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转录因子ZNF191腺病毒表达载体的构建及鉴定被引量：2: 2011年; 目的:构建转录因子ZNF191腺病毒表达载体,为进一步研究ZNF191的生物学功能与肿瘤的基因治疗奠定基础。方法:从HEK293细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增ZNF191基因,并将ZNF191亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV中,酶切及DNA测序鉴定后,将含ZNF191基因的重组穿梭质粒pAdTrack-ZNF191经PmeⅠ线性化后转化pAdEasy-1感受态细菌。pAdEasy-ZNF191质粒经PmeⅠ线性化后转染293T细胞,包装重组腺病毒Ad-ZNF191,并进行PCR鉴定、Western blot检测受感染MCF-7细胞内ZNF191蛋白的表达。结果:证实pAdTrack-CMV-ZNF191及pAdEasy-ZNF191质粒构建正确,收获病毒后PCR及DNA测序结果证明Ad-ZNF191包装成功,腺病毒感染MCF-7细胞内ZNF191蛋白表达明显提高。结论:成功构建了ZNF191基因重组腺病毒表达载体Ad-ZNF191,为进一步研究ZNF191的生物学功能与肿瘤的基因治疗奠定基础。; 王晓鹏李梦文厉建中; 关键词：ZNF191 腺病毒基因治疗

人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位被引量：2: 2011年; 目的克隆人核糖体蛋白S3a(Ribosomal protein S3a,RPS3a)基因,并表达、纯化其蛋白,分析RPS3a蛋白的细胞定位,为其功能研究奠定基础。方法应用RT-PCR从人胚肾HEK293细胞的总RNA中反转录并扩增出RPS3a基因,克隆到原核表达载体PET-21a中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)进行蛋白表达。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,PET21a-RPS3a融合表达载体在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中以可溶性蛋白的形式高效表达RPS3a蛋白,超声破碎细胞,通过Ni^(2+)-NTA亲和层析柱初步纯化,再应用50kD超滤膜进一步纯化。用Western Blot印迹实验检测纯化后的蛋白。构建绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)的pEGFP-N1-RPS3a表达载体,转染HEK293细胞,通过荧光显微镜观察RPS3a重组荧光蛋白在细胞内的分布。结果获得了较高纯度的RPS3a蛋白,亚细胞定位分析表明RPS3a蛋白主要分布于细胞质。结论成功克隆了RPS3a基因并表达纯化了其蛋白,确定其亚细胞分布,为进一步研究RPS3a蛋白的性质和功能奠定了基础。; 刘莹厉建中张俊平; 关键词：原核表达蛋白纯化亚细胞定位

ZNF24基因过表达慢病毒载体的构建及其在人结直肠癌HCT116细胞中的表达: 2023年; 目的通过构建ZNF24基因过表达慢病毒载体,建立ZNF24基因过表达的人结直肠癌HCT116细胞株,为开展后续研究提供物质基础。方法通过PCR扩增ZNF24基因序列片段和3FLAG标签序列片段,并将两产物通过同源重组克隆至慢病毒载体pMT406中,构建成重组表达ZNF24慢病毒质粒pMT-ZNF24。将重组质粒pMT-ZNF24与辅助包装载体质粒pCMV-dR8.9和pCMV-VSV-G一起共转染293T细胞并收集慢病毒。应用孔稀释法检测病毒滴度,用qRT-PCR和蛋白印迹法检测慢病毒转染HCT116细胞后ZNF24的表达水平。结果成功构建了重组载体pMT-ZNF24,并获得相应的病毒,病毒滴度为3.25×10^(9) TU/ml。转染重组ZNF24慢病毒的HCT116细胞中ZNF24表达水平显著高于空白组和阴性对照组细胞。结论构建了ZNF24基因过表达慢病毒载体,并获得相应的病毒和稳定表达ZNF24的HCT116细胞株。; 田硕厉建中; 关键词：结直肠癌慢病毒载体

高表达转录因子ZNF191基因的慢病毒颗粒的构建及鉴定被引量：1: 2013年; 目的构建转录因子ZNF191基因的慢病毒颗粒,为进一步研究ZNF191的生物学功能及其在肿瘤基因治疗方面的应用奠定基础。方法从HEK293细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增ZNF191基因,亚克隆至pLVX-AcGFP-N1质粒中,经酶切及DNA测序鉴定正确后,将含有ZNF191基因的重组质粒pLVX-ZNF191结合辅助质粒转染HEK293T细胞,包装重组慢病毒,Western blot检测感染的293T细胞内ZNF191蛋白的表达。结果酶切及测序鉴定pLVX-ZNF191质粒构建正确,Western blot检测重组慢病毒能显著提高293T细胞的ZNF191蛋白表达水平。结论已成功构建了ZNF191基因重组慢病毒表达载体pLVX-ZNF191,为进一步研究ZNF191的生物学功能及肿瘤的基因治疗奠定了基础。; 梁延杰刘东阳陆范厉建中; 关键词：锌指蛋白慢病毒

GST-pulldown验证转录因子ZNF24与c-Myc的相互作用被引量：1: 2014年; 目的:前期酵母双杂交实验中,我们以转录因子ZNF24的SCAN结构域为诱饵,筛选到的一个阳性克隆为原癌基因c-Myc,在此进一步验证ZNF24与c-Myc间的相互作用。方法:将ZNF24与c-Myc分别构建到p GEX-4T-2和pc DNA3.1表达载体上,利用GST-pulldown技术体外验证两者表达蛋白的相互作用。结果:电泳鉴定与测序分析表明目的基因克隆正确,载体构建成功;用GST-pulldown技术检测到ZNF24与c-Myc相互作用的蛋白条带。结论:GST-pulldown实验进一步表明ZNF24与c-Myc的相互作用,为验证ZNF24与c-Myc之间存在相互作用奠定了基础。; 赵靖凯王聪张籍鹏厉建中

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国家自然科学基金(30871353)