浙江省自然科学基金(Y205672)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
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- 细菌脂多糖及糖皮质激素对角膜基质成纤维细胞Toll样受体表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 通过研究细菌脂多糖（LPS）对人角膜基质成纤维细胞（HCF）Toll样受体（TLR）表达的影响,以及糖皮质激素对这种影响的调控作用,探讨TLR及糖皮质激素在角膜细菌感染中的可能作用.方法 选取人供体角膜细胞,对其进行分离、培养和鉴定,通过RT-PCR及quantitative Real-time PCR检测角膜基质成纤维细胞中TLR在mRNA水平的表达;并在细胞培养液中加入3种浓度LPS（1、10、100 ng/ml）共培养,检测TLR的表达.在此基础上,选择在10 ng/ml LPS的细胞培养液中加入糖皮质激素氢化可的松（1、10、100 μg/ml）进行干预,并通过Real-time PCR检测此种情况下HCF中TLR的表达.再通过免疫荧光组化来检测TLR2、TLR4在蛋白水平的表达.各组数据的差异性采用Student t检验和非参数秩和检验,Real-time PCR的倍数间的比较采用非参数统计.结果 TLR1-10 mRNA在HCF中均有表达,且表达量各不相同,其中TLR2、TLR4、TLR5、TLR7、TLR8、TLR10呈高表达.LPS能增加HCF中TLR mRNA的表达,且当LPS为10 ng/ml时,TLR的表达量最高.加入氢化可的松干预后,随着激素浓度的增加,HCF中TLR mRNA的表达却随激素浓度的增高而下降.免疫荧光组化结果显示,在10 ng/ml LPS刺激、10 ng/ml LPS＋10 μg/ml氢化可的松共同刺激以及正常条件培养3种情况下,TLR2、TLR4在HCF内均有表达,且强度不同,趋势与分子水平的表达一致.结论 TLR1～10 mRNA在HCF中均有表达.LPS能改变角膜基质成纤维细胞TLR mRNA的表达,提示该细胞表达的TLR与角膜抵御细菌的固有免疫密切相关;糖皮质激素可以调控LPS刺激的HCF TLR的表达,即对LPS刺激的HCF TLR的表达表现出抑制;提示当细菌的侵袭突破角膜上皮到达基质时,糖皮质激素起到了免疫抑制的作用.
- 秦勤瞿佳李一壮
- 关键词：TOLL样受体角膜基质细菌脂多糖糖皮质激素细胞因子
- Toll样受体介导的信号通路及其与眼部感染性疾病的关系被引量：6
- 2007年
- Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是一天然模板识别受体家族,能识别固有性模板,其介导的信号转导通路在对抗外来病原体的天然免疫应答中起重要作用。越来越多的研究已经发现人眼角膜细胞、巩膜、结膜、葡萄膜、视网膜、虹膜内皮细胞、睫状体等都能表达TLRs,而且与眼部的免疫和炎症反应密切相关。我们就TLRs的信号转导方式及其和眼部感染性疾病关系做一综述。
- 秦勤瞿佳
- 关键词：TOLL样受体信号转导通路感染性眼病
- 细菌脂多糖及糖皮质激素对角膜上皮细胞Toll样受体表达的影响被引量：4
- 2010年
- 目的通过研究细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人角膜上皮细胞系(hunman corneal epithelial cell line,HCEC)中Toll样受体(toll-like receptors,TLR)的表达和功能的影响,以及糖皮质激素对这种影响的调控,探讨TLR及糖皮质激素在角膜细菌感染中的作用。方法通过RT-PCR及实时PCR检测角膜上皮细胞中TLRmRNA的表达;并在细胞培养液中加入3种浓度LPS(1μg.L-1、10μg.L-1、100μg.L-1)共培养,检测TLR的表达;以及在此基础上,选择在10μg.L-1LPS刺激的细胞培养液中分别加入氢化可的松(1×103μg.L-1、10×103μg.L-1、100×103μg.L-1)进行干预,并检测TLRmRNA的表达;再采用酶联免疫吸附实验检测细胞培养液中IL-6、IL-8的释放;并通过免疫荧光组织化学检测TLR蛋白的表达。结果 TLR1-TLR10mRNA在HCEC中均有表达,且表达量各不相同,其中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6高表达。LPS能增加细胞TLRmRNA的表达,且当LPS为10μg.L-1时,TLRmRNA的表达量最高,同时IL-6、IL-8的释放也相应增加。加入氢化可的松干预后,随着激素浓度的增高,HCEC中TLRmRNA的表达也随之增加,此时IL-6的释放减少,IL-8的释放增加。免疫荧光组织化学也显示了3种浓度激素干预下HCEC的TLR2蛋白、TLR4蛋白在胞内均有表达,且强度不同,趋势与分子水平的表达一致。结论 LPS能改变角膜上皮细胞TLRmRNA的表达,提示上皮细胞表达的TLR与角膜抵御细菌的固有免疫密切相关;糖皮质激素可以调控LPS刺激的HCEC中TLR的表达,即轻度促进LPS刺激的HCEC中TLR的表达,在细菌侵袭角膜的早期,糖皮质激素可能具有一定的免疫促进作用。
- 秦勤晋秀明瞿佳
- 关键词：TOLL样受体角膜上皮细胞细菌脂多糖糖皮质激素细胞因子
