国家自然科学基金(31372391) 作品数:28 被引量:82 H指数:6 相关作者: 杨树宝 栾维民 张英楠 张美玲 马馨 更多>> 相关机构: 吉林农业大学 吉林医药学院 生物技术有限公司 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 吉林省自然科学基金 吉林省科技发展计划基金 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
不同日龄鸡肺脏中CD4^+、CD8^+ T淋巴细胞分布规律 被引量:6 2019年 为了解鸡肺脏不同时期的免疫状态,选择不同日龄海兰白鸡的肺脏组织,利用免疫组织化学方法研究CD4^+和CD8^+T淋巴细胞的出现、定位分布及数量变化过程。结果显示,CD8^+细胞最初于18 d胚胎中出现,而CD4^+T淋巴细胞于孵化后1日龄雏鸡中出现。4日龄时,在初级支气管与次级支气管交汇处有淋巴细胞的聚集物,即形成了明显的支气管相关性淋巴组织(BALT)。在定位分布上,各日龄CD4^+T淋巴细胞主要占据BALT的中央区域,而CD8^+T淋巴细胞主要环绕在外周。从56日龄开始,CD8^+T细胞较CD4^+T细胞分布范围更为广泛,在三级支气管气道内壁中、房间隔中、气体交换区和小叶间结缔组织中均有分布,散布在整个肺脏中。在数量变化上,随着日龄增长,CD4^+T淋巴细胞和CD8^+T淋巴细胞数量均逐渐增加,且35日龄之前CD4^+T细胞数量多于CD8^+T细胞,而此后各日龄CD8^+T细胞的数量均显著多于CD4^+细胞。以上结果表明,鸡肺脏中CD4^+和CD8^+T淋巴细胞的分布和数量均呈日龄相关性变化,且该变化说明鸡35日龄之前肺脏以体液免疫为主,而之后则倾向于细胞免疫。 张英楠 徐晶 栾维民 杨树宝关键词:肺脏 CD4^+T淋巴细胞 CD8^+T淋巴细胞 刺五加多糖对免疫抑制雏鸡血液免疫相关细胞因子mRNA转录水平影响的研究 被引量:7 2021年 为研究刺五加多糖(ASPS)对环磷酰胺(CTX)所致免疫抑制雏鸡的免疫调节机制,本研究将300只4日龄海兰褐公雏,随机分为3组,每组100只:第1组为空白对照组,第2组为环磷酰胺(CTX)致免疫抑制组,第3组为ASPS+CTX组。第2组和第3组按照80 mg/kg/d的剂量皮下注射CTX,连续注射3 d;从注射后第4 d(10日龄)开始,第3组每天每只鸡皮下注射0.2 mL 200 mg/mL ASPS,连续注射3 d;第1组和第2组以同样方式注射等量灭菌生理盐水。注射后的第7 d(19日龄)、14 d(25日龄)、21 d(31日龄)和28 d(37日龄)分别采血分离淋巴细胞,经荧光定量PCR检测各组雏鸡血液中各细胞因子mRNA的转录水平。结果显示,CTX能够造成雏鸡血液中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-α等8种细胞因子mRNA的转录水平均显著下降(p<0.05),显著抑制了雏鸡的免疫功能。ASPS+CTX组鸡在注射ASPS后各时间段Th1类细胞因子IFN-γ和IL-2 mRNA转录水平较CTX组均显著提高(p<0.05),而Th2类细胞因子IL-4和IL-10 mRNA转录水平则是在注射后第21 d和28 d较CTX组显著提高(p<0.05),表明ASPS对CTX所致Th1类和Th2类细胞因子mRNA转录水平下降的修复在早期以升高Th1类细胞因子为主。ASPS+CTX组各日龄鸡炎性细胞因子IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-αmRNA转录水平虽然显著高于CTX组(p<0.05),但除了IL-6随鸡日龄的增长变化幅度较大外,其他3种炎性细胞因子则随鸡日龄的增长上升幅度不大,表明ASPS对CTX所致的炎性细胞因子mRNA转录水平下降具有明显的修复作用,但是修复效果与鸡的日龄相关性不大。综上,ASPS能够不同程度地促进CTX致免疫抑制雏鸡血液中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-α等8种细胞因子mRNA的转录,从而使机体恢复正常的免疫状态。本研究从分子水平证明了ASPS的免疫增强作用,为进一步揭示其免疫机制奠定了基础。 张英楠 刘洪章 杨树宝关键词:刺五加多糖 雏鸡 免疫抑制 细胞因子 MRNA 刺五加多糖对免疫抑制雏鸡脾脏中T淋巴细胞分布及免疫功能的影响 被引量:7 2021年 试验旨在研究刺五加多糖(ASPS)对免疫抑制雏鸡脾脏中T淋巴细胞分布及免疫功能的影响,从而对ASPS的免疫增强作用进行评价。300只4日龄海兰褐公雏随机分为3组,每组100只:第1组为空白对照组,第2组为环磷酰胺(CTX)致免疫抑制组,第3组为ASPS+CTX组。第2组和第3组按照80 mg/kg·d的剂量皮下注射CTX,连续注射3 d。从10日龄开始,第3组每只鸡每天皮下注射0.2 m L 200 mg/m L的ASPS,连续注射3 d。第1组和第2组以同样方式注射等量灭菌生理盐水。注射后的第7、14、21和28天分别取脾脏,通过免疫组织化学染色和流式细胞术检测脾脏中CD4+、CD8+T淋巴细胞分布和数量变化,并利用荧光定量PCR方法检测脾脏中IFN-γ和IL-2 m RNA表达水平的变化。结果显示:CTX能够造成脾脏中CD4+和CD8+T淋巴细胞数量均显著减少(P<0.05),主要由CD4+细胞构成的PALS数量减少或消失,红髓和白髓中的CD4+和CD8+T淋巴细胞分布范围均减小,而且细胞排列疏松,IFN-γ和IL-2m RNA表达水平较空白对照组显著减少(P<0.05);在ASPS的作用下,ASPS+CTX组CD4+和CD8+T淋巴细胞的数量均比CTX组显著增加(P<0.05),PALS面积逐渐增加,而且结构逐渐完整清晰,CD8+T淋巴细胞的分布范围显著增加,红髓和白髓中CD8+细胞分布更加密集,免疫后28 d时基本恢复正常水平,IFN-γ和IL-2 m RNA表达水平显著提高(P<0.05)。结果表明,ASPS对CTX造成的脾脏中CD4+和CD8+T淋巴细胞定位分布和数量异常以及IFN-γ和IL-2 m RNA表达水平下降有显著的修复作用,证明ASPS对鸡脾脏免疫功能具有显著的增强作用。 张英楠 刘洪章 杨树宝关键词:刺五加多糖 免疫抑制 T淋巴细胞 细胞因子 海兰白蛋鸡法氏囊中T淋巴细胞的发育规律 2020年 为研究不同日龄海兰白蛋鸡法氏囊中T淋巴细胞发育规律,试验分别选择15,18,20胚龄和出生后1,4,7,10,14,21,35,56日龄海兰白鸡胚和雏鸡进行采样,将所采集到的法氏囊样本制备超薄冰冻切片,通过免疫组织化学方法结合生物显微图像分析技术,研究不同发育阶段鸡法氏囊中的CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的出现、迁移、组织定位和分布。结果表明:15胚龄鸡法氏囊首次检测到CD3+和CD4+T淋巴细胞,其散在的分布于法氏囊淋巴滤泡中,在4日龄以后同时分布于淋巴滤泡皮质和髓质交界的结缔组织和小梁中。18胚龄鸡法氏囊中首次检测到CD8+T淋巴细胞,1日龄后CD8+T淋巴细胞分布规律与CD3+和CD4+T淋巴细胞相似,开始为散在地分布于淋巴滤泡中,之后逐渐向皮质边缘和皮质间小梁处靠近,到56日龄时,CD8+T淋巴细胞主要分布于皮质间小梁处。这说明,随着日龄增长,鸡法氏囊中T淋巴细胞及其亚群的分布和数量呈现日龄相关性变化,这对探讨蛋鸡在胚胎时期以及出壳初期的法氏囊的细胞免疫状态具有重要意义,同时也为鸡群适时免疫和疾病防治等相关研究提供一定参考依据。 张春 栾维民 张英楠关键词:蛋鸡 法氏囊 T淋巴细胞 免疫功能 发育 中药多糖对巨噬细胞和树突状细胞免疫调节作用的研究进展 被引量:12 2018年 中药多糖有安全、无副作用及显著的免疫刺激效应的特点,是理想的免疫调节剂。目前对中药多糖免疫调节作用的研究多集中在抗体水平、器官指数等免疫指标的影响,为了揭示中药多糖的免疫调节机制,需进一步研究中药多糖对巨噬细胞及树突状细胞的免疫调节作用,尤其是对相关信号通路的影响。研究表明,中药多糖可通过Toll样受体、蛋白激酶C(PKC)、甘露糖受体(MR)等多种信号通路激活、诱导巨噬细胞及树突状细胞的成熟,减少树突状细胞的内吞作用,增强巨噬细胞吞噬能力及T细胞增殖力,促进细胞因子的释放等多种作用对机体进行免疫调节。主要从机体在正常情况、LPS诱导的炎症条件下中药多糖对巨噬细胞及树突状细胞的免疫调节作用,及不同的化学修饰后的中药多糖免疫调节作用的改变进行综述。 秦延军 杨树宝 孙朋 孙博东 张美玲 王凤娇 马盼盼关键词:中药多糖 巨噬细胞 树突状细胞 信号通路 免疫调节 刺五加多糖对雏鸡脾脏中CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞定位分布的影响 被引量:2 2021年 为了研究刺五加多糖(ASPS)对雏鸡脾脏中CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞定位分布的影响,从组织学角度评价ASPS对脾脏的免疫调节作用,试验将1日龄海兰褐公雏饲养至7日龄时选取150只,随机分为3组:空白对照组、ASPS低剂量组(ASPS_(L))和高剂量组(ASPS_(H)),每组50只,所有组每天注射1次,连续注射3 d。免疫后的第7、14、21和28天分别取其脾脏制作冰冻切片,采用免疫组织化学方法检测CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞的定位分布。结果显示,与空白对照组比较,免疫注射后21 d和28 d时ASPS_(L)组和ASPS_(H)组CD4^(+)T淋巴细胞的数量均显著增加(P<0.05),而且ASPS能够促进红髓中CD4^(+)T淋巴细胞向动脉周围淋巴鞘迁移,从而使单个动脉周围淋巴鞘面积较对照组明显增加,而ASPS对脾脏中CD8^(+)T淋巴细胞的数量和分布无明显影响。由此可知,ASPS能够通过影响脾脏中CD4^(+)T淋巴细胞的定位分布发挥免疫调节作用,这对于进一步揭示ASPS的免疫调节机制具有重要意义。 张英楠 徐晶 张桂山 杨树宝关键词:刺五加多糖 脾脏 刺五加多糖对鸡血液免疫相关细胞因子mRNA表达水平的影响 被引量:6 2021年 本研究通过实时荧光定量PCR方法,观察皮下注射刺五加多糖(ASPS)对雏鸡血液免疫相关细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-αmRNA表达水平的影响,从而通过分子水平对ASPS的免疫增强作用进行评价。1日龄海兰褐公雏饲养至7日龄时选取150只,随机分为3组,每组50只。第1组和第2组为ASPS低剂量组和高剂量组,分别用ASPSL和ASPSH表示,两组分别皮下注射100 mg/mL和200 mg/mL的ASPS;第3组为空白对照组,注射等量灭菌生理盐水。所有组每天注射1次,ASPS和生理盐水均为0.2 mL,连续注射3 d。免疫后的第7、14、21、28天分别取血液分离淋巴细胞,提取淋巴细胞中的总RNA,反转录成cDNA,以进行荧光定量PCR检测。结果显示,在ASPS作用下,Th1类细胞因子(IFN-γ、IL-2)和Th2类细胞因子(IL-4、IL-10) mRNA的表达量呈现不同的变化趋势,IFN-γ和IL-2较早开始增多,并在免疫后第21天时达到峰值后下降,而IL-4和IL-10变化较晚,但是持续增多,并在免疫后第28天达到峰值。同时,ASPS能够不同程度地增加IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-αmRNA表达量,尤其是IL-6,相比于其他细胞因子,IL-6的mRNA相对表达量变化幅度最大,免疫后第21、28天各组表达水平接近,ASPSH组的相对表达量最高,达到5左右。结果表明,ASPS能够不同程度地促进IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-α等8种细胞因子的mRNA表达,但是表达的变化幅度、变化趋势以及变化时间均有不同。 张英楠 徐晶 张桂山 杨树宝关键词:刺五加多糖 细胞因子 MRNA 淋巴细胞 刺五加多糖对雏鸡黏膜淋巴组织发育影响的组织学观察 2021年 为了研究刺五加多糖(ASPS)对雏鸡黏膜淋巴组织发育的影响,试验从组织学水平对ASPS的黏膜免疫增强作用进行了评价,选取7日龄海兰褐公雏100只,随机分为ASPS组和对照组,每组50只。两组分别皮下注射200 mg/mL的ASPS和灭菌生理盐水0.2 mL,每天给药1次,连续3 d。最后一次给药(9日龄)后的第7,14,21,28天分别取盲肠扁桃体(CT)、肺脏和眼结膜,制作病理切片并进行H.E.染色,观察并比较两组器官中淋巴组织的结构变化。结果表明:与对照组比较,ASPS组CT黏膜固有层底部的淋巴组织更为发达,生发中心数目明显增多,而且单个面积明显增加,尤其是给药后21,28天时更为明显;ASPS组各日龄肺脏中的支气管相关淋巴组织(BALT)均比同日龄对照组发达,从最后一次给药后第14天开始,位于初级支气管黏膜中的淋巴组织开始大范围合并,合并程度和面积明显大于对照组,并且黏膜上皮已经转变为淋巴上皮,到21,28天时BALT更为发达,而且突入到初级支气管管腔中;与对照组比较,ASPS组结膜相关淋巴组织(CALT)出现和发育都较早,最后一次给药后14天CALT所在的黏膜上皮已经转化为淋巴上皮,21天时在黏膜底部出现生发中心。说明ASPS能够增加CT淋巴组织、BALT和CALT面积,并促进这些淋巴组织中生发中心和淋巴上皮等特征性结构的形成和发育,从而为黏膜免疫功能的增强提供了组织结构基础。 张英楠 徐晶 杨树宝 杨树宝关键词:刺五加多糖 盲肠扁桃体 发育 雏鸡免疫器官内B淋巴细胞变化规律的研究 为了研究雏鸡在正常发育过程中免疫器官内B淋巴细胞的变化规律,以不同日龄的SPF鸡为研究对象,用流式细胞术检测鸡脾脏、胸腺及法氏囊内IgA+、IgG+及IgM+B淋巴细胞含量的变化情况。结果显示:在脾脏中,4日龄时B淋巴细... 马跃 杨树宝 胡庆花 齐花蕊 单春兰 栾维民关键词:免疫器官 B淋巴细胞 流式细胞术 刺五加多糖对鸡淋巴细胞体外增殖及细胞因子mRNA表达水平的影响 被引量:4 2022年 研究刺五加多糖(ASPS)对鸡淋巴细胞体外增殖及细胞因子mRNA表达水平的影响。将不同浓度的ASPS添加到体外分离培养的血液淋巴细胞中,采用噻唑蓝(MTT)法检测淋巴细胞增殖变化,以实时荧光定量PCR方法检测淋巴细胞细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-αmRNA表达水平。结果显示,ASPS可以单独或协同植物血凝素(PHA)或脂多糖(LPS)促进淋巴细胞体外增殖,并且ASPS在质量浓度为200μg/mL时效果最佳。另外,ASPS能够促进淋巴细胞细胞因子mRNA的表达,当200μg/mL的ASPS与淋巴细胞体外共培养至24 h时,IFN-γ、IL-2、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-α的mRNA表达量均最高,而IL-4和IL-10 mRNA的相对表达量则以ASPS质量浓度为400μg/mL和培养时间48 h条件下最高,说明IL-4和IL-10 mRNA的表达滞后,而且呈剂量依赖性。结果表明,ASPS能够提高鸡淋巴细胞的体外增殖功能,促进Th1和Th2细胞因子分泌,这为进一步揭示刺五加多糖的免疫调节机制奠定了基础。 张英楠 徐晶 刘洪章 张桂山 杨树宝关键词:刺五加多糖 淋巴细胞增殖 细胞因子 MRNA