国家科技重大专项(2008ZX08008-005)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：曹少先惠锋明蒋进茆达干张鹏更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学长春普莱医药生物技术有限公司更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项中农-南农青年教师开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 豚鼠发情周期不同时期的子宫LHR mRNA差异表达研究被引量：1
- 2011年
- 【目的】克隆豚鼠子宫黄体生成素受体(LHR)基因片段并分析其进化关系,研究豚鼠子宫LHR mRNA在发情周期不同时期的表达特性。【方法】以豚鼠子宫总RNA为模板,根据小鼠、大鼠、猪LHR保守区设计引物,RT-PCR扩增LHR基因片段。筛选阳性克隆测序,采用DNAMAN软件分析比对同源性。以β-actin为分子内参,采用优化的半定量RT-PCR技术,测定豚鼠发情周期不同时期的子宫组织LHR mRNA表达量。【结果】测序得到686 bp的剪接变异体1和缺失75 bp 4号外显子的剪接变异体2。686 bp序列与人类LHR mRNA序列同源性为83.8%,与牛、猪及绵羊LHR mRNA序列同源性分别为84.6%、84.2%及83.6%,而与大鼠和小鼠LHR mRNA序列同源性则分别高达93.7%和99.4%。LHR mRNA在豚鼠整个发情周期的子宫中都有表达,发情周期第0天的表达水平为0.635±0.0194,第4天为0.617±0.099,均显著低于第8天的表达水平(P<0.05),随之在第12天升至1.218±0.049。【结论】克隆的片段为豚鼠LHR基因的部分序列,其mRNA存在着剪接变异体。豚鼠子宫LHR mRNA在发情周期第0、4天表达水平较低,第12天升至最高,即发情周期不同时期的LHR mRNA表达呈现明显的规律性,该结果为探究哺乳动物非性腺组织中LHR的功能及生殖内分泌调控机制提供了理论依据。
- 蒋进曹少先茆达干惠锋明
- 关键词：发情周期子宫半定量RT-PCR
- 真核表达载体pIRES2-EGFP-V13KL的构建及在COS-7细胞和小鼠胚胎中的表达
- 2011年
- 构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-V13KL,瞬时转染COS-7细胞及对小鼠受精卵进行原核注射,旨在通过抗菌肽V13KL在COS-7细胞、小鼠胚胎中的表达情况评价其对细胞生理状态、胚胎发育方面可能产生的影响。结果显示,V13KL可以与EGFP在COS-7细胞中高效共表达,转染效率为75.8%,且原核注射后约10%的胚胎发育成带有绿色荧光的囊胚。
- 关继羽李松励张鹏宋光启刘丽梅刘颖王中伟高飞唐博陈育新岳占碰李子义
- 关键词：COS-7流式细胞术
