江苏省自然科学基金(BK2005095)
- 作品数：6 被引量：63H指数：3
- 相关作者：王鸣华施海燕李波卢希勤曾得意更多>>
- 相关机构：南京农业大学贵州大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学化学工程生物学医药卫生更多>>
- 甲氰菊酯人工抗原的合成和鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的合成与鉴定甲氰菊酯的人工抗原。方法通过水解、酰化、酯化等反应合成了甲氰菊酯的半抗原2,2,3,3-四甲基环丙烷羧酸-α-(N-丁酸基)-甲酰氨-3-苯氧基苄酯(Ⅳ)和2,2,3,3-四甲基环丙烷羧酸-α-羧基-3-苯氧基苄酯(Ⅲ)。通过碳二亚胺法将半抗原Ⅳ与牛血清蛋白(BSA)偶联制备免疫抗原,通过混合酸酐法将半抗原Ⅲ与卵清蛋白(OVA)偶联制备包被抗原。结果用质谱和核磁共振对Ⅲ和Ⅳ进行结构表征,合成产物为目标物。紫外光谱法鉴定结果表明,免疫抗原和包被抗原都发生了有效偶联,偶联比38∶1和15∶1,免疫抗原通过免疫新西兰大白兔得到的抗体效价为5.12×105。结论成功的合成了甲氰菊酯的人工抗原,为其免疫方法的建立奠定了基础。
- 卢希勤施海燕王鸣华
- 关键词：甲氰菊酯半抗原人工抗原
- 联苯菊酯酶联免疫吸附分析方法研究被引量：32
- 2008年
- 建立了定量测定联苯菊酯的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。利用联苯菊酯的代谢物联苯醇合成了联苯菊酯的半抗原LBc(2-甲基-3-苯基苄基氧基羰基丙酸)和LBy(2-甲基-3-苯基苯甲酸)。通过碳二亚胺法将LBc交联于牛血清蛋白(BSA)作为免疫抗原(LBc-BSA),通过活泼酯法将LBc和LBy分别交联于卵清蛋白(OVA)作为包被抗原(LBc-OVA和LBy-OVA),LBc-BSA为免疫原制备了联苯菊酯的兔抗血清,间接非竞争酶联免疫吸附分析方法测得其效价达5.12×104。通过同源异源分析,发现异源分析的灵敏度较高,对pH值、离子强度、甲醇含量等影响因素进行了研究,0.3mol/L钠离子强度的磷酸缓冲液(pH7.5)和30%的甲醇确定为联苯菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析方法的最佳工作条件,该方法的IC50为2.16±0.32mg/L,检出限(LDL)为0.016±0.002mg/L。对大部分拟除虫菊酯,如三氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯和拟除虫菊酯的代谢物3-苯氧基苯甲酸没有明显的交叉反应。
- 李波施海燕王鸣华
- 关键词：联苯菊酯多克隆抗体酶联免疫吸附分析
- 精喹禾灵酶联免疫吸咐分析(ELISA)研究被引量：14
- 2008年
- 【目的】制备精喹禾灵的特异性抗体并建立精喹禾灵的间接竞争ELISA测定方法。【方法】精喹禾灵在碱性条件下水解合成了半抗原精喹禾灵酸,并与载体蛋白BSA和OVA偶联,分别合成了免疫抗原和包被抗原,偶联比分别为29.23和7.87。将Hapten-BSA免疫兔子获得多克隆抗体。【结果】抗血清的效价为200000。经酶联免疫吸附反应分析(ELISA)测定,精喹禾灵的抑制中浓度(IC50)为0.03495μg·ml-1,最低检测浓度(IC10)为0.002μg·ml-1,检测范围为0.002～0.5μg·ml-1。其与结构相似的物质几乎没有交叉反应,表明该方法具有很强的特异性,且在水样中的添加回收率为89.02%～108.88%。【结论】成功获得精喹禾灵特异性抗体并建立了水样中精喹禾灵农药残留的ELISA测定方法。
- 曾得意王鸣华施海燕李波
- 关键词：精喹禾灵半抗原多克隆抗体
- 功夫菊酯半抗原的合成及结构表征
- 2008年
- 目的为了建立功夫菊酯残留的酶联免疫分析方法,设计并合成了功夫菊酯的半抗原。方法利用功夫菊酸和α-氰基-(3-苯氧基)苄醇通过酰化、水解、酯化多步反应合成了功夫菊酯的半抗原:2,2-二甲基-3-(2-氯-3,3,3-三氟-1-丙烯基)环丙烷羧酸-α-(N-丁酸基)-甲酰氨-3-苯氧基苄酯。结果通过质谱和核磁鉴定了半抗原的结构,证明所合成的产物为目标产物。结论合成的半抗原分子保留了功夫菊酯结构的主要特点,为进一步建立功夫菊酯的酶联免疫分析方法提供了研究基础。
- 卢希勤施海燕王鸣华
- 关键词：功夫菊酯半抗原农药残留
- 拟除虫菊酯类农药半抗原合成及酶联免疫分析研究进展被引量：18
- 2007年
- 酶联免疫技术是近年来发展的农药残留检测方法,具有方便快速、特异灵敏等优点。主要介绍了拟除虫菊酯类农药半抗原的合成方法以及酶联免疫分析技术的研究进展和展望。半抗原的合成入手点主要为菊酯分子的三碳环、中间和芳环部分,连接一个连接臂作为半抗原。目前制得的抗体多数是多克隆抗体,最低检测限最好的能达到0.2μg/L。酶联免疫分析技术在拟除虫菊酯类农药的残留检测中会发挥越来越大的作用。
- 卢希勤王鸣华
- 关键词：拟除虫菊酯类农药半抗原酶联免疫分析
- 氯氟氰菊酯及其代谢物的人工抗原合成与多克隆抗体的制备被引量：3
- 2007年
- 于氟氰菊酯分子的酸部分连接4-氨基丁酸间隔臂(HCA1)、醇部分连接丁二酸酐间隔臂(HCB2),分别合成了两种不同的半抗原,通过碳二亚胺法将HCA1和HCB2分别与牛血清蛋白(BSA)偶联制备了人工抗原HCA1-BSA和HCB2-BSA,通过混合酸酐法将HCA1、HCAS[3-(2-氯-3,3,3-三氟丙烯基)-2,2-二甲基环丙烷羧酸]和HCB2分别与卵清蛋白(OVA)偶联制备包被抗原,两种人工抗原通过免疫新西兰大白兔制备相应的多克隆抗体。结果表明,用HCA1-BSA获得的多克隆抗体对氯氟氰菊酯和氯氟氰菊酸有免疫反应性(IC50值分别为33.12和0.95mg/L),用HCB2-BSA获得的多克隆抗体对氯氟氰菊酯几乎没有免疫反应性。
- 李波施海燕王鸣华
- 关键词：人工抗原多克隆抗体氯氟氰菊酯酶联免疫吸附测定法
