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SELDI-TOF MS技术及其在传染性疾病研究中的应用被引量：2: 2005年; SELDI-TOFMS(surface-enhancedlaserdesorptionionizationtime-of-flightmassspectrometry,表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱)技术,是随着蛋白质组学的兴起而出现的新技术,是一种基于蛋白质芯片和质谱技术的蛋白质指纹图谱分析平台。本文就SELDI-TOFMS技术的原理、特点及其在传染性疾病研究中的应用进行综述。; 刘小丽李兰娟; 关键词：疾病研究传染性 SELDI 指纹图谱分析蛋白质芯片质谱技术

肝实质细胞和非实质细胞的永生化研究进展被引量：2: 2005年; 细胞永生化是体外培养的细胞经过自发的或某种因素的作用下从增殖危机中逃逸,获得无限增殖能力的过程。肝组织细胞永生化技术不仅能为肝组织细胞生物学的研究提供性状稳定的研究对象,还为生物型人工肝、细胞移植等研究提供了一种可靠的潜在细胞源。本文就近年来肝组织细胞的永生化研究进展做了简要综述。; 潘小平李兰娟; 关键词：肝细胞非实质细胞永生化

重组人肝再生增强因子的克隆、表达及纯化: 2005年; 目的通过构建原核表达系统,在大肠埃希菌中表达重组人肝再生增强因子(hALR)蛋白,为各种急慢性肝损伤及肝衰竭的治疗提供新的治疗方法奠定基础。方法利用正常人肝组织提取总RNA,经一步法逆转录聚合酶链反应(RTPCR)获取hALRcDNA全序列,构建原核表达载体hALRpET28a(+)转化大肠埃希菌(BL21),诱导表达重组hALR蛋白,以组氨酸为标签进行蛋白纯化。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和WesternBlot鉴定重组蛋白。结果经双酶切和DNA测序证实hALRcDNA正确插入表达载体pET28a(+),成功表达并纯化得相对分子质量为23000的重组蛋白,低温诱导表达使可溶蛋白明显增加,与预期结果相符。结论成功表达和纯化获重组hALR蛋白。; 盛吉芳俞海英李君周林福李兰娟; 关键词：肝细胞生长因子重组蛋白质类重组人肝再生增强因子蛋白纯化逆转录聚合酶链反应原核表达载体

人端粒酶逆转录酶诱导的猪肝细胞初步鉴定被引量：5: 2006年; 目的观察应用四步灌流法分离后原代猪肝细胞的数量和活力,初步鉴定人端粒酶逆转录酶(hTERT)诱导的猪肝细胞的生物学特性。方法四步灌流法分离12只猪肝脏组织中的猪肝细胞,采用锥虫蓝拒染法测定其肝实质细胞数量和活力;将含hTERT真核表达的载体转染到原代猪肝细胞,经G418硫酸盐筛选,获得耐药性的猪肝细胞克隆并传代3代。观察原代猪肝细胞和hTERT诱导后的猪肝细胞的形态,检测两种猪肝细胞不同时期培养上清液中白蛋白、尿素氮的浓度。结果每只肝脏的肝细胞产量约为2.0×1010个,具有活力的肝细胞所占百分比为(95.5±3.2)%。原代猪肝细胞和hTERT诱导的猪肝细胞培养上清中分泌白蛋白和尿素氮在前3天无统计学差异(P>0.05),第4、5天差异有统计学意义(P<0.05)。结论四步灌流法分离获取的猪肝细胞产量高、功能活性好。hTERT诱导的猪肝细胞具有正常肝细胞的基本功能,可作为生物人工肝及细胞移植等的理想的细胞源。; 潘小平李兰娟曹红翠杜维波章益民盛国平陈瑜李君; 关键词：人端粒酶逆转录酶猪肝细胞生物人工肝支持系统永生化

以无纺布编织型生物反应器为基础的生物型人工肝治疗暴发性肝功能衰竭被引量：4: 2006年; 目的设计一种新型生物型人工肝,评价其治疗暴发性肝功能衰竭的疗效。方法采用无纺布编织型生物反应器接种原代猪肝细胞构建生物型人工肝,对D-氨基半乳糖胺诱导的猪暴发性肝功能衰竭模型进行治疗。结果生物型人工肝治疗可显著降低受试动物血氨和血清L-乳酸浓度,稳定血糖水平,改善Fischer指数,并延长动物存活时间。结论以无纺布编制型生物反应器为基础构建的生物型人工肝对暴发性肝功能衰竭具有明显的肝支持作用,具有临床应用可行性。; 杜维波李兰娟章益民李君陈佳佳潘小平曹红翠陈瑜陈月美俞海英盛国平; 关键词：生物反应器半乳糖胺

人肝再生增强子原核表达系统的构建与筛选: 2007年; 目的构建多个人肝再生增强子(hALR)的原核表达系统进行原核表达、鉴定及筛选,得出理想的系统用于进一步的研究。方法构建4个重组表达质粒pET28a(+)/hALR、pET23a/hALR、pGEX-5x-1/hALR、pGEX-5x-2/hALR,分别转化3种宿主菌,诱导表达重组hALR蛋白,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westem blotting鉴定重组蛋白。结果双酶切和DNA测序证实hALR cDNA正确插入4种表达载体并成功转化宿主菌,仅pET28a(+)/hALR的BL21(DE3)菌株成功表达相对分子质量为23kDa的重组蛋白。结论筛选得出人肝再生增强子的原核表达系统,成功表达并鉴定重组hALR蛋白。; 俞海英刘骏李君盛吉芳; 关键词：原核表达系统

肝细胞微囊化技术及其在生物型人工肝中的应用进展被引量：1: 2005年; 生物型人工肝的推广应用受限于缺乏足够数量的具有高度活性和良好功能的肝细胞。肝细胞微囊化为肝细胞大规模、高活性体外培养及长期冻存提供了一种可靠方法。微囊具有良好的生物相容性和合适的半透性,能保证肝细胞在微囊内长期存活,并维持正常的生理功能。本文就肝细胞微囊化技术及其在生物型人工肝的应用进展进行综述。; 杜维波李兰娟; 关键词：肝衰竭生物型人工肝肝细胞微囊推广应用体外培养

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国家高技术研究发展计划(2003AA205150)