国家自然科学基金(31000412)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：周育森杨裔寇志华于虹郭彦更多>>
- 相关机构：军事医学科学院温州医科大学中南大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 活化相关分泌蛋白1单克隆抗体的制备及其在保守结构域鉴定中的应用被引量：1
- 2014年
- 目的：制备重组活化相关分泌蛋白1（ASP-1）的单克隆抗体，并用其鉴定保守结构域。方法：用原核表达并纯化的重组ASP-1不加佐剂免疫BALB/e小鼠，采用杂交瘤技术及有限稀释传代法筛选稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株，制备单抗腹水后用间接ELISA进行抗体特异性鉴定和效价检测，利用肽结合ELISA和Western印迹鉴定单抗识别的保守结构域。结果：获得5株能稳定分泌抗ASP-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，且5株单抗的识别区域均为21-28氨基酸残基的保守性结构域。结论：制备了抗ASP-1的单克隆抗体，为深入研究ASP-1佐剂的活性功能区及作用机制提供了有效工具。
- 郭晶晶于虹杨裔孙维来肖文珺郭彦寇志华周育森
- 关键词：单克隆抗体保守结构域
- 新型疫苗佐剂Ov-ASP-1佐剂活性功能区的设计、表达及生物学特性研究被引量：1
- 2018年
- 目的获得保留Ov-ASP-1佐剂活性的功能区。方法用前期制备的Ov-ASP-1单克隆抗体对Ov-ASP-1的9个肽进行特异性结合,根据肽的结合情况设计功能区ASPPRM,并进行密码子优化、构建原核表达载体后在大肠杆菌中表达。表达产物经Western印迹鉴定后的用镍柱纯化蛋白,复性完全后对获得的ASPPRM活性蛋白进行生物学特性分析。结果 ASPPRM以包涵体形式表达,分子量为17kD。将其和OVA共同免疫小鼠后ASPPRM组抗OVA的IgG抗体显著高于OVA组。结论本研究获得了保留佐剂活性的ASPPRM蛋白,为后续ASPPRM体内的免疫增效作用及Ov-ASP-1佐剂活性功能域的探索奠定基础。
- 郭晶晶宁秀哲杨裔寇志华周育森
- 甲型流感病毒H1N1 HA蛋白在果蝇S2细胞中的表达及免疫原性研究被引量：3
- 2012年
- 目的在果蝇S2细胞表达甲型流感H1N1HA并分析其免疫原性。方法根据GenBank发表的甲型流感病毒(H1N1)HA基因序列,经过密码子优化,全基因合成编码HA的基因,并于其N端引入特定的空间折叠序列,定向连接至表达载体pMT/Bip/V5-His A,构建重组表达载体pMT-HA。酶切鉴定正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoHygro共转染果蝇S2细胞,潮霉素加压筛选稳定细胞系,在无血清培养基中以硫酸铜溶液诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,经镍柱纯化后免疫小鼠,ELISA检测其诱导的特异性抗体水平。结果获得了稳定表达HA的S2细胞株,目的蛋白以分泌形式表达于上清,并形成三聚体,可以被H1N1HA抗体识别;免疫小鼠后可诱导机体产生抗HA特异性抗体。结论获得了纯化的三聚体形式表达的HA蛋白,并具有较好的免疫原性,具有很好的疫苗应用前景。
- 于虹温晶杨裔俞建萍佟双郭彦赵光宇寇志华周育森
- 关键词：甲型H1N1流感病毒细胞HA
