国家自然科学基金(30200101)
- 作品数：5 被引量：9H指数：3
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- 相关机构：第三军医大学西南医院第三军医大学更多>>
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- 内皮差异表达基因消减文库的构建及在创伤修复中的应用(英文)
- 2004年
- 目的:建立人脐静脉内皮细胞内毒素刺激后差异表达基因的消减cDNA文库。方法:提取培养人脐静脉内皮细胞内毒素刺激6h后mRNAs,反转录合成cDNA,与对照组间进行抑制消减杂交富集差异表达基因,亚克隆入T/A质粒并转化感受态大肠杆菌。结果:成功构建了人脐静脉内皮细胞内毒素刺激后上调和下调差异表达基因两个消减cDNA文库,为进一步筛选新的内皮细胞活化相关基因打下基础。结论:经抑制消减杂交建立的消减cDNA文库富集并均一化了内毒素刺激后不同丰度的差异表达基因,对深入理解内皮细胞活化机制及参与组织修复的过程具有重要意义。
- 梁自文罗向东杨宗城
- 关键词：血管内皮差异表达基因消减文库创伤遗传学
- 抑制ECV304细胞内EOLA1基因表达后效应观察被引量：4
- 2007年
- 目的观察抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞内内皮高表达脂多糖相关因子1（endothe-lial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1,EOLA1）基因表达后细胞生长的变化。方法构建EGFP-EOLA1融合蛋白表达载体pEGFP-N2/EOLA1,转染ECV304细胞,G418压力筛选获得稳定表达株;设计靶点特异性的寡核苷酸,连接到经BamHⅠ和HindⅢ酶切线性化的pSlincer3.1/H1质粒上。转染重组质粒到稳定表达EGFP-EOLA1融合蛋白的ECV304细胞,检测靶基因的抑制情况,观察EOLA1表达被抑制后细胞生长的改变。结果抑制EOLA1表达后ECV304细胞生长明显减慢。结论EOLA1基因在细胞内参与了细胞生长的调控。
- 梁自文杨宗城陈建罗小凤王兴明
- 关键词：ECV304细胞细胞生长
- 人类内皮活化相关新基因EOLA1真核表达载体的构建与鉴定
- 2006年
- 目的为筛选与新基因EOLA1(内皮高表达脂多糖相关因子1)相互作用蛋白,了解EOLA1基因功能奠定基础。方法应用菌液PCR技术,从贮存的含EOLA1基因全长cDNA的大肠杆菌DH5α中扩增其开放阅读框(ORF)序列,亚克隆到真核表达载体pGBKT7中,经酶切及测序进行验证。结果鉴定结果显示,EOLA1的ORF全部序列包含在所构建质粒的多克隆位点中,且序列比对完全相同,表明EOLA1真核表达载体构建成功。结论EOLA1基因真核表达载体的成功构建为进行蛋白质相互作用研究提供了有力的工具。
- 梁自文杨宗城陈建陈渝
- 关键词：内皮细胞EOLA1基因表达
- 内皮活化相关新基因EOLA1的体外表达及亚细胞定位被引量：4
- 2003年
- 目的 研究内皮细胞高表达脂多糖相关因子 1(Endothelial over expressedlipopolysaccharide associatedfactor 1,EOLA1)基因的体外表达和亚细胞定位 ,为进一步功能研究打下基础。方法 通过偶联转录 翻译系统体外表达EOLA1蛋白 ,并用变性凝胶电泳进行产物检测 ;构建EOLA1 EGFP(绿色荧光蛋白 )融合蛋白表达质粒 ,转染内皮细胞后瞬时表达 ,在激光共聚焦显微镜下观察EOLA1蛋白的亚细胞定位。结果 体外表达的EOLA1蛋白分子量约 18× 10 3,与预测结果相符合 ;EOLA1蛋白主要定位于细胞浆 ,少量表达于细胞核。结论 EOLA1属细胞内结构蛋白 ,可能是参与了炎症时细胞内信号转导。
- 梁自文杨宗城罗向东刘月明蔡文琴
- 关键词：内皮细胞亚细胞定位体外表达
- 内皮活化相关新基因EOLA1的亚细胞定位及组织表达被引量：3
- 2004年
- 目的 研究内皮细胞高表达脂多糖相关因子 1(EOLA1)基因的亚细胞定位和组织表达特性 ,为对其进行进一步的功能研究打下基础。方法 构建EOLA1 EGFP(绿色荧光蛋白 )融合蛋白表达质粒 ,转染内皮细胞后瞬时表达 ,在激光共聚焦显微镜下观察EOLA1蛋白的亚细胞定位 ;通过人多组织Northern杂交研究EOLA1基因的组织表达。结果 EOLA1蛋白在正常人各组织中呈选择性表达 ,在人的心脏、骨骼肌、肾脏、肝脏和胎盘组织中有较强的表达 ,在结肠、脾脏和小肠中有较弱的表达 ,而在脑、胸腺、肺和外周白细胞中无表达 ;EOLA1蛋白主要定位于细胞浆 ,少量表达于细胞核。结论 EOLA1属胞内蛋白 ,可能在细胞内信号转导中起着作用。
- 梁自文杨宗城罗向东刘月明蔡文琴
- 关键词：内皮细胞基因EOLA1亚细胞定位印迹法
