上海市卫生局科研基金(2007037)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 人单核细胞趋化因子-1基因重组卡介苗的构建与鉴定
- 2013年
- 目的构建能自动分泌性表达单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的重组卡介苗。方法分别以卡介苗(BCG)和人MCP-1cDNA为模板,通过PCR扩增得到120bp的BCG Ag85B信号肽基因序列和300bp的MCP-1基因序列。将上述两片段基因序列插入大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒pMV261,得到重组质粒pMV261-Ag85B-MCP-1。测序鉴定完毕后,用电穿孔法将该重组质粒导入BCG中,构建重组卡介苗rBCG MCP-1。分别应用PCR扩增和Western blot检测rBCG MCP-1中MCP-1的基因和蛋白的表达。结果质粒pMV261-Ag85BMCP-1用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实克隆基因BCGAg85B信号肽和MCP-1正确插入载体pMV261。Western blot显示rBCG MCP-1的培养上清和菌体中均可检测到MCP-1蛋白的表达。ELISA法可检测到培养上清中有高表达的MCP-1蛋白(340pg/mL)。结论成功构建了能分泌MCP-1的新型重组卡介苗rBCG MCP-1,为进一步研究其抗膀胱肿瘤的疗效打下了基础。
- 李杜渐徐耀庭韦芳李惠明黄汝强许晓文顾炜顾伟平
- 关键词：卡介苗单核细胞趋化因子-1膀胱肿瘤基因重组
- 卡介苗穿梭表达质粒pMS MCP-1的构建与鉴定
- 2012年
- 目的:构建分泌性表达单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)的重组卡介苗。方法:分别以卡介苗(BCG)和MCP-1cDNA为模板,通过PCR扩增得到120bp的BCG Ag85B信号肽序列和300bp的MCP-1基因序列。将BCG Ag85B信号肽序列插入大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒pMV261,得到重组质粒pMS。再将MCP-1基因序列克隆至pMS中,得到重组质粒pMS MCP-1。结果:质粒pMS MCP-1用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因BCG Ag85B和MCP-1正确插入载体pMV261。结论:重组质粒pMS MCP-1可望在BCG中分泌性表达细胞因子MCP-1,从而协同加强对肿瘤的杀伤作用,该质粒的成功构建为改造卡介苗、发展新型抗膀胱肿瘤疫苗奠定了基础。
- 李杜渐徐耀庭韦芳李惠民黄汝强许晓文顾炜顾伟平
- 关键词：卡介苗单核细胞趋化因子-1多聚酶链反应
