广东省科技计划工业攻关项目(2007A020300007-8)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 氯霉素驱动的β-半乳糖苷酶互补体系的构建
- 2010年
- 目的构建氯霉素驱动的β-半乳糖苷酶(β-gal)互补体系,以期建立氯霉素残留检测用非竞争性均相酶互补免疫分析系统(OS-ECIA)。方法从大肠杆菌DH5α和BL21株分别克隆β-galΔα和Δω基因,采用重叠延伸PCR组装含抗氯霉素抗体可变区的互补肽融合蛋白,在T7启动子驱动下于大肠杆菌宿主株中表达,表达产物纯化与复性后进行酶互补活性分析。结果成功克隆和高效表达融合肽基因VH-CAP-Δα和VL-CAP-Δω,表达产物为包涵体蛋白,经纯化和复性后呈现特征性酶学互补活性,且酶活性呈现氯霉素依赖性增加。结论成功构建氯霉素驱动的β-gal互补体系。
- 李黄金陈伟赵林邱映丽赖琼英林冬霞郭志云
- 关键词：氯霉素Β-半乳糖苷酶
- β-半乳糖苷酶供体片段定点突变、表达、纯化与活性分析
- 2010年
- 目的构建含ε-NH2标记位点的克隆酶供体免疫分析（CEDIA）系统供体片段。方法从大肠杆菌基因组克隆β-半乳糖苷酶（β-gal）的α片段基因,通过定点突变在原精氨酸位点处引入赖氨酸突变,与硫氧环蛋白（Trx）融合表达后与Δα片段进行酶学互补活性分析。结果克隆的α片段为β-galN端1-56多肽片段,定点突变得R14K、R53K和R14K/R53K等3种突变体。融合表达产物经亲和层析后纯度达到90%以上,且4种α片段的纯度基本一致。各纯化产物显示了不同的酶学互补活性,其中R53K突变体的活性远高于R14K和R14K/R53K的,且与野生型α片段的基本一致。结论α片段R53K突变体具有作为CEDIA系统含内部标记位点供体的潜力。
- 李黄金陈伟赵林黄志健
- 关键词：Β-半乳糖苷酶供体标记位点
