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国家自然科学基金(30871431)

作品数:8 被引量:13H指数:2
相关作者:刘忠华郇延军李明王晴双宝更多>>
相关机构:东北农业大学哈尔滨医科大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金黑龙江省杰出青年科学基金更多>>
相关领域:农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 8篇期刊文章
  • 3篇会议论文

领域

  • 8篇农业科学
  • 3篇生物学

主题

  • 5篇胚胎
  • 3篇基因
  • 2篇原核表达
  • 2篇瘦素
  • 2篇体外
  • 2篇体外发育
  • 2篇核移植
  • 2篇核移植胚胎
  • 2篇5-AZA
  • 2篇5-AZA-...
  • 1篇蛋白质纯化
  • 1篇音猬因子
  • 1篇印记基因
  • 1篇原核
  • 1篇运动神经
  • 1篇运动神经元
  • 1篇植入
  • 1篇植入前
  • 1篇植入前胚胎
  • 1篇神经元

机构

  • 11篇东北农业大学
  • 1篇哈尔滨医科大...

作者

  • 11篇刘忠华
  • 6篇郇延军
  • 4篇朱江
  • 3篇双宝
  • 3篇王晴
  • 3篇孔庆然
  • 3篇李明
  • 2篇刘仲凤
  • 2篇吕明
  • 2篇向文胜
  • 2篇高继国
  • 2篇孙爽
  • 2篇王健宇
  • 2篇王媛
  • 2篇李慧
  • 2篇解炳腾
  • 2篇王峰
  • 1篇尹智
  • 1篇吴嫣爽
  • 1篇薛媛

传媒

  • 2篇安徽农业科学
  • 2篇东北农业大学...
  • 1篇遗传
  • 1篇畜牧与兽医
  • 1篇中国畜牧兽医
  • 1篇Agricu...
  • 1篇中国畜牧兽医...
  • 1篇中国畜牧兽医...

年份

  • 3篇2012
  • 3篇2011
  • 4篇2010
  • 1篇2009
8 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
人IL-1Ra基因的克隆及原核表达的研究
2011年
IL-1Ra是第一个被发现的天然存在的细胞因子拮抗剂,结合于IL-1受体后不引起IL-1效应。文章通过RT-PCR从人的胎盘组织中克隆了人IL-1Ra基因,使其在大肠杆菌DH5α中重组表达。结果表明,克隆到了460bp左右的目的基因,并在大肠杆菌中成功表达了18ku左右的目的蛋白,目的蛋白在大肠杆菌中表达量占总蛋白20%左右,为IL-1Ra的进一步研究及应用奠定了基础。
双宝李明李慧矫洪涛王晴刘忠华向文胜
关键词:基因重组原核表达
小鼠孤雌胚胎干细胞的建立及其向运动神经元分化的初探被引量:4
2011年
文章采用小鼠的孤雌囊胚建立胚胎干细胞系,探究其向运动神经元分化的可能,为临床治疗以及研究基因组印记与神经分化的的关系提供理论基础。结果表明:卵母细胞孤雌激活率达到93.26%,成功建立了8个孤雌胚胎干细胞系,建系率达到23.53%。克隆表达多潜能标记Oct4及细胞表面标记SSEA-1,有高水平的碱性磷酸酶活性,在细胞第10代和第30代时核型分析检测显示为正常的40条染色体。体内、外均分化出三胚层来源的细胞。联合应用全反式维甲酸(RA)、音猬因子(Shh)及细胞外基质,小鼠孤雌胚胎干细胞可被诱导表达运动神经元的标志性标记HB9、Olig2。
王振东薛媛单智焱郑重李雪吴嫣爽孙瑞珍石健李明杰刘忠华雷蕾
关键词:孤雌胚胎干细胞印记基因运动神经元分化维甲酸音猬因子
Improvement of in vitro Cytoplasmic Maturation of Denuded Porcine Oocytes by Coculture with Follicular Mural Granulosa Cells
2012年
[Objective] This study aimed to improve the in vitro maturation quality of denuded porcine oocytes and provide scientific basis for establishing a stable and efficient denuded oocyte culture system. [Method] The first polar body extrusion rate, oocyte glutathione (GSH) content, positive rate of brilliant cresyl blue (BCB) staining and development potential of activated oocytes or fertilized oocytes were employed as main indicators to investigate the effects of follicular mural granulosa cell (MGC) coculture on cytoplasmic maturation of cumulus cell-removal oocytes (Denuded Oocyte, DO). [Result] According to in vitro maturation results, compared with DO group, the first polar body extrusion rate of porcine oocytes in DO+MGC group was not significantly different, but the nuclear maturation process was improved and was more similar to that in COC (cumulus-oocyte complex) group. Detection of GSH content in mature oocytes showed that there was no significant difference between DO+ MGC group (optical density of 1 053.67) and COC group (optical density of 1 426.00) or between DO+MGC group and COC+GC group (optical density of 1 541.00), however, GSH content in mature oocytes of DO group (optical density of 724.67) was significantly lower than that of COC group and COC+GC group (P0.05). Detection of glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) activity showed that there was no significant difference in BCB positive oocyte rate between DO +MGC group (88.26% ) and COC group (92.75%) or between DO+MGC group and DO group (82.86% ), however, BCB positive oocyte rate of DO group was significantly lower than that of COC group (P0.05). Furthermore, the cleavage rate and blastocyst rate of activated mature oocytes derived from DO +MGC group (94.98% and 43.67% , respectively) were significantly higher than those from DO group (52.54% and 8.97%, respectively) (P0.05), and were not significantly different compared with those from COC group (97.11%
郇延军解炳腾朱江孔庆然刘忠华
关键词:PORCINE
5-AZA-2'-Deoxyctidine对猪核移植胚胎体外发育的影响
与体内胚胎相比,核移植来源的体外胚胎往往具有较高的DNA甲基化水平,减少供体细胞或克隆胚胎中DNA甲基化水平,或许能够提高克隆效率。5-aza-2’-deoxyctidine(5-aza-dC)是一种DNA甲基转移酶的抑...
郇延军朱江王健宇刘忠华
关键词:5-AZA-DC核移植胚胎
文献传递
猪植入前胚胎体外培养条件的优化被引量:3
2009年
探讨了更换胚胎培养液及添加FBS、高渗透压和不同浓度VE对猪卵母细胞体外受精(IVF)和孤雌激活(PA)胚胎体外发育的影响,进一步优化了猪植入前胚胎体外培养体系。试验一:在第2天、第4天更换新的培养液(换液组),在换液基础上第4天更换为添加10%FBS的培养液(FBS组)。试验二:胚胎分别在0.05 mol/L蔗糖(蔗糖组)和138 mmol/L氯化钠(氯化钠组)的PZM-3(300~320 mOsmol)中培养2 d后移至PZM-3(288 mOsmol)中培养5 d。试验三:在培养液中分别添加50、100和200μmol/L VE。对照组均在PZM-3(288 mOsmol)中培养7 d。结果表明:试验一,IVF和PA胚胎FBS组囊胚率显著高于对照组和换液组(P<0.05);试验二,IVF胚胎氯化钠组卵裂率、囊胚率均显著高于对照组与蔗糖组(P<0.05);试验三,IVF胚胎添加100μmol/L VE组囊胚率显著高于对照组(P<0.05)。结果提示,在换液的基础上添加FBS有利于猪IVF和PA胚胎的体外发育;氯化钠调节的高渗透压可以促进猪IVF胚胎的早期发育;添加100μmol/L VE可以改善猪IVF胚胎的体外发育体系。
王媛孙爽刘仲凤吕明王峰郇延军周佳勃刘忠华
关键词:FBS渗透压体外受精孤雌激活
胞质成熟对猪克隆胚胎体外发育潜能的影响
引言首例体细胞克隆猪已出生十多年,但体细胞克隆猪效率一直很低,主要原因是卵母细胞胞质未能完全重编程供体细胞核,因此卵母细胞成熟质量是影响到克隆胚胎能否发育到期的关键因素。为了探讨在胞质成熟过程中,何种物质决定了胞质成熟,...
郇延军李竞宇孔庆然尹智刘忠华
文献传递
不同激活条件及半胱氨酸处理对猪ICSI胚胎发育影响研究被引量:2
2010年
本试验探讨了不同辅助激活方法(Calciumionophore A23187激活、Calciumionophore A23187+6-DMAP联合激活和电激活)、不同精子预处理方法(液氮冻融处理和0.1%Triton X-100处理)和在添加半胱氨酸的胚胎培养液中培养不同时间(0 h、4 h、12 h和168 h)对猪卵母细胞内单精子注射(ICSI)胚胎体外发育的影响。结果显示:与无辅助激活相比,A23187+6-DMAP联合激活和电激活均能显著提高ICSI卵母细胞的激活率、卵裂率和囊胚率(P<0.05),A23187+6-DMAP联合激活能显著提高ICSI卵母细胞的受精率(P<0.05)。液氮冻融精子组ICSI卵母细胞的雄原核形成率显著高于活精子组(P<0.05)。在添加半胱氨酸的胚胎培养液中培养4 h的ICSI卵母细胞受精率、雄原核形成率和囊胚率显著高于0 h组(P<0.05)。以上结果表明,猪卵母细胞在ICSI后需要辅助激活来启动胚胎顺利发育,A23187+6-DMAP激活效果较好。液氮冻融精子可以促进ICSI后雄原核的形成。半胱氨酸处理4 h对猪ICSI卵母细胞受精和发育均有促进作用。
孙爽王媛刘仲凤吕明王峰刘忠华
关键词:ICSI
5-AZA-2'-Deoxyctidine对猪核移植胚胎体外发育的影响
与体内胚胎相比,核移植来源的体外胚胎往往具有较高的DNA甲基化水平,减少供体细胞或克隆胚胎中DNA甲基化水平,或许能够提高克隆效率。5-aza-2’-deoxyctidine(5-aza-dC)是一种DNA甲基转移酶的抑...
郇延军朱江王健宇刘忠华
关键词:5-AZA-DC核移植胚胎
文献传递
重组人瘦素大肠杆菌的高密度发酵与瘦素的纯化被引量:1
2011年
[目的]探索获得大量高纯度重组人瘦素的方法。[方法]通过5 L发酵罐对重组人瘦素大肠杆菌pET32a-OB[BL21(DE3)]进行了高密度发酵,并通过DEAE sepharose Fast Flow阴离子层析分离将IPTG诱导表达的人瘦素进行纯化,并通过ESI-Q-TOF-MS/MS分析验证目的蛋白。[结果]得到的培养物为3 L左右,OD600为20.25,纯化后的人瘦素纯度为98%左右。[结论]发酵罐发酵得到的菌体密度要远大于正常用三角瓶培养的菌体密度,阴离子交换层析法制备重组人瘦素符合大量生产高纯度重组人瘦素的要求。
双宝李明李慧张宁王晴高继国刘忠华
关键词:瘦素高密度发酵蛋白质纯化
人痩素基因的克隆及原核表达被引量:2
2010年
通过RT-PCR从人的脂肪组织中克隆了人OB基因,并将其在原核生物E.coli BL21(DE3)中重组表达,采用SDS-PAGE法检测表达情况,鉴定表达产物。结果表明,人瘦素在大肠杆菌中表达量占总蛋白的20%左右,为瘦素的进一步研究奠定了基础。
双宝李明李成王晴高继国向文胜刘忠华
关键词:瘦素基因克隆原核表达
共2页<12>
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