温州市科技局资助项目(Y20060080)
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 相关作者：郑巧敏李佩珍应俊张洁朱涛更多>>
- 相关机构：温州医学院温州医学院附属第二医院中国人民解放军更多>>
- 发文基金：温州市科技局资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大肠埃希菌耐药性水平传播实验研究被引量：10
- 2008年
- 目的研究重症监护病房(ICU)患者标本中分离的大肠埃希菌的耐药情况以及耐药性水平传播的实验研究。方法采取双纸片法(K-B)检测细菌的耐药性;产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌为供体菌,耐利福平大肠埃希菌(对其他抗生素敏感)作为受体菌进行接合实验;采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增整合子和耐药基因。结果30株大肠埃希菌中产ESBLs菌株检出率为46.7%;接合培养后,接合菌携带23kb和25kb大质粒,而无供体菌中一系列小质粒;供体菌和接合菌均携带Ⅰ型整合子。结论大肠埃希菌耐药性严重,且呈多重耐药性;产ESBLs菌株可通过质粒和整合子将耐药基因转移给敏感菌,导致耐药性传播。
- 郑巧敏张秀霞朱涛李佩珍应俊张洁
- 关键词：大肠埃希菌质粒整合子耐药性
- CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶的序列分析与原核表达被引量：3
- 2009年
- 目的对大肠埃希菌所产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)进行基因克隆和重组表达,探讨其特性。方法以产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌12号菌总基因组DNA为模板,PCR扩增CTX-M-14,将其克隆入pUCm-T Vector载体后测定该核苷酸序列;再将基因编码区克隆到原核表达载体pET-28α,构建含CTX-M-14基因的重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21中进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳鉴定表达的酶蛋白后再过Ni-NTA柱纯化。结果PCR扩增出大小为876 bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%。大肠埃希菌BL21转化pET-28α/CTX-M-14重组质粒后,ESBLs试验为阳性。此基因能在大肠埃希菌中大量表达,SDS-PAGE电泳显示蛋白分子质量大约为30 KD。结论成功表达重组的CTX-M-14型酶,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础。
- 李佩珍张洪勤潘若望应俊郑巧敏曹晓恩曾兴业
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶CTX-M-14克隆
