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杭州市卫生科技计划项目(2010B020)
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1
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丁虹
王新国
黄利华
韩淼
刘寿荣
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硫化氢对再生肝细胞中细胞周期蛋白D1和p21Cip/WAK-1的影响
2013年
目的观察肝细胞增殖时硫化氢对细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和v21Cip/WAK-1的影响。方法肝穿刺获取慢性乙型肝炎患者肝组织,并分离培养肝细胞。所获肝细胞分为4组,前3组分别给予促肝细胞生长素(HGF组),炔丙基甘氨酸(PPG)和HGF(PPG+HGF组),硫氢化钠(NariS)+HGF(NaHs+HGF组),剩余1组作为空白对照组。肝细胞培养24h后行台盼兰拒染实验及MTY比色法测定细胞增殖,利用去蛋白法检测细胞上清液中的硫化氢,免疫印迹(Western)检查细胞内p21Cip/WAK-1和CyclinD1变化情况。细胞洗涤后,提取各组细胞DNA,判定硫化氢对DNA的影响。结果培养后肝细胞的活性均超过90%。MTF比色法测定结果显示:与对照组比较,HGF组肝细胞增殖明显增强(0.713±0.207:0.411±0.113),且差异有统计学意义(t=6.943,P〈0.01);与HGF组相比,PPG+HGF组细胞增殖明显增强(0.965±0.329:0.713±0.207),差异有统计学意义(t=4.017,P〈0.05),NariS+HGF组细胞增殖明显减弱(O.513±0.156:0.713±0.207),差异有统计学意义(t=5.328,P〈0.05)。Western实验结果显示,PPG+HGF组p21cip/WAK-1表达增加而CychnDI表达降低,NaHS+HGF组两者表达量呈相反趋势。HGF组和PPG+HGF组DNA复制明显增加,而NaHS+HGF组DNA无明显复制。结论硫化氢可能通过抑制细胞CyclinD1和增加p21Cip/WAK-1表达抑制肝细胞增殖。
王新国
韩淼
丁虹
黄利华
刘寿荣
关键词:
硫化氢
肝细胞
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