国家自然科学基金(30971128)
- 作品数：7 被引量：26H指数：3
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- 腺病毒介导的人表皮生长因子基因转染对人表皮细胞生物学特性的影响被引量：1
- 2016年
- 目的观察腺病毒介导的人EGF（Ad-hEGF）基因转染人表皮细胞的合适条件及转染对该细胞生物学特性的影响。方法取包皮环切术后弃用的新鲜人体包皮组织，通过酶消化法分离人表皮细胞，传代培养，采用第3代细胞进行以下实验。（1）按随机数字表法（分组方法下同）将细胞分为未转染组及5、20、50、100、150、200倍转染组，每组3孔。未转染组不转染Ad-hEGF基因，后6组分别按感染复数（MOI）5、20、50、100、150、200转染Ad-hEGF基因。转染24、48、72h，倒置相差显做镜下观察细胞形态，倒置荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达。（2）另取3个批次细胞，分别同前分组处理，分别于转染24、48、72h，流式细胞仪检测Ad-hEGF基因转染率（样本数为3），ELISA法检测收集的细胞培养上清液中EGF质量浓度（样本数为6），细胞计数试剂盒8（CCK8）及酶标仪检测细胞增殖活性（样本数为6）。（3）另取细胞分为未转染组和转染组，每组6孔。未转染组用未转染细胞的细胞培养上清液孵育，转染组用以最佳MOI（50）转染Ad-hEGF基因细胞的细胞培养上清液孵育，分别于孵育1、3、5d，CCK8及酶标仪检测细胞分泌的EGF生物活性。（4）另取细胞分为未转染组和转染组，每组12孔。未转染组不转染Ad-hEGF基因，转染组以最佳MOI（50）转染Ad-hEGF基因。转染24h，免疫荧光染色法检测细胞角蛋白14（CK14）、CK19表达。（5）另取细胞，同（4）分组（每组6孔）处理，于划痕后0（即刻）、12、24、48h，倒置相差显微镜下观测细胞迁移距离。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、LSD检验。结果（1）转染24、48h，各转染组细胞形态与未转染组比较，无明显改变；转染72h，200倍转染组的细胞碎片较未转染组明显增多。转染24、48、72h，未转染组细胞未见绿色荧光蛋白表达，各转染组
- 尹凯马丽申传安尚玉茹李大伟李龙珠赵东旭程文凤
- 关键词：表皮生长因子转染细胞运动人表皮细胞生物学特性
- 严重烫伤大鼠胰岛β细胞结构和功能的变化被引量：3
- 2013年
- 目的观察严重烫伤大鼠胰岛B细胞的结构和功能变化，探讨与糖代谢障碍之间的关系。方法将72只Wistar大鼠按随机数字表法分为烫伤组和假伤组，每组36只。将烫伤组大鼠背部浸于94℃热水12s、腹部6S，造成50％TBSAⅢ度烫伤；假伤组大鼠背部、腹部浸于37℃温水模拟烫伤。伤后6h及3、7d，各组分别取12只大鼠行腹腔葡萄糖耐量试验（IPGTT），检测血糖水平并计算血糖曲线下面积（AUC）。IPGTT结束后，分离大鼠胰腺组织行胰岛素免疫荧光和细胞核染色，观测胰岛内胰岛素阳性表达面积比、13细胞面积和数量（简称“胰岛内3项指标”）。对数据行重复测量方差分析及析因设计方差分析，两两比较采用LSD法。结果（1）伤后6h和3d，烫伤组大鼠葡萄糖注射前后血糖水平总体及各时相点血糖水平均显著高于假伤组（处理因素主效应，值分别为79．372、32．962，P值均小于0．001；两两比较，P〈0．05或P〈0．01）。伤后7d，2组大鼠葡萄糖注射前后血糖水平总体及各时相点血糖水平均相近（P值均大于0．05）。（2）烫伤组大鼠血糖AUC总体明显高于假伤组（处理因素主效应，F：337．87，P〈0．01）。伤后6h及3d，与假伤组[（1019±32）、（1003±72）mmol·min·L-1]比较，烫伤组大鼠血糖AUC均有显著升高[（1501±163）、（1132±67）mmol·min·L-1，P值均小于0．001]。伤后7d，2组大鼠的血糖AUC相近（P〉0．05）。烫伤组大鼠伤后3、7d血糖AUC均显著低于伤后6h（P值均小于0．001）。（3）烫伤组大鼠胰岛内3项指标水平总体均明显低于假伤组（处理因素主效应，值分别为135．17、24．75和39．35，P值均小于0．01）。2组大鼠伤后6h胰岛内3项指标水平无明显差异（P值均大于0．05），而烫伤组大鼠伤后3、7d胰岛内3项指标水平[0．47±0．05、0．51±0。07，（0．032±0．008）、（0．037±0．008）mm2，（303
- 李大伟申传安柴家科马丽尚玉茹李龙珠
- 关键词：胰腺糖代谢高糖血症
- 胰高血糖素样肽1对骨骼肌成肌细胞增殖的调控及信号机制被引量：3
- 2011年
- 目的探讨胰高血糖素样肽1（GLP-1）对骨骼肌成肌细胞增殖的调控作用及其信号机制。方法体外培养大鼠骨骼肌成肌细胞株L6，并按随机数字表法分为4组：（1）对照组，培养液中除常规成分外不再添加其他物质；（2）GLP-1组，培养液中加入终浓度10nmol／L的GLP-1；（3）磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂组，培养液中加入终浓度为50nmol／L的PI3K特异性抑制剂渥曼青霉素；（4）GLP-1＋PI3K抑制剂组，培养液中加入终浓度10nmol／L的GLP-1和终浓度50nmol／L的渥曼青霉素。各组细胞接受上述处理后分别继续培养24、48、72h，采用噻唑蓝法测定细胞增殖活性（结果用吸光度值表示）；继续培养24h时，用流式细胞仪检测细胞周期分布，行免疫组织化学染色检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）表达，蛋白质印迹法检测磷酸化（P-）蛋白激酶B（Akt）、p-PI3K的蛋白表达水平。对实验数据行方差分析。结果（1）GLP-1组细胞接受处理后48、72h，增殖活性分别为0．660±0．120、0．870±0．240，均显著高于对照组（0．530±0．060、0．700±0．100，F值分别为5．46、5．90，P〈0．05或P〈0．01）。PI3K抑制剂组各时相点增殖活性均低于对照组。GLP-1＋PI3K抑制剂组处理48、72h，细胞增殖活性分别为0．510±0．080、0．740±0．160，与GLP-1组比较差异均有统计学意义（F值分别为5．46、5．90，P〈0．05或P〈0．01）。（2）处理后24h，GLP-1组S期细胞百分比为（15．7±0．4）％，显著高于对照组[（13．6±0．6）％]和GLP-1＋PI3K抑制剂组[（10．1±0．6）％]；PI3K抑制剂组s期细胞百分比为（6．84±1．2）％，明显低于对照组。以上各项比较F值均为15．39，P值均小于0．01。（3）处理后24h，GLP-1组细胞PCNA增殖指数为（51．24±1．18）％，显著高于对照组[（36．72±1．56）％]和GLP-1＋PI3K抑制剂组[（25．90±1．22）％]；PI3K�
- 申传安柴家科马丽海恒林张琳
- 关键词：胰高血糖素样肽1细胞增殖信号通路
- 低浓度胰蛋白酶消化法优化大鼠角质形成细胞的传代培养被引量：2
- 2014年
- 目的了解通过改良传代技术是否可获取高增殖活性的大鼠KC，为体外研究提供种子细胞。方法将从3只清洁级新生SD大鼠背部皮肤中分离、培养的原代KC按随机数字表法分为改良组和传统组，改良组采用0．25g／L胰蛋白酶联合0．4g／L乙二胺四乙酸消化传代，传统组采用2．5g／L胰蛋白酶结合0．4g／L乙二胺四乙酸消化传代。收集2组原代细胞及传代细胞于倒置相差显微镜下进行形态学观察。取部分第1代细胞，应用锥虫蓝染色法观察细胞存活情况并计算存活率（样本数为3）；另取第1代细胞培养1、12、24h，噻唑蓝比色法进行细胞黏附实验（以吸光度值表示黏附细胞数量，每时相点样本数为6）。取第5代细胞，采用流式细胞仪检测细胞周期，B半乳糖苷酶染色法计算衰老细胞百分比。对数据行LSD-t检验。结果改良组原代细胞、第5代细胞及第18代细胞形态类似，呈圆形或小的多角形，或呈鹅卵石样；传统组原代细胞形态与改良组类似，第5代细胞胞体变大，增殖缓慢，呈片状覆盖，无法再继续传代。改良组细胞存活率为（94．6±1．7）％，显著高于传统组[（66．2±2．6）％，t=15．815，P〈0．05]。培养1、12、24h，改良组黏附细胞数量分别为0．205±0．015、0．225±0．014、0．265±0．021，均显著多于传统组（0．176±0．015、0．196±0．011、0．221±0．019，t值分别为2．947、3．517、3．476，P值均小于0．05）。改良组（S＋G2／M）期细胞所占比例[（30．6±2．3）％]显著高于传统组[（17．0±5．6）％，t=3．890，P〈0．05]。改良组衰老细胞百分比[（10．9±2．0）％]显著低于传统组[（75．9±4．1）％，t=24．624，P〈0．05]。结论低浓度胰蛋白酶消化法能减轻细胞损伤、提高细胞活性、增加传代次数，为实验研究创造良好条件。
- 尚玉茹申传安柴家科马丽李大伟李龙珠尹凯
- 关键词：胰蛋白酶连续传代角质形成细胞
- 胰高血糖素样肽1的结构及生物学作用研究进展被引量：8
- 2011年
- 胰高血糖素样肽1（glucagon-like peptide-1,GLP-1）是肠道L细胞分泌的一种重要的肠肽激素,可通过其受体作用于胰腺组织,调控cAMP、PI3K和MAPK等信号通路,促进胰岛素分泌、刺激β细胞增殖和抑制β细胞凋亡,还作用于神经系统、肝脏、骨骼肌和心肌等多种胰腺外组织,从多个靶点和环节调控糖代谢,并具有高血糖依赖性促胰岛素分泌的作用。GLP-1是近年来调控糖代谢药物的研究热点,本文就其结构、生物学作用和信号机制的研究进展作一综述。
- 金玉翠申传安柴家科
- 关键词：胰高血糖素样肽1胰岛素分泌细胞
- 股二头肌长头肌瓣联合半V形股后筋膜皮瓣修复坐骨结节压疮被引量：10
- 2012年
- 目的 观察应用股二头肌长头肌瓣联合半V形股后筋膜皮瓣修复坐骨结节压疮的临床疗效. 方法 选择2004年4月-2010年6月2家笔者单位收治的坐骨结节深度压疮患者8例共10处创面,压疮范围2cm×2 cm～6 cm ×4cm.设计股二头肌长头肌瓣和半V形股后筋膜皮瓣进行修复,其中股后筋膜皮瓣大小为10 cm ×6 cm ～13 cm×8 cm.统计术后皮瓣成活情况,并进行远期随访. 结果 术后皮瓣全部成活,其中9处压疮切口术后顺利愈合；1处因皮瓣下积液引流部位形成窦道,经换药治疗于术后25 d愈合.随访7～34个月,7例患者的皮瓣质地柔软,外形良好,无破溃；1例患者术后9个月压疮复发,再次利用该皮瓣修复得以愈合. 结论 该联合皮瓣手术操作简单、损伤小、抗压效果好、可重复利用,是修复坐骨结节压疮的一种新方法.
- 海恒林申传安柴家科李华涛
- 关键词：修复外科手术坐骨结节压疮
- Quadrilobed superior gluteal artery perforator flap for sacrococcygeal defects
- 2013年
- HAI Heng-linSHEN Chuan-anCHAI Jia-keLI Hua-taoYU Yong-mingLI Da-wei
- 关键词：皮瓣动脉组织缺损伤口愈合
