国家精品课程建设项目(2009-21)
- 作品数：7 被引量：15H指数：2
- 相关作者：吴秀山袁婺洲赵阳李发祥彭佩莹更多>>
- 相关机构：湖南师范大学温州医科大学更多>>
- 发文基金：国家精品课程建设项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学文化科学更多>>
- 斑马鱼Fbxl5基因多克隆抗体的制备与检测被引量：1
- 2013年
- Fbxl5为F-box基因家族的一员,目前研究发现其与心脏的发育有关。为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能,有必要制备其多克隆抗体。通过桥式PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼Fbxl5基因片段,将其克隆入表达载体pET-28a,转化至大肠杆菌Rosseta中。用IPTG诱导Fbxl5重组质粒得到His-Fbxl5的融合蛋白。这个融合蛋白用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的His-Fbxl5融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。使用Western Blot检测,获得了Fbxl5原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Fbxl5多克隆抗体。随后检测了Fbxl5在斑马鱼胚胎和成体组织中蛋白的表达,通过基因芯片分析在Fbxl5-MO和Std胚胎样品的mRNA含量差异.所得结果显示获得了较高效价和特异性好的斑马鱼Fbxl5多克隆抗体,为Fbxl5功能的进一步研究奠定了基础。
- 盛力翔冯德峰罗世锋吴秀山戴国莫小阳
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体基因芯片
- 斑马鱼心脏标记基因VMHC多抗血清的制备被引量：2
- 2011年
- 斑马鱼基因VMHC(Ventricular myosin heavy chain)是心脏发育早期的标志基因,制备该基因多抗血清,首先通过生物信息学方法,选择VMHC基因中特异性强、具亲水性的一段核苷酸序列(3 772～4 221 bp),通过PCR扩增,将片段重组到原核表达载体pGEX-4T-1,通过原核诱导表达获得含有表达目的片段的融合蛋白,以该融合蛋白免疫小鼠,获得VMHC多克隆抗鼠血清.对该多抗血清抗体进行验证,结果具有很好特异性和较高效价,可以用作western-blot、免疫印迹等试验分析.
- 王琨满贤刘华友李志李发祥赵阳廖四芳吴秀山袁婺洲
- 关键词：标记基因融合蛋白
- Lrrc10蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：3
- 2011年
- Lrrc10是一个心脏特异表达基因.为了深入研究Lrrc10在心脏发育中的功能,需要获得Lrrc10蛋白并制备其抗体.以小鼠心脏cDNA文库为模板进行PCR扩增得到Lrrc10部分编码区序列,然后将其连接到pGEX-4T-1载体上获得原核表达载体.重组子经酶切及测序鉴定后,转化大肠杆菌(E.coli)BL21,并用IPTG诱导融合蛋白表达,GST亲和层析法亲和纯化,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体.获得了Lrrc10原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Lrrc10多克隆抗体,为Lrrc10功能的进一步研究奠定了基础.
- 闵璐周云雷周煌吴秀山袁婺洲
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体
- 果蝇Bves蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备
- 2013年
- 目的为了进一步研究细胞粘附分子Bves在肿瘤的发生及转移过程中的作用,需要获得Bves蛋白并制备其抗体。方法根据Flybase网站所提供的Bves基因序列,以果蝇的总RNA为模板进行PCR扩增,得到Bves部分编码序列,随后将其连接到pET-28a载体上获得原核表达载体。重组表达质粒经酶切测序鉴定后,转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,并用IPTG诱导融合蛋白的表达,使用活化的Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化后得到的His-Bves融合蛋白免疫注射新西兰大白兔制备Bves多克隆抗体,并用Western blot对抗体效价进行检测。结果和结论获得了Bves原核表达重组融合蛋白及高效价的兔抗Bves多克隆抗体,为后期深入研究Bves基因的功能奠定了基础。
- 彭佩莹赵阳王静周英郝建军曾群陈思行任恋戴悦袁婺洲吴秀山邓云戴国
- 关键词：果蝇融合蛋白多克隆抗体
- 医学生临床技能培训模式改革的探索与实践——以白内障手术虚拟与现实融合带教模式为例被引量：6
- 2014年
- 医学生临床技能教学模式的探索改革是目前医学教育改革的重要内容之一,近年虚拟教学的推广,也为临床技能教学增添了新的方式。那么,如何与现实教学方式融合更好地提高医学生实践能力具有积极的意义。有效的医学生临床技能培训模式的构建必须遵循高效性;以学生为主体,注重临床思维能力培养;并充分保障实践对象安全等原则。
- 徐栩诸葛晶陈蔚马慧香涂昌森吕帆
- 关键词：医学生
- 斑马鱼心脏标记基因pitx2的多克隆抗体的制备被引量：2
- 2010年
- pitx2基因是一类bicoid相关的同源异型框因子成员,介导心脏左右不对称发育和内脏器官的偏侧化.pitx2基因位于Nodal信号途径的下游,直接由Nodal信号分子控制.用PCR技术扩增斑马鱼pitx2基因的部分编码区,并将其插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,经过酶切和测序鉴定后,将重组质粒(pGEX-4T-1-pitx2)转入BL21感受态细胞,通过IPTG诱导表达融合蛋白,用GST珠亲和纯化,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体.获得了pitx2原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗pitx2多克隆抗体.提取斑马鱼不同器官和组织蛋白,用自制的多克隆抗体检测pitx2基因在斑马鱼中的表达情况,发现pitx2基因特异性地在心脏、脑、肌肉、小肠和肝脏表达,尤其在心脏中有很高的表达,表明制备的抗体特异性非常好.
- 王华张云吴秀山袁婺洲
- 关键词：PITX2融合蛋白多克隆抗体
- 果蝇odd蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备研究被引量：1
- 2011年
- odd是一个新发现的心脏特异表达基因。为了进一步研究odd在心脏发育中的功能,根据已报道的odd基因序列,以果蝇cDNA文库为模板进行PCR扩增,将所得的odd部分编码区序列连接到pET-28a载体上构建原核表达载体;重组子经酶切测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导融合蛋白表达,Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,纯化后的His-odd融合蛋白免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体,Western Blot检测抗体活性。结果表明,获得了odd原核表达重组融合蛋白以及高效价的、特异性兔抗Odd多克隆抗体,为后续的odd功能研究奠定了基础。
- 张义叶湘漓鲁建鑫彭佩莹赵阳江志钢李发祥王跃群袁婺洲吴秀山邓云
- 关键词：ODD融合蛋白原核表达多克隆抗体
