中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金(2010C5)
- 作品数：5 被引量：50H指数：3
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- TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR法检测幽门螺杆菌被引量：5
- 2012年
- 目的建立TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测幽门螺杆菌(HP)的方法。方法针对HP cagA基因设计特异性引物和探针,建立TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的特异性、灵敏度和重复性。用该法对肝癌、肝硬化患者腹水及全血,猪、金黄地鼠、猴、犬、兔、豚鼠、大鼠、小鼠的全血、粪便、肠共1 201份标本进行检测,同时作常规细菌分离和测序分析。结果本方法特异性为100%,最低可检测2.2×101copies/μL的质粒DNA。标准曲线表明其具有良好线性关系,回归方程为:Y=-3.306X+38.633,相关系数(r)为0.999,扩增效率为100.648%。批内相对标准偏差(RSD)为0.19%～1.2%,批间RSD为0.14%～3.4%,RSD均<5%。上述1 201份标本用本法检出HP阳性130份,常规细菌分离法仅检出2份HP阳性。测序结果表明,与GenBank中收录的HP序列同源性为99%～100%。结论建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR法特异性和灵敏度高,重复性良好,适用于HP感染的检测。
- 高正琴岳秉飞贺争鸣
- 关键词：幽门螺杆菌实时荧光定量PCR
- 泰泽氏菌TaqManMGB探针荧光定量PCR方法的建立及应用被引量：3
- 2012年
- 目的建立泰泽氏菌的TaqMan小沟结合物（MGB）探针荧光定量PCR检测方法。方法针对泰泽氏菌16SrRNA基因的保守区设计特异性引物和探针，建立MGB探针荧光定量PCR方法，并验证该方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008--2011年采集的1156份临床样本进行检测，同时进行普通PCR检测作为对照。结果泰泽氏菌TaqManMGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性，与肝螺杆菌、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌之间无交叉反应，检测灵敏度达2．2copy／μl。标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系，相关系数为0．999，斜率为-3．204，PCR效率为100％。对1156份临床样本进行检测，荧光定量PCR检出101份泰泽氏菌阳性样本，而普通PCR则仅检出44份。荧光定量PCR方法从临床样本中检出泰泽氏菌DNA仅需2h。结论TaqManMGB探针荧光定量PCR方法具有特异、灵敏和稳定性，适于泰泽氏菌的快速检测。
- 高正琴岳秉飞贺争鸣
- 关键词：荧光定量PCR
- TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测布鲁氏菌被引量：36
- 2011年
- 目的利用新一代TaqMan MGB探针技术,建立特异敏感的实时荧光定量PCR方法,用于布鲁氏菌的快速检测。方法针对布鲁氏菌基因组中16SrRNA序列设计特异性引物和探针,建立一套基于TaqMan MGB探针技术的实时荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性,对2008-2010年期间采集的773份动物样本中的布鲁氏菌进行检测,并与普通PCR方法进行比较分析。结果建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对布鲁氏菌的检测具有高度的特异性,对小肠结肠耶尔森菌、假结核耶尔森菌、肠炎沙门氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌均无交叉反应。生成的标准曲线的相关系数为0.999,斜率为-3.301,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR效率为100.872%。TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR能够准确地从布鲁氏菌阳性样本中检测到布鲁氏菌DNA,最低能够检测到的布鲁氏菌数量为9.3拷贝,比常规PCR方法的灵敏度高100倍。对773份动物样本进行检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR能检出53份布鲁氏菌阳性样本,而常规PCR只检出37份阳性。结果显示,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比常规PCR方法更敏感,能够直接从动物样本中检出布鲁氏菌DNA,检测时间仅为2h。结论本研究首次建立了直接用于检测动物样本中布鲁氏菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法,该技术适用于传染性病原体的快速检测与鉴定。
- 高正琴邢进冯育芳岳秉飞贺争鸣
- 关键词：布鲁氏菌GROOVE
- 肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用研究被引量：2
- 2011年
- 目的建立特异、敏感、快速检测肝螺杆菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法。方法针对肝螺杆菌flaB基因的保守区设计特异性引物和探针，建立肝螺杆菌Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR方检测方法，验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008-2011年期间采集的1081份临床样本中的肝螺杆菌进行检测，同时进行分离培养和常规PCR检测。结果建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对肝螺杆菌的检测具有高度的特异性，对幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均无交叉反应，检测的灵敏度达8．3拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系，相关系数为0．999，斜率为-3．227，TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR效率为100％。对1081份临床样本进行检测，TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出86份肝螺杆菌阳性样本，而细菌分离培养则仅检出4份阳性。结果显示，建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感，能够直接从临床样本中检出肝螺杆菌DNA，检测时间仅为2h。结论研究建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点，适用于肝螺杆菌的快速检测。
- 高正琴邢进冯育芳岳秉飞贺争鸣
- 关键词：肝螺杆菌实时荧光定量PCR
- TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测支原体的研究被引量：9
- 2011年
- 目的:建立特异、敏感、快速检测支原体的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法。方法:针对支原体16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立支原体TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008～2010年期间在北京采集的680份小型猪、小鼠、大鼠样本中的支原体进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测。结果:建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对支原体的检测具有高度的特异性,对空肠弯曲菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌均无交叉反应,检测的灵敏度达9.2拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.328,TaqManMGB探针实时荧光定量PCR效率为100%。对680份动物样本进行检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出77份支原体阳性样本,但分离培养未能检出支原体阳性样本。结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从动物样本中检出支原体DNA,检测时间仅为2 h。结论:本研究建立了一种可靠、快速、灵敏的检测支原体的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法,并且成功应用于小型猪、小鼠、大鼠样本中支原体的检测。该技术为动物源性药品和生物制品中支原体的快速检测提供了实用的工具。
- 高正琴邢进冯育芳岳秉飞贺争鸣
- 关键词：支原体实时荧光定量PCR
