湖南省教育厅科研基金(07C572)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
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- 早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离纯化、原代培养及鉴定
- 2009年
- 【目的】建立一套可靠的早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）分离、纯化和培养技术，用于体外研究早产儿肺部疾病。【方法】采用胰酶和胶原酶消化胎龄20d早产鼠肺组织块，经差速离心和反复贴壁法，分离、纯化早产鼠AECⅡ，并进行原代培养。用细胞角化蛋白（cytokeratin）进行二氨基联苯胺（DAB）及荧光免疫细胞化学显色，和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定。【结果】AECⅡ体外培养24～48h，增殖代谢旺盛，进入对数生长期，生长状态最佳。cytokeratin在DAB免疫细胞化学及荧光免疫细胞化学中均有表达。透射电镜观察可见细胞内板层小体。【结论】该方法所得细胞产量大、纯度高，是一种可靠的早产鼠AECⅡ的分离纯化培养技术，对体外研究早产儿肺部疾病如高氧肺损伤等有重要意义。
- 丁小芳钟礼立张兵李嘉
- 关键词：上皮细胞
- 利多卡因对高氧暴露早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞SPA、SPB、SPC mRNA表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察利多卡因(Lido)对高氧所致的早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)功能的影响。方法原代培养的早产大鼠AECⅡ随机分为4组:空气(Air)组、高氧(HO)组、Air+Lido组、HO+Lido组。HO、HO+Lido组在更换培养液后按5 L/min通入95%O2-5%CO2的高纯混合气,10 min后密封。Air+Lido、HO+Lido组在更换培养液时加入20μg/ml的Lido,各组均置于37℃、5%CO2培养箱中培养24 h,收集各组细胞,运用Real-Time PCR检测肺表面活性物质蛋白(SP)A、SPB、SPC mRNA的表达。结果 HO组SPA、SPB、SPC mRNA表达低于Air组(P<0.01);Air+Lido组SPA、SPB、SPC mRNA表达高于Air组(P<0.01);HO+Lido组SPA、SPB、SPC mRNA高于HO组(P<0.01),但低于Air组(P<0.01)。结论高氧可导致早产大鼠AECⅡSPA、SPB、SPC mRNA表达下调,Lido能逆转上述改变。Lido对高氧所致早产鼠AECⅡ损伤有一定的保护作用。
- 丁小芳钟礼立张兵李嘉
- 关键词：利多卡因早产
- 利多卡因对高氧暴露早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用被引量：4
- 2011年
- 目的观察利多卡因(Lido)对高氧暴露的早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)增殖和凋亡的影响,为防治早产儿高氧肺损伤提供依据。方法原代培养的早产大鼠AECⅡ随机分为4组:空气组、高氧组、空气+Lido组、高氧+Lido组。高氧、高氧+Lido组按5 L/min通入95%O2/5%CO2高纯混合气,10 min后密封。空气+Lido、高氧+Lido组加入20μg/mL Lido。各组均置于培养箱(37℃,5%CO2)中培养24 h,收集各组细胞,采用流式细胞仪检测AECⅡ凋亡率和细胞周期;运用Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。结果与空气组比较,高氧组AECⅡ凋亡率增高,G2/M、S期细胞比例明显降低(P<0.01);PCNA蛋白表达明显下调(P<0.01)。而Lido干预后可使AECⅡ凋亡率降低,G2/M、S期细胞比例增高,PCNA蛋白表达上调。结论高氧可使早产大鼠AECⅡ凋亡增加,增殖抑制;Lido对高氧所致的AECⅡ损伤有直接的抑制作用。
- 丁小芳钟礼立张兵李嘉
- 关键词：利多卡因凋亡高氧早产大鼠
