国家自然科学基金(31372116)
- 作品数：9 被引量：47H指数：5
- 相关作者：林俊芳郭丽琼叶志伟殷林罗润更多>>
- 相关机构：华南农业大学广州市澳键丰泽生物科技有限公司广州市澳键丰泽生物科技股份有限公司更多>>
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- 相关领域：轻工技术与工程农业科学生物学更多>>
- 蛹虫草类胡萝卜素双加氧裂解酶基因的克隆及表达分析被引量：1
- 2019年
- 目的:类胡萝卜素双加氧裂解酶(CCD)是类胡萝卜素生物合成途径中的一个关键酶。旨在鉴定并克隆蛹虫草中的CCD酶,通过相关生物信息学分析和荧光定量PCR探究其结构、功能聚类以及表达调控。方法:用GenBank登录的CCD酶基因序列与蛹虫草基因组比对,在保守区域设计1对引物,以蛹虫草基因组的DNA为模板对CCD酶基因进行扩增,扩增产物命名为car-TC。car-TC基因连接载体后由生物公司测序;序列通过多种生物信息学软件和在线工具分析;表达量随生长情况的变化关系通过实时荧光定量PCR进行测定。结果:克隆了car-TC基因,该基因长1784bp,编码一个577aa的蛋白质,该蛋白质含有CCD酶活性必需的4个组氨酸残基,系统发育进化分析表明该蛋白和棒束菌、白僵菌的同源蛋白聚在同一簇,实时荧光定量PCR结果表明该蛋白的表达量随生长时间的延长而减少。结论:获得一个类胡萝卜素合成途径中的关键酶——双加氧裂解酶基因car-TC,该基因的表达主要受时序调控,随生活周期的进行有逐渐降低的趋势。
- 李栋林俊芳刘聪叶志伟叶志伟云帆郭丽琼
- 关键词：蛹虫草类胡萝卜素生物信息学分析实时荧光PCR
- 基于CRISPR／Cas9系统的金针菇基因组编辑载体构建被引量：9
- 2016年
- 采用高效基因编辑系统CRISPR/Cas9,构建金针菇基因Mads-8敲除载体及转化体系。以转录组数据为依据,通过分析基因Mads-8序列信息,选择高效的靶位点序列,同时加入筛选标记基因hph构建过渡载体sgRNA-T,通过菌落PCR鉴定和测序来验证靶位点序列是否正确插入。以表达载体pg Fvs-cas9为框架,酶切连接后构建重组敲除载体pg Fvs-Cas9-gRNA,PCR和酶切鉴定敲除载体。再以PEG介导的金针菇原生质体转化表达载体,在潮霉素抗性平板上筛选拟转化子,以拟转化子基因组DNA为模板扩增Cas9基因。结果显示,靶位点序列成功插入敲除载体且序列正确,重组质粒成功转化进金针菇的基因组。对金针菇基因组敲除载体的构建,为后续金针菇相关基因的功能验证及育种研究提供载体材料及理论依据。
- 罗润林俊芳郭丽琼叶志伟郭天芬云帆
- 关键词：金针菇转录组
- 冷诱导金针菇子实体发育相关基因分析及CRISPR-Cas9突变技术体系的建立
- 冷诱导金针菇子实体发育相关基因分析及CRISPR-Cas9突变技术体系的建立
- 伍土恒
- 关键词：金针菇转录组
- 文献传递
- 蛹虫草新型色素的研究进展被引量：9
- 2015年
- 蛹虫草[Cordyceps militaris(L)Link],又名北虫草,是一种菌虫复合体,是虫草属真菌的模式种。蛹虫草在其菌丝和子实体阶段能合成类胡萝卜素,其合成的类胡萝卜素大部分是稀有的水溶性类胡萝卜素和北虫草黄素。北虫草黄素作为一种天然色素,具有抗炎、抗癌、抗氧化等多种功效,可溶于水,着色效果好,在食品上有更广泛的应用空间,是亟待开发的一类具有活性功能的新型色素。本文就蛹虫草类胡萝卜素的产生、种类与性质、分离纯化和基因工程等研究状况进行了概括和归纳,希望能对后续的研究提供一些理论指导。
- 简锦辉郭丽琼叶志伟刘聪殷林林俊芳
- 关键词：蛹虫草
- 芽孢杆菌种间原生质体融合选育高产Surfactin新菌株被引量：3
- 2019年
- 旨在获得纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌种间融合高产Surfactin的新菌株。以纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌为亲本菌株,通过制备纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌的原生质体,采用PEG介导的双亲灭活标记法融合原生质体,拟融合子通过PCR鉴定、CPC-BTB法高通量筛选、HPLC复筛以及融合菌株的稳定性验证获得高产Surfactin的新菌株。研究结果表明纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌的原生质体制备最佳酶解浓度分别为0.25mg/mL和0.2mg/mL,最佳酶解时间分别为25min和20min,其原生质体得率分别为83.1%和84.3%。两者的原生质体融合条件为:纳豆芽孢杆菌紫外灭活80min,暹罗芽孢杆菌85℃热灭活40min,融合体系为50%的PEG6000在38℃下融合时间15min。获得了遗传稳定的融合菌株F8,该菌株Surfactin产量相对于纳豆芽杆菌提高了33.3%,暹罗芽孢杆菌提高了60%。
- 潘旭耀魏韬谭柱豪林龙镇郭丽琼林俊芳
- 关键词：原生质体融合SURFACTIN
- 外界因子调控类胡萝卜素生物合成研究进展被引量：6
- 2016年
- 由于类胡萝卜素良好的生物活性和生理功能,近年来被广泛应用在食品、医药、营养保健等行业,为满足人类对类胡萝卜素的需求,有关类胡萝卜素合成调控的研究也越来越多。文章综述了光照、温度和诱导子等外界因子对类胡萝卜素生物合成的影响,期望在生产过程中通过外界调控来提高类胡萝卜素的产量。
- 殷林林俊芳叶志伟郭丽琼简锦辉
- 关键词：类胡萝卜素光照温度诱导子
- 诱导物对猴头菇子实体生长发育及产量的影响被引量：4
- 2017年
- 本文选用了7种诱导物(壳聚糖、茉莉酸甲酯、赤霉素、萘乙酸、三十烷醇、吲哚乙酸和2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))设定不同浓度,采用喷湿方法对猴头菇生长发育影响进行研究,结果表明0.5、1.0 mg/kg的茉莉酸甲酯和0.05、0.5 mg/kg的吲哚乙酸能显著缩短猴头菇的生长周期(p<0.05);1.5、2.0 mg/kg的赤霉素、1.0 mg/kg的萘乙酸及0.5、1.5、2.0 mg/kg的吲哚乙酸能显著提高猴头菇的产量(p<0.05)。其中,0.5 mg/kg吲哚乙酸既能缩短猴头菇生长周期(缩短4 d)又能提高产量(比对照组提高22.18%),有望进一步应用到生产中。
- VIMINHTHUAN李雄郭丽琼林俊芳林俊芳
- 关键词：猴头菇诱导物生长发育
- 基于蛹虫草单核芽生孢子的原生质体制备条件的优化被引量：8
- 2020年
- 为了获得单细胞核的蛹虫草材料和制备原生质体的最适酶解条件,以蛹虫草芽生孢子为试验材料,通过荧光染色观察其细胞核数,以溶壁酶质量分数、酶解温度、酶解时间为试验因子,原生质体得率为响应值,采用单因素和Box-Behnken试验设计进行优化。荧光显微镜观察结果表明蛹虫草芽生孢子为单个细胞核。响应面优化试验结果表明蛹虫草原生质体最适制备条件为:溶壁酶质量分数2.06%,酶解温度26.1℃,酶解时间2.57 h。在此条件下,原生质体得率的预测值为8.97×10^6个/mL,验证试验所得原生质体得率为(9.17±0.29)×10^6个/mL,预测值和试验值差异不显著,回归模型拟合良好。在优化条件下制备的原生质体在含有0.8 mol/L甘露醇的再生培养基上的再生率达43.33%±2.08%。
- 娄海伟余颖豪林俊芳郭丽琼郭丽琼李艳叶志伟云帆
- 关键词：丝状真菌响应面法
- 基于转录组分析的金针菇冷诱导原基形成的调控网络被引量：7
- 2020年
- 金针菇是低温结实型菌类,原基形成需要低温诱导,子实体发育也需要较低的温度,因此在工厂化生产过程中能源消耗大,生产成本高。本研究利用转录组测序对金针菇菌丝体和原基进行RNA-Seq分析,筛选得到7 935个差异表达基因,在原基形成后,有4 025个基因上调表达以及3 910个基因下调表达。通过GO注释和KEGG通路注释等生物信息学手段对代谢途径进行分析,可推测冷诱导形成原基的代谢调控为:当金针菇菌丝细胞接受到冷信号后,糖分转运相关的基因表达量下降,导致碳源摄取效率下降,因而糖酵解途径大部分相关基因表达量下调,进而导致三羧酸循环的底物乙酰辅酶A(乙酰Co A)合成量减少,整个细胞能量产出下降。此负反馈信号使细胞内储存的脂质进行氧化代谢的基因表达上调,产出乙酰Co A以供三羧酸循环产能。此负反馈导致不饱和脂肪酸的合成基因表达上调,以调节细胞流动性;同时磷脂和鞘脂代谢通路的相关基因表达大多上调,合成增多,细胞膜的组分因此改变,因此细胞进行重构进入另一种状态。与DNA复制、RNA转录和蛋白质合成的相关基因表达均大部分上调,表明了原基形成时细胞正处于增殖旺盛时期。本研究结果从分子水平上揭示了金针菇原基的形成伴随着能量来源的转变,各个代谢途径的相互调控以及相关基因的表达影响,为有目的培育高温型金针菇新品种,减少栽培能耗提供理论依据。
- 余颖豪伍土恒叶志伟陈柏雄郭丽琼郭丽琼
- 关键词：金针菇差异表达基因原基代谢途径
- 植物乳杆菌α-葡萄糖基转移酶基因挖掘及表达研究
- 2017年
- α-葡萄糖基转移酶(α-GTF)是一类可以利用麦芽糖,异麦芽糖,O-甲基葡萄糖苷等为底物合成低聚糖的多功能性酶,因其功能多样性和独特性而备受关注。本文利用本团队测序的植物乳杆菌(FMNP01)全基因组信息,采用生物信息学方法分析获得α-葡萄糖基转移酶基因(α-gtf),同时根据NCBI中上传的乳酸菌全基因组信息中的α-GTF的DNA序列设计引物,利用PCR技术分别从植物乳杆菌、干酪乳杆菌和短乳杆菌中克隆得到3个α-gtf基因,其编码的氨基酸序列相似性分别为42%、29%和29%;将克隆得到的3个基因分别与表达载体pET-32a连接构建成表达质粒,转入大肠杆菌BL21表达宿主菌中进行诱导表达,产物经SDS-PAGE分析表明,在75 ku处都有一明显条带,与预期蛋白分子量一致,表明这3个基因成功获得了表达。同时对诱导剂浓度、诱导时间和温度进行优化,可望为以后相关研究奠定了基础。
- 谢露郭丽琼林俊芳叶志伟钟倩婷
- 关键词：乳酸菌基因挖掘原核表达
