目的应用AdEasy载体系统构建含人内皮抑素(hEndostatin)的重组腺病毒载体,观察感染后hEndostatin在SW1990中的表达和生物学活性。方法将hEndostatin克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183,获得腺病毒重组质粒,腺病毒重组质粒转染293细胞进行包装,获取hEndostatin重组腺病毒。同法构建重组腺病毒Ad-LacZ,转染SW1990细胞,确定重组腺病毒的最适感染复数(MOI),hEndostatin重组腺病毒以最适MOI转染SW1990细胞,观察转染后1-7 d hEndostatin的表达及生物学活性。结果成功构建了hEndostatin重组腺病毒,该腺病毒可高效介导hEndostatin在SW1990细胞中的表达,MOI=100为最适感染复数;转染后1～7 d,上清中hEndostatin蛋白的浓度分别为(1.6±0.3)、(8.5±0.6)、(54.3±4.4)、(256.9±25.8)、(596.6±38.7)、(321.7±21.2)、(132.6±7.6)μg/L;表达产物具有生物学活性,显著抑制血管内皮细胞的增殖、迁移(P<0.01)。结论重组腺病毒可介导hEndostatin基因在SW1990细胞中的有效表达。
