国家自然科学基金(81172091)
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
- 相关作者：孙玉洁杨楠管蔚胡美铃冷彦更多>>
- 相关机构：南京医科大学江苏省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ER拮抗剂逆转乳腺癌多药耐药的实验研究
- 2013年
- 目的探讨ER拮抗剂（ICI 182，780）对人乳腺癌紫杉醇（PTX）耐药细胞株MCF-7／PTX耐药逆转的作用及其相关机制。方法应用Western印迹方法检测MCF-7／PTX细胞多药耐药基因（MDRl）编码的P-糖蛋白（P-gp）的表达；应用荧光酶标仪检测MCF-7／PTX细胞R-123外排。反映P-gp的泵功能；应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度ICI 182，780及化疗药物（PTX、EPI、VCR）对MCF-7／PTX细胞的增殖抑制效应，并计算半数抑制浓度（IC50）；应用RT—PCR检测无毒剂量ICI182，780对MCF-7／PTX细胞内MDR1表达水平的影响。结果P-gp在MCF-7／PTX细胞较MCF-7细胞表达增高；无毒剂量ICI182，780通过降低MCF-7／PTX细胞内MDRl表达水平发挥耐药逆转作用;MCF-7／PTX细胞对PTX、ADR和VCR的耐药性较MCF-7细胞强，加入ICI182，780能增强MCF-7／PTX细胞对化疗药物的敏感性。结论ER拮抗剂ICI182，780可部分逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／PTX细胞对PTX、EPI和VCR的耐药性，其逆转机制与抑制MDRI的表达有关。
- 胡美铃时俊锋丁海剑孙玉洁
- 关键词：乳腺癌药物耐受性
- DNA甲基化异常与肿瘤耐药被引量：8
- 2014年
- 肿瘤耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因,其产生机制复杂多样,是多种因素共同作用的结果。近年来,表观遗传改变在肿瘤耐药中的作用日益受到关注。DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰,在调节基因表达和维持基因组稳定性中扮演着重要角色。原发性或获得性耐药的肿瘤细胞大多伴随DNA异常甲基化,越来越多的证据显示,DNA甲基化异常是肿瘤细胞耐药表型产生的重要机制。文章就DNA甲基化异常与肿瘤细胞耐药的关系及相关作用机制进行了综述。
- 司鑫鑫孙玉洁
- 关键词：肿瘤耐药DNA甲基化基因组稳定性基因表达
- 细胞凋亡反应中NOXA基因启动子发挥增强子功能调节BCL2基因表达被引量：1
- 2020年
- 真核生物基因的转录受到近端启动子和远端增强子的共同调控,部分基因的启动子可兼具有增强子的活性。NOXA与BCL2分别是BCL2蛋白家族促凋亡和抗凋亡成员。本课题组前期研究发现,NOXA基因启动子与BCL2基因启动子在染色质三维空间结构上存在相互作用,且NOXA基因启动子区兼有启动子和增强子特征性的组蛋白修饰标记。为进一步探究NOXA启动子是否具有增强子活性、能否在细胞凋亡过程中作为增强子调控BCL2基因表达,本研究利用染色质构象捕获(chromosome conformation capture,3C)、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和荧光素酶报告基因等检测技术在喜树碱诱导的MCF-7细胞凋亡模型中证实,NOXA启动子兼具增强子活性,并可通过形成染色质环结构远程调控BCL2基因表达。NOXA启动子的调控属性与凋亡信号强弱密切相关,在较弱凋亡信号刺激下(1μmol/L喜树碱处理),NOXA启动子主要发挥增强子功能;随着凋亡刺激信号的加强(10μmol/L喜树碱处理),NOXA启动子活性增强,主要调控其基因自身的表达,促进细胞凋亡。染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)证实NOXA启动子区启动子活性和增强子活性的动态变化与其组蛋白修饰标志一致。本研究为进一步探讨BCL2家族成员对细胞凋亡刺激做出协同反应的机制提供了新的线索。
- 秦中勇石晓曹平平褚鹰管蔚杨楠程禾孙玉洁
- 关键词：增强子细胞凋亡
- 环境类雌激素双酚A通过上调Snail蛋白表达促进MCF-7乳腺癌细胞迁移
- 2014年
- 目的:探讨外源性双酚A(BPA)调控MCF-7乳腺癌细胞迁移的分子机制。方法:通过划痕实验和Transwell实验检测MCF-7乳腺癌细胞迁移能力,并以黏附实验反向辅助验证;通过质粒转染干扰Snail蛋白表达水平,进一步研究外源性BPA调控MCF-7乳腺癌细胞迁移的分子机制。结果:外源性BPA能上调细胞中Snail的表达水平,从而下调E-cadherin的表达并促进MCF-7乳腺癌细胞迁移;siRNA干扰Snail表达后MCF-7乳腺癌细胞迁移减慢。此外,BPA刺激能降低MCF-7乳腺癌细胞黏附能力。结论:外源性BPA可通过上调Snail表达水平,促进MCF-7乳腺癌细胞的迁移,为进一步阐明乳腺癌细胞侵袭与转移的分子调控机制提供了新线索。
- 冷彦吴艺舟孙玉洁
- 关键词：双酚ASNAILE-CADHERINMCF-7乳腺癌细胞
- 抗癌药可通过激发长散在元件-1介导的基因组不稳定导致三阴性乳腺癌化疗耐药
- 三阴性乳腺癌（TNBC）指癌组织中雌激素受体、孕激素受体和人类表皮生长因子受体2（Her2）均为阴性的乳腺癌,是所有亚型中侵润性强、预后差的一类。化疗依然是TNBC治疗的主要方式,而化疗耐药是TNBC治疗的主要阻碍之一。...
- 石晓
- 关键词：三阴性乳腺癌L1化疗耐药基因组不稳定
- 文献传递
- 人乳腺癌LINE-1稳转细胞系的建立
- 2018年
- 目的构建人乳腺癌细胞MDA-MB-231稳定过表达LINE-1（long interspersed nuclear element1）细胞系，为研究LINE-1在乳腺癌的发生发展中的作用提供新的细胞模型。方法将带有neo（neomycin）抗性基因的LINE-1表达质粒瞬时转染到细胞中，当质粒稳定整合到基因组时细胞能表达出Neo基因并获得抗性产物，这类细胞则能在含有G418的选择性培养基中存活下来；存活下来的细胞进行有限稀释得到单个细胞，条件培养基培养单细胞至长成单细胞克隆；采用普通PCR、琼脂糖凝胶电泳、Real time PCR对得到的单细胞克隆进行稳转效果验证。结果通过质粒转染、G418药物筛选和有限稀释法得到LINE-1稳定高表达乳腺癌细胞系。结论成功建立了人乳腺癌细胞LINE-1稳定高表达细胞系，为后续研究提供了细胞模型。
- 张二少石晓孙玉洁
- 关键词：乳腺癌
- DNMT3a通过提升基因内部甲基化介导紫杉醇诱导的LINE-1异常表达被引量：6
- 2020年
- 药物诱导的长散在重复序列LINE-1异常激活可促进细胞基因组不稳定,而基因组不稳定是促进肿瘤发生发展和耐药表型形成的重要因素。因此,探索LINE-1异常激活的分子机制具有重要的理论和临床意义。DNA甲基化是调控基因表达的重要方式,已知DNA甲基转移酶家族成员DNMT3a不仅能通过促进基因启动子甲基化抑制基因表达,还可通过增强基因内部甲基化上调基因表达。本实验室前期研究发现,将乳腺癌细胞暴露于化疗药物可诱导LINE-1异常高表达,但LINE-1启动子甲基化水平并无显著改变。本研究进一步探讨了在化疗药物压力下DNMT3a是否可通过增强LINE-1基因内部甲基化水平促进LINE-1在乳腺癌细胞中的异常高表达。ChIP实验和甲基分析结果显示,用化疗药物紫杉醇(PTX)处理乳腺癌细胞,不仅可以诱导DNMT3a表达,而且可以促进DNMT3a与LINE-1基因内部区域的结合,提升其基因内部甲基化水平,进而上调LINE-1的表达水平。利用表达载体增加细胞内DNMT3a的表达水平,可显著上调LINE-1基因内部的甲基化及基因的表达水平,而下调DNMT3a的表达可有效抑制LINE-1表达。上述研究结果表明,DNMT3a介导的基因非启动子区甲基化在药物诱导的LINE-1异常激活中发挥重要作用,为认识LINE-1在乳腺癌化疗耐药性形成过程中异常激活的机制提供了新思路。
- 王昕源张雨杨楠程禾孙玉洁
- 关键词：乳腺癌
