哈尔滨市青年科技创新人才专项资金项目(2012RFQXN003)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：张瑞莉马德星高铭扬马春丽李广兴更多>>
- 相关机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金哈尔滨市青年科技创新人才专项资金项目博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 三种鸡细胞因子mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：2
- 2013年
- 为建立鸡细胞因子SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中三种重要的鸡细胞因子即ChIL-12、ChIL-15、ChIL-18的基因序列,以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(ChGAPDH)基因为内参,设计特异引物扩增目的基因。将四种基因克隆至pMD18-T载体上,得到各自阳性克隆质粒,以四种阳性质粒为标准品建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。结果显示,当标准品稀释度为1×102～1×1010 copies/μL时,四种基因的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数均大于0.985。熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好。应用建立的方法对堆型艾美耳球虫核酸疫苗pcDNA-Ea3-1E免疫的SPF雏鸡脾中ChIL-12mRNA和ChIL-18 mRNA的相对表达量进行检测,免疫组ChIL-12mRNA和ChIL-18mRNA的相对表达量均极显著高于空白对照组(P<0.01)。研究结果为ChIL-12、ChIL-15、ChIL-18的定量分析提供了技术平台。
- 高铭扬马春丽马德星李广兴张瑞莉
- 关键词：细胞因子SYBR实时荧光定量RT-PCR
