广西壮族自治区自然科学基金(0640014)
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 相关作者：蒋和生韦英明蒋钦杨王新平谢炳坤更多>>
- 相关机构：广西大学浙江大学中国农业大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金国家高技术研究发展计划广西研究生教育创新计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 水牛生精上皮细胞的冷冻保存被引量：1
- 2009年
- 为探讨水牛睾丸生精上皮细胞冷冻保存的适宜冷冻保护剂及其浓度，在DMEM中分别添加不同浓度的冷冻保护剂二甲基亚砜（DMSO）、甘油（G）、丙二醇（PG）和乙二醇（EG），以及10％的胎牛血清（FBS），对3～5月龄水牛生精上皮细胞进行冷冻保存，解冻后台盼蓝染色测定细胞活率。结果显示，当以0％，5％，10％，15％，20％DMSO添加时，10％DMSO组的细胞解冻后活率均显著高于其他各组（P〈0．05）；当以0％，20％，25％，30％，35％，40％G添加时，35％G组的细胞解冻后活率均显著高于其他各组（P〈0．05）；当以0％，5％，10％，15％，20％，25％PG添加时，15％～25％PG各组的细胞解冻后活率均显著高于其他各组（P〈0．05），但以20％PG组为最高；当以0％，5％，10％，15％，20％EG添加时，5％～20％EG各组的细胞解冻后活率均显著高于0％EG组，但以10％EG组为最高；而对4种冷冻保护剂各最优浓度组的细胞解冻后活率比较，10％DMSO、35％G组的细胞活率均显著高于20％PG、10％EG组（P〈0．05）。结果表明，以添加10％DMSO或35％G于含10％FBS的DMEM冷冻液中．采用两步慢速冷冻，液氮保存，37℃水浴1min解冻，是一种具有较高复苏率的冷冻保存水牛生精上皮细胞的方法。
- 谢炳坤覃兆鲜韦英明蒋和生
- 关键词：冷冻保存水牛
- 德保矮马生长激素基因的克隆与序列分析被引量：9
- 2009年
- 克隆和分析德保矮马的生长激素(GH)基因全序列.阳性重组质粒测序表明:德保矮马GH基因碱基序列全长1922bp(GenBank登录号为EU939447),包含完整的5个外显子和4个内含子.与纯血马比较,有19个碱基位点突变,其中11个位于外显子区域,有义突变4个,第924位碱基C→T致使第70位氨基酸由Thr→Ile,第1249位碱基C→T使第112位氨基酸Pro→Leu,第1287位碱基A→T使第125位氨基酸Ser→Cys,第1309位碱基A→C使第132位氨基酸Asp→Ala.以GH编码区构建物种的亲缘进化树,GH基因在进化中比较保守.
- 蒋钦杨韦英明黄艳娜言旭光陆广涛王新平蒋和生
- 关键词：GH基因克隆
- 水牛Follistatin cDNA克隆及序列分析被引量：3
- 2008年
- 卵泡抑素(Follistatin,FS)可通过旁分泌和自分泌的方式抑制促卵泡素(FSH)的分泌,从而影响动物的繁殖机能。本研究拟通过分析水牛的FS cDNA序列来分析其繁殖性能低的可能原因。试验参照GenBank公布的奶牛的FS cDNA序列设计引物,通过RT-PCR技术扩增目的基因,再将其亚克隆到pMD-18T克隆载体进行测序。测序结果显示本试验成功获得了水牛的FS cDNA序列。同源性及进化树分析提示FS在哺乳动物进化上高度保守。研究发现两处氨基酸的突变,这可能影响FS正常的生物学功能发挥,从而影响水牛的繁殖机能。
- 邓继贤莫毅杨秀荣蒋和生郭亚芬杨学明蒋钦杨谢炳坤李恭贺覃广胜韦英明
- 关键词：水牛繁殖性能卵泡抑素CDNA克隆
- 水牛催乳素受体基因克隆及序列分析被引量：4
- 2008年
- 扩增出广西本地沼泽型水牛(Bubalus bubalis)催乳素受体(PRLR)基因部分保守序列,用于下一步实验检测体外培养的水牛乳腺上皮细胞中催乳素受体基因的表达水平。根据已报道的奶牛催乳素受体基因cDNA序列的保守区,设计一对特异性引物。提取广西本地水牛的乳腺组织总RNA,并以其为模板,以下游特异性引物为反转录引物,在反转录酶(AMV)作用下合成cDNA;用Ex-Taq酶进行PCR扩增,得到催乳素受体基因的保守序列,长度为571 bp。该扩增产物经纯化后,连接到pMD18-T载体上扩增。经序列分析结果表明:序列较保守,与GenBank上发表的奶牛催乳素受体基因的同源性达到98.9%,与绵羊的同源性达到96.5%,与猪、小鼠、人的同源性分别为86.5%、78.9%、77.1%。催乳素受体基因与奶牛相比,共有6个碱基发生了突变,其中1个为同义突变,其他5个均为错义突变,形成4个氨基酸发生变异。
- 朱佳杰何荆洲王新平蒋钦杨冯雪萍郭亚芬兰干球韦英明蒋和生
- 关键词：水牛催乳素催乳素受体
- 沼泽型水牛卵泡抑素基因的真核表达研究被引量：2
- 2011年
- 试验通过候选基因法,选定卵泡抑素(follistatin,FS)作为影响水牛繁殖性能的主要候选基因,通过基因工程的方法,用XhoⅠ、SacⅡ双酶切广西大学动物遗传育种与繁殖实验室克隆的添加有ACC的Kozaka序列的pMD-bFS质粒和pEG-FP-N1,构建pEGFP-bFS真核表达质粒,将其与阳离子脂质体混匀后,分别转染体外培养的水牛胎儿成纤维(BFF)细胞和仓鼠肾(BHK)细胞系,经过48h培养后,在相差荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达水平,用RT-PCR和Western blotting方法对转入质粒表达进行定性鉴定。结果显示,本研究成功构建了添加有ACC的Kozaka序列的pEGFP-bFS真核表达质粒,该重组质粒在BFF和HBK两种细胞均表达,但在HBK细胞系的表达量稍高。本研究结果将为下一步制备具有生物活性的bFS工程疫苗,研究bFS对水牛繁殖性能的影响提供参考。
- 邓继贤杨秀荣韦英明蒋和生
- 关键词：沼泽型水牛卵泡抑素真核表达繁殖性能
- 水牛精原细胞的体外培养及分化被引量：1
- 2009年
- 以探讨水牛精原细胞体外培养的发育潜能为目的,对3～5月龄水牛睾丸组织进行精原细胞与支持细胞的体外共培养。两步酶法消化睾丸组织来制备水牛生殖细胞悬液,接种于含10%FBS的DMEM培养液中,在37℃、5%CO2、饱和湿度下培养30d,观察细胞的生长和形态变化,并对培养4周的细胞进行RT-PCR分析,以检测PRM-2和TP-1基因的表达情况。结果显示,水牛精原细胞体外培养24h后,精原细胞(10.0～12.5μm)呈圆形并紧贴支持细胞上;培养7～8d后,精原细胞出现聚集状态;培养10d后,有细胞克隆形成;培养30d后,出现似长形精子细胞(8.0～10.0μm)。对培养4周后的细胞进行RT-PCR分析,精子细胞特异表达基因PRM-2被检测出来。结果表明,采用本试验体外培养条件对水牛精原细胞进行培养,能够满足精原细胞体外长期培养的需要,并可以发生增殖与分化而形成似精子细胞。
- 谢炳坤覃兆鲜王新平谢体三蒋和生
- 关键词：精原细胞体外培养水牛
