甘肃省科技重大专项计划(ZGS063-A43-013)
- 作品数：6 被引量：43H指数：3
- 相关作者：才学鹏窦永喜潘晓梅骆学农景志忠更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所新疆农业大学更多>>
- 发文基金：甘肃省科技重大专项计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪干扰素-γ基因的表达、纯化及活性分析被引量：2
- 2009年
- 依照猪IFN-γ基因序列设计引物,将该基因克隆至原核表达载体pET-30a,构建pET-30a-pIFN-γ重组表达载体,转化入寄主菌BL21(DE3),经PCR、双酶切、测序鉴定正确后,用IPTG进行诱导表达,可溶性的表达产物分别经镍柱和Sephadex-G100纯化;包涵体经DOC洗涤、SKL变性溶解、透析复性进行纯化,然后进行SDS-PAGE、Western-blot分析,并用细胞病变抑制法进行重组猪IFN-γ活性测定.结果表明:试验得到了高纯度的重组pIFN-γ,且纯化的重组猪IFN-γ蛋白具有较高的干扰病毒复制的活性,对PRV的活性为2.0×103U.mg-1,而对标准O型口蹄疫病毒的活性为2.56×105U.mg-1.
- 潘晓梅窦永喜骆学农刘琼张冬峰岳城才学鹏
- 关键词：蛋白纯化活性分析
- 重组猪干扰素-γ的体外抗弓形虫作用被引量：2
- 2008年
- 在体外以不同剂量的重组猪IFN-γ刺激PK15细胞和猪腹腔巨噬细胞,观察了其对弓形虫入侵细胞和在细胞内增殖的影响。结果表明,随着重组猪IFN-γ剂量的增大,巨噬细胞的抗弓形虫作用逐渐增强,而不同浓度的重组猪IFN-γ对弓形虫入侵PK15细胞均无明显影响。推测重组猪IFN-γ可激活巨噬细胞抑制弓形虫的入侵和增殖,并与剂量有关;同时说明IFN-γ在非吞噬细胞内与在巨噬细胞内的作用不同。
- 潘晓梅窦永喜岳城才学鹏
- 关键词：刚地弓形虫PK15细胞腹腔巨噬细胞
- 猪干扰素-γ的研究进展被引量：10
- 2008年
- 干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)是在特定的诱生剂作用下,由机体自身产生的一种维持机体自我稳定的防御性物质,是一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子,主要由活化的T细胞和NK细胞产生。由于其免疫调节、抗病毒和抗肿瘤的独特作用,在动物传染性疾病的预防和治疗中具有广阔的应用前景。对猪干扰素-γ产生、分子结构、检测、生物学活性及作用机制以及应用等方面做以下简要综述。
- 潘晓梅窦永喜才学鹏
- 关键词：分子结构生物学活性
- 猪IFN-γ基因的融合表达及其表达产物的生物学特性被引量：1
- 2008年
- 依照猪IFN-γ(pIFN-γ)成熟蛋白基因序列设计引物,将已扩增的pIFN-γ基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建了GST-pIFN-γ融合表达载体,该载体转化宿主菌BL21后用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行了筛选和优化,筛选出最佳诱导表达条件后大量诱导表达,可溶性的表达产物经GST琼脂糖凝胶亲和纯化;包涵体经DOC洗涤、SKL变性溶解、透析复性进行纯化。经SDS-PAGE和Western-blot分析,证实得到了高纯度的融合蛋白,该蛋白的分子质量为42ku。选择FMDV和PRV两种不同的病毒(RNA病毒和DNA病毒)进行GST-pIFN-γ抗病毒活性测定。结果表明,GST-pIFN-γ融合蛋白可有效抑制这两种病毒引起的细胞病变,其对FMDV的抑制作用远远大于对PRV的抑制。对GST-pIFN-γ融合蛋白的稳定性及机体毒副作用的研究表明,该pIFN-γ的稳定性有较大提高,而毒副作用大大降低。
- 窦永喜翟军军李健潘晓梅景志忠才学鹏
- 关键词：IFN-Γ基因蛋白纯化生物学活性
- 猪带绦虫45W-4BX和TSOL18的高效表达及免疫效果研究被引量：14
- 2008年
- RT-PCR扩增45W-4B和TSOL18基因,PCR截去45W-4B基因的N端信号肽和C端疏水氨基酸序列形成45W-4BX。将45W-4BX和TSOL18 PCR产物分别亚克隆入pGEX-4T-1,用IPTG诱导表达,取产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。纯化表达产物制成油佐剂疫苗分别免疫家猪,用25 000枚猪带绦虫成熟虫卵进行攻击感染,ELISA检测各组的抗体水平,90 d后剖检计算各组的减虫率。结果表明,45W-4BX和TSOL18基因在大肠杆菌中分别以可溶性和包涵体形式获得高效表达,并能被囊虫病人血清所识别。重组蛋白免疫猪15 d血清抗体即为阳性,30 d左右达到峰值。2种重组抗原的减虫率均在88%以上,与囊虫粗抗原免疫效果相当。这为进一步研制基于45W-4BX和TSOL18的猪囊虫重组基因工程疫苗奠定了基础。
- 骆学农郑亚东胡志敏丁军涛张少华侯俊玲窦永喜郭爱疆景志忠才学鹏
- 关键词：TAENIATSOL18VACCINEEFFICACY
- 羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建、表达及其免疫原性被引量：14
- 2008年
- 通过PCR方法扩增全长P32基因和截去跨膜区的P32基因(MP32),将其分别克隆到真核表达载体pcDNA3·1(+)和已插入CpG序列的pcDNA3·1-CpG中,构建pcDNA3·1-P32、pcDNA3·1-CpG-P32和pcDNA3·1-CpG-MP32质粒;用脂质体法转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光(IFA)试验验证其表达效果;经肌肉免疫注射健康BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测抗体;在免疫后的第3、5周取免疫小鼠的脾细胞,用流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞亚群。结果所构建的真核表达载体在BHK-21细胞中都能表达P32蛋白;免疫小鼠血清在免疫第2周后均能检测到羊痘特异性IgG抗体;免疫组小鼠脾脏CD4+T细胞数目和CD4+/CD8+T细胞比值明显高于对照组。结果提示,所构建的真核载体可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,并能刺激小鼠产生较强的细胞免疫应答。
- 陈轶霞才学鹏景志忠丁军涛王颖蒙学莲张燕贾万忠乔军闫鸿斌房永祥陈国华骆学农
- 关键词：羊痘病毒P32基因真核表达载体免疫原性
