国家高技术研究发展计划(2006AA020104)
- 作品数：9 被引量：49H指数：5
- 相关作者：许正宏张萌张倩李孟金雪霞更多>>
- 相关机构：江南大学武汉理工大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学环境科学与工程更多>>
- 谷氨酸棒杆菌ilvE基因的敲除对相关氨基酸合成的影响被引量：4
- 2012年
- L-缬氨酸是谷氨酸棒杆菌SYPS-062发酵生产L-丝氨酸的主要副产物。为减少L-缬氨酸的积累,利用基因重组技术敲除SYPS-062转氨酶B编码基因ilvE内部的987 bp核苷酸序列,构建了ilvE基因缺失突变株SYPS-062△ilvE。研究表明,重组菌ilvE基因的缺失直接导致了分支氨基酸(Val、Ile、Leu)的合成能力的降低,影响了菌体的生长,其中Ile成为生长限制性因子,在培养基中添加分支氨基酸能明显促进其生长。重组菌培养96 h,发酵液中L-缬氨酸含量低于0.5 g/L,与出发菌株相比,其生成率降低90%。
- 罗玉常窦文芳张晓梅史劲松许正宏
- 关键词：L-缬氨酸L-异亮氨酸L-丝氨酸谷氨酸棒杆菌
- 预氧化工艺强化处理环氧丙烷废水的试验研究被引量：6
- 2008年
- 以环氧丙烷废水为研究对象初步研究了H2O2预氧化作为预处理的最佳试验条件以及预氧化+生物接触氧化工艺处理效果。结果表明,H2O2预氧化法预处理环氧丙烷废水取得了良好效果,经预处理后,COD总去除率可达到92%,提高了废水的可生化性。
- 李孟张倩
- 关键词：环氧丙烷废水预氧化生物接触氧化
- 产L-丝氨酸菌株SYPS-062的鉴定及碳源对发酵的影响被引量：6
- 2009年
- 采用形态学、生理生化实验和16SrDNA序列分析的方法对从自然界中筛选得到的一株能直接利用糖质原料发酵生产L-丝氨酸菌株SYPS-062的分类地位进行了研究,确定其为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)。同时考察了碳源对菌株SYPS-062发酵产L-丝氨酸的影响,实验结果表明,当蔗糖浓度为60g/L时,菌株SYPS-062生物量和L-丝氨酸的积累均达到最大值,分别为8.1g/L和6.6g/L。
- 张晓梅窦文芳许泓瑜许正宏
- 关键词：L-丝氨酸谷氨酸棒杆菌直接发酵
- 酵母耦合原位分离技术不对称合成(R)-扁桃酸甲酯
- 2010年
- 以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae AS2.1392)全细胞为催化剂不对称还原苯甲酰甲酸甲酯合成(R)-扁桃酸甲酯,该催化剂催化速度快、操作稳定性好。研究了底物和产物浓度对反应初速度的影响,建立了底物和产物抑制模型,并采取分批加入底物和添加树脂的方式解除底物和产物抑制。通过考察不同树脂对底物和产物的吸附量以及对生物还原反应的影响,筛选出了一种较适合的大孔吸附树脂NKA-Ⅱ。在优化的树脂加入量和加入模式下,当底物浓度为180mmol/L时,产物产率由35.0%提高到71.2%,对映体过量值(ee)保持在95%左右。
- 郭金玲穆晓清徐岩
- 关键词：酿酒酵母
- 嗜盐脂肪酶产生菌的筛选及其粗酶性质被引量：15
- 2009年
- 从内蒙古锡林浩特地区盐湖菌种样品分离获得一株嗜盐脂肪酶高产菌，结合生理生化试验和16SrDNA序列分析结果，鉴定并命名为Haloterrigena thermotoleransZ4。该菌最适生长NaCI浓度为3．5mol／L，最高生长温度为60℃，属于嗜盐耐热古生菌。粗酶性质研究表明，金属离子（Ba^2＋、Fe^2＋、Cu^2＋）对酶有激活作用，酶活不同程度的提高了20％～30％；该酶受EDTA的抑制，酶活下降了20％，受PMSF的完全抑制。该酶对NaCl有较高的依赖专一性，至少需要0．5mol／LNaCl维持活性并且高浓度NaCl可以提高其耐热水平。醇类物质对于提高酶的热稳定性有一定作用，丙三醇效果最好。该酶对短链底物对硝基苯酚丁酸酯（p—NPB）的最适水解条件为：pH8．0、70℃、3．5mol／LNaCl：而对长链底物对硝基苯酚十六酸酯协NPP）的最适水解条件为：oH8．0、80℃、2．5mol／LNaCl。
- 张萌张晓梅窦文芳许泓瑜许正宏
- 关键词：嗜盐古生菌酶学性质
- 谷氨酸棒杆菌SYPS-062 L-丝氨酸脱水酶活性分析及其基因敲除对L-丝氨酸积累的影响被引量：3
- 2011年
- 以谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)SYPS-062基因组DNA为模板,扩增得到L-丝氨酸脱水酶(L-SerDH)的编码基因sdaA。将其克隆到表达载体pET-28a(+),并在E.coli BL21(DE3)中诱导表达,对纯化的L-SerDH进行了酶活测定,并与来自C.glutamicum ATCC13032的重组L-SerDH进行了比较,结果显示,两种不同菌株来源的重组L-SerDH降解L-丝氨酸的酶比活力差异并不显著。在此基础上敲除菌株SYPS-062的sdaA基因,探讨该基因对C.glutamicum SYPS-062生长及产酸的影响。通过构建自杀型重组质粒pK18mobsacB-△sdaA,电击转入C.glutamicum SYPS-062中,以同源重组的方式获得了sdaA基因缺失突变株,并用PCR方法对突变株C.glutamicum SYPS-062△sdaA进行了验证。与出发菌株相比,突变菌株生长缓慢,单位菌体L-丝氨酸的产量(YP/X)提高了15.13%。
- 金雪霞张晓梅窦文芳许泓瑜许正宏
- 关键词：L-丝氨酸谷氨酸棒杆菌
- 一株产脂肪酶嗜盐菌的鉴定及耐盐机理被引量：13
- 2010年
- 从采自内蒙古锡林浩特地区盐湖的样品中筛选到产脂肪酶嗜盐菌JNPH-3,该菌株可在含有1.5～5mol/L NaCl的培养基上生长,最适生长温度45℃,最适pH7～9.5.经形态学分析、生理生化实验及16SrDNA鉴定,JNPH-3菌株为Halorubrum aidingense,属于极端嗜盐菌.JNPH-3菌株在生长过程中专一性依赖Na+,对Cl-依赖性较小,K+浓度变化对菌体生长无明显影响.高效液相色谱分析表明,JNPH-3菌株在液体复合培养基中能够产生四氢嘧啶,且与环境中盐浓度呈负相关,说明JNPH-3体内除存在产生四氢嘧啶的机制来维持渗透平衡,还有其它机制来维持细胞正常生长.
- 张晓梅窦文芳许泓瑜许正宏
- 关键词：菌种鉴定脂肪酶极端嗜盐菌四氢嘧啶
- 谷氨酸棒杆菌SYPS-062合成L-丝氨酸的代谢通量分析被引量：7
- 2010年
- 以一株由自然界筛选获得的能够利用糖质原料直接产L-丝氨酸的谷氨酸棒杆菌Corynebacterium glutamicum SYPS-062为研究对象,考察了一碳单元循环中的辅因子—叶酸和维生素B12对菌株生长、蔗糖消耗及L-丝氨酸生成的影响,同时对处于对数生长期的菌株进行了代谢流量分析。结果发现,添加扰动因子叶酸和维生素B12对磷酸戊糖途径(HMP)碳流影响较大,碳源主要用于细胞生长及合成能量,而流向目的产物L-丝氨酸的碳流减少。同时在添加维生素B12时,增大了G3P节点的L-丝氨酸合成途径的分流比,但造成三羧酸循环(TCA)的流量不足,需要大量回补,从而限制了产物合成速率的进一步提高。
- 张晓梅窦文芳许泓瑜许正宏
- 关键词：谷氨酸棒杆菌L-丝氨酸代谢通量分析
- 氨基脱氧分支酸合成酶对Corynebacterium glutamicum SYPS-062积累L-丝氨酸的影响被引量：1
- 2011年
- 为阐明氨基脱氧分支酸合成酶(ADC合成酶)在Corynebacterium glutamicum SYPS-062体内积累L-丝氨酸过程中的作用,通过交叉PCR以及同源重组的方法敲除叶酸途径关键酶ADC合成酶的编码基因pabAB,构建了叶酸缺陷型菌株Corynebacterium glutamicum SYPS-062△pabAB,同时构建pabAB基因增强表达重组菌C.glutamicum SYPS-062(pJC I-pabAB)。分别考察了ADC合成酶对菌株生长的影响、对L-丝氨酸降解途径关键酶丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)的影响以及其对L-丝氨酸积累的影响。结果表明,与出发菌株相比,增强表达基因pabAB重组菌的ADC合成酶的酶活力提高了33%,SHMT酶的酶活力提高了30%,其最大比生长速率(μ_m)提高了48%,单位细胞产酸率(Yp/x)降低了36.2%;而敲除基因pabAB重组菌的ADC合成酶的酶活力降低了61%。SHMT酶的酶活力降低了20%,最大比生长速率降低了32%,单位细胞产酸率提高了12%。
- 苑亮张晓梅窦文芳许泓瑜许正宏
- 关键词：同源重组基因敲除
