浙江省科技攻关计划(2008C22081)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：姜永厚商晗武丁先锋蔡晔吴海港更多>>
- 相关机构：浙江理工大学中国计量学院更多>>
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- EvaGreen实时荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的建立
- 2014年
- 根据GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF4基因序列设计一对特异性引物,通过常规PCR扩增PCV2的ORF4基因,并将其纯化的PCR产物克隆入pMD18-T载体中,构建重组质粒。应用该重组质粒进行EvaGreen实时荧光定量PCR,建立了PCV2 DNA的标准曲线,并进行熔解曲线分析。结果显示:建立的EvaGreen实时荧光定量PCR特异性强,与其他非靶标病毒基因不发生交叉反应;灵敏度高,最高可检测到10拷贝/μL的病毒量;重复性好,3个浓度的批间和批内的变异系数均小于2.5%;对118份临床样品进行检测,阳性样品25份,阳性率为21.2%,检测结果与普通PCR相符率为99.2%,其中一份样品经荧光PCR检测为PCV2阳性,普通PCR检测为阴性。结果表明,建立的EvaGreen实时荧光定量PCR方法具有特异性强、敏感度高、重复性好、简便快捷等特点,可用于临床PCV2感染的早期诊断以及分子流行病学调查。
- 蔡晔饶品彬吴海港姜永厚
- 关键词：猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR
- 猪瘟病毒基因芯片检测技术的建立与应用被引量：5
- 2009年
- 应用寡聚核苷酸基因杂交技术建立一种快速可靠的检测猪瘟病毒的方法。在CSFV病毒保守序列5′非编码区设计了两对特异性引物，在此引物之间设计了特异的核苷酸探针（22—30mer）。通过PCR扩增Cy5标记的DNA片段与固定在玻片表面的探针杂交进行CSFV检测。该技术结合了PCR方法的高度敏感性和DNA-DNA杂交技术的选择特异性。并利用该方法对87例临床样品进行了检测鉴定，结果分析显示，可准确鉴别CSFV病毒，灵敏度与琼脂糖凝胶检测接近，可检测到的质粒最低浓度为0．4pg／μl。结果表明寡核苷酸基因芯片技术可有效地应用于CSFV临床诊断和分子流行病学调查。
- 姜永厚商晗武徐辉陈伟杰丁先锋赵灵燕
- 关键词：猪瘟病毒基因芯片
