神经元分化中的作用。方法体外分离培养新生0 d昆明小鼠的SVZa神经干细胞,原位杂交检测Mashl在SVZa神经干细胞的表达;构建Mashl与绿色荧光蛋白(GFP)正义、反义融合蛋白表达质粒,转染SVZa神经干细胞,GFP活体荧光标记SVZa神经干细胞;采用细胞计数和流式细胞仪检测在Mashl作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。结果体外培养的新生0 d昆明小鼠的SVZa神经干细胞Mashl原位杂交检测阳性;Mashl-GFP+组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组;Mashl-GFP-组 SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显低于空白对照组。结论体外培养的新生0 d昆明小鼠的SVZa神经干细胞表达Mashl;Mashl可以促进SVZa神经干细胞向神经元方向分化。; 张治元杨辉刘仕勇何家全邱克军宋业纯; 关键词：室管膜前下区神经干细胞分化小鼠

Nurr1基因与干细胞多巴胺能表型分化的研究进展: 2006年; 中枢神经移植治疗帕金森病未能得到广泛开展的主要原因是伦理道德问题和不能获取足量的供体组织等。因此,尝试基因工程化干细胞使之成为多巴胺能神经元以释放多巴胺递质来达到治疗的目的是目前研究的热点。核受体相关因子-1(nuclear receptor related factor 1,Nurr1)基因与多巴胺能表型的产生有密切关系,本文对Nurr1基因使干细胞向多巴胺能表型神经元样细胞分化的研究进展进行了综述,并提出了今后的研究方向。; 高方友杨辉张治元; 关键词：NURR1基因神经干细胞多巴胺能神经元

神经分化发育相关基因Mash-1的研究进展被引量：4: 2006年; Mash-1(mammalian achaete-scute homologue-1)含碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,bHLH)结构域,能与E蛋白结合启动下游基因的转录。Mash-1在神经系统发育过程中是通过Notch介导的一系列信号来调控转录。Id竞争性地和E蛋白结合从而实现对Mash-1基因的负调控。Mash-1在中枢神经系统和周围神经系统发育中都有表达,Mash-1对神经元和神经胶质细胞的分化都有很重要的作用。因此,对Mash-1的进一步研究尤其是研究其对神经干细胞的分化调控机制具有潜在的临床应用价值。; 陈兴书姚忠祥; 关键词：神经系统发育

氯胺酮对体外培养大鼠神经干细胞增殖与凋亡的影响被引量：6: 2006年; 目的探讨氯胺酮对体外培养夫鼠神经干细胞(NSC)增殖与凋亡的影响。方法采用无血清培养和单细胞克隆技术,在大鼠海马分离培养具有单细胞克隆能力的细胞群,采用免疫荧光细胞化学技术证实为NSC。将NSC以5×10~4/孔接种于96孔培养板中,分别加入浓度为0(未加氯胺酮)、5、10、20、50、100、200、500、1000 mmol·L^(-1)氯胺酮,每个浓度5孔。采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测NSC光密度(OD),并计算生长抑制率(RI)。采用流式细胞仪测定氯胺酮浓度为0、10、100、500、1000 mmol·L^(-1)时NSC凋亡率。结果与氯胺酮浓度0时比较,200、500、1000 mmol/L氯胺酮可降低NSC OD,升高RI,10、100、500、1000 mmol·L^(-1)氯胺酮可升高NSC凋亡率(P＜0．05或0．01)。结论氯胺酮对体外培养大鼠NSC增殖有抑制作用,并能诱导NSC凋亡。; 黄河杨天德杨辉陶军李洪吕胜青; 关键词：氯胺酮干细胞细胞凋亡细胞增殖

SVZ神经干细胞分化过程中的Bmp4启动子活性分析被引量：2: 2003年; 目的　室管膜下层 (Subventricularzone ,SVZ)神经干细胞分化过程中的Bmp4启动子活性分析及其与神经元分化的关系。方法　在构建Bmp4启动子———红色荧光蛋白报告载体基础上转染SVZ神经干细胞 ,动态地观察报告基因在SVZ神经干细胞分化过程中的表达 ,并进行显微计数和神经元标志物流式细胞仪检测。结果　SVZ神经干细胞贴壁分化过程中具有较高的Bmp4启动子活性 ,48h阳性率达到 8.6%,且明显高于皮层神经干细胞。SVZ神经干细胞的Bmp4启动子活性与神经元分化高度正相关 (r =0 .80 5 ,P <0 .0 5 ) ,皮层神经元分化与Bmp4启动子活性相关不明显。结论　采用启动子活体荧光标记 ,能够较好地反映正常情况下内在蛋白的表达情况 ;Bmp4启动子活性与SVZ神经干细胞向神经元的分化高度相关。; 刘仕勇杨辉张治元宋业纯邱克军; 关键词：室管膜下层骨形成蛋白红色荧光蛋白

BMP2在SVZa神经干细胞向神经元分化中的作用被引量：15: 2003年; 目的　研究BMP2在室管膜前下区 (SVZa)神经干细胞向神经元分化中的作用 ,提高SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。方法　体外分离培养SVZa神经干细胞 ,以不同浓度的BMP2诱导SVZa神经干细胞 ,采用免疫荧光和流式细胞仪技术 ,检测SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。结果　BMP2浓度为 1～ 10ng ml时SVZa神经干细胞分化为神经元的比例均高于 0ng ml ,10ng ml时达到最高峰 ,2 0～ 10 0ng ml时SVZa神经干细胞分化为神经元的比例亦高于 0ng ml,但呈下降趋势。结论　BMP2可以促进SVZa神经干细胞向神经元分化。; 张治元杨辉刘仕勇何家全王彬张可成; 关键词：神经干细胞 BMP2 SVZA 分化神经元

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