广东省医学科学技术研究基金(A2008417)
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
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- 以AdMax载体系统构建和制备肾癌相关抗原G250基因重组腺病毒表达载体被引量：7
- 2008年
- 目的构建肾癌相关抗原G250重组腺病毒载体,以期用于基因转染树突状细胞(DC)治疗肾癌的实验研究。方法利用AdMax包装系统,首先构建穿梭质粒pDC316-G250,然后将所得的穿梭质粒和辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre以CaCL2法质粒共转染293细胞得到重组腺病毒Ad/G250,CsCl梯度离心纯化病毒,TCID50法测定病毒滴度。Ad/G250转染DC细胞,RT-PCR及流式细胞仪检测G250的表达。结果采用双质粒共转染293细胞,Cre/loxP位点同源重组方法构建了E1和E3缺失的含外源基因的Ad/G250载体。经过PCR、RT-PCR和流式细胞仪证实腺病毒载体构建成功。病毒经过CsCl梯度离心纯化后,Ad/G250滴度达到5.6×109 U/ml。RT-PCR及流式细胞仪显示Ad/G250在DC中特异性表达。结论成功构建了G250重组腺病毒载体。
- 齐桓
- 关键词：腺病毒载体肿瘤相关抗原树突状细胞
- 腺病毒载体介导肾癌相关抗原G250基因转染DC诱导CTL治疗肾癌的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨以腺病毒载体介导肾癌相关抗原G250(Ad-G250)基因转染制备树突状细胞(DC)瘤苗,体外诱导自体T淋巴细胞特异性抗肾癌免疫效应。方法自健康人外周血中提取单核细胞,将贴壁细胞分为3组(Ad-G250基因转染组、G250蛋白致敏组、未致敏组),用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rGM-CSF)和白细胞介素-4(rhIL-4)诱导活化;在3组DC细胞中分别加入自体T淋巴细胞,获得3组不同的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。RT-PCR检测G250在DC细胞内的转录情况;流式细胞仪检测DC表面标志分子和G250抗原蛋白的表达情况;四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测3组CTL对不同靶细胞(肾癌细胞株786-0、肺癌细胞株A549)的杀伤活性。结果Ad-G250高效转染DC,G250蛋白在DC内成功表达:采用RT-PCR成功在基因转染组DC中扩增出G250产物;Ad-G250转染的DC表面标志CD40、CD80、CD83、CD86、HLA-DR与其他两组相比差异有显著性(P<0.05),Ad-G250组明显高表达,表明Ad-G250基因转染组可上调DC表面标志表达;Ad-G250组诱导的CTL对G250阳性的786-0靶细胞有很好的细胞毒杀伤效应,此杀伤活性优于G250蛋白致敏组及对照组(P<0.05)。结论以腺病毒为载体介导抗原基因转染DC,并诱导特异的CTL,从技术上是可行的,而且所诱导的CTL杀伤活性好于采用G250蛋白冲击致敏DC所诱导的CTL,有望成为一种肿瘤免疫治疗的理想方法。此研究方法也说明了以G250为靶点的免疫治疗可能是肾透明细胞癌一种理想治疗模式。
- 齐桓郑少斌
- 关键词：腺病毒细胞毒性T淋巴细胞
