国家高技术研究发展计划(2004AA2Z3530)
- 作品数：13 被引量：51H指数：5
- 相关作者：汪世平彭先楚周松华徐绍锐李文凯更多>>
- 相关机构：中南大学南方医科大学湖南大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项湖南省重大科技专项更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 日本血吸虫雌雄合抱差异表达蛋白的分离与鉴定
- 血吸虫的一个显著特点是雌雄异体但又终生合抱。雌雄合抱是童虫发育成熟的必要条件,没有合抱的雌虫不能发育至性成熟,一直停留在童虫阶段,而不能产卵;只有居住在雄虫抱雌沟中的雌虫,其卵黄细胞才能产生蛋白质颗粒及增强梅氏腺细胞合成...
- 戴橄汪世平余俊龙姜孝新曾少华徐绍锐李文凯肖小芹车宏丽
- 文献传递
- 沙眼衣原体质粒蛋白pORF5核酸疫苗抗衣原体生殖道感染免疫保护作用被引量：2
- 2008年
- 探讨沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis,Ct)pORF5质粒蛋白核酸疫苗免疫保护效果,及分析其可能的免疫保护机制,以确定pORF5在Ct疫苗研制中的应用价值.构建pORF5核酸疫苗,建立Ct感染小鼠模型,并在该模型中评价pORF5核酸疫苗抗Ct感染效果.运用细胞培养法检测Ct清除率及定植量的改变,ELISA法分析脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4产生水平及小鼠血清及生殖道局部抗体产生情况;HE染色法分析输卵管病理组织变化;MTT法分析脾淋巴细胞增殖.结果经鼻黏膜3次免疫后,pORF5核酸疫苗组在Ct感染后第24天其清除率为100%,显著高于pcDNA3.1,PBS对照组(P<0.01),定植密度明显低于对照组(P<0.01),仅在pORF5核酸疫苗组小鼠血清及生殖道中检测到了特异性抗体,产生的抗体亚类分别以IgG2a,IgA为主;免疫组小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ及刺激指数均明显高于pcDNA3.1,PBS对照组(P<0.01),但产生IL-4的水平均较低.pORF5核酸疫苗组小鼠输卵管解剖结构基本正常,而pcDNA3.1,PBS组小鼠输卵管壶腹部、峡部肿胀,管壁血管扩张充血,单侧或双侧发生不同程度扭曲变形积水.这些资料显示pORF5核酸疫苗可诱导小鼠产生明显的抗Ct保护效应,其可能的免疫保护机制包括诱导Th1型为主的细胞免疫应答及高效价的特异性抗体的产生,提示pORF5核酸疫苗具有潜在的疫苗研究与开发价值.
- 李忠玉汪世平吴移谋钟光明陈玎
- 关键词：沙眼衣原体核酸疫苗免疫保护TH1型免疫反应
- 抗日本血吸虫病天然分子疫苗免疫猪血清筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库结果分析被引量：4
- 2006年
- 目的通过天然分子疫苗免疫猪血清作为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,应用表达序列标签获得日本血吸虫新基因。方法制备天然分子免疫猪血清,将筛选的尾蚴cDNA文库中大肠杆菌XL1-Blue侵入大肠杆菌BM25.8后环化成质粒,筛选出已转入质粒的菌株。提取质粒DNA,进行测序,得到一个表达序列标签(EST)。通过NCBI网站的BLASTx及BLASTn公共数据库,编辑分析EST序列并进行同源性比较。结果从26个克隆样品中筛选出8个阳性克隆,其中有一个新基因(GenBank登录号DQ097517),该基因全长861bp,有完整的阅读框架,与蜜蜂(Apismellifera)SMC3蛋白编码的mRNA基因序列同源性最高。结论疫苗免疫猪血清可作为筛选日本血吸虫新基因的有效探针,新发现1个日本血吸虫相关基因。
- 曾少华吕志跃汪世平张加祥陈晓光周松华刘雪琴李文凯姜孝新肖小芹徐绍锐彭先楚
- 关键词：日本血吸虫表达序列标签
- 日本血吸虫SJCWL06基因编码蛋白结构与功能的生物信息分析被引量：7
- 2006年
- 目的分析和预测日本血吸虫SJCWL06基因编码蛋白的结构与功能。方法利用国际互联网中生物信息网站如美国国家生物技术信息中心(NCBI)等的相关信息,分析与预测该编码蛋白一、二、三级结构与功能。结果该基因长861bp,有一个完整的327bp的开放读框,编码109个氨基酸,其编码蛋白有一个信号肽,多个磷酸化位点和一个ABC-三磷酸腺苷酶的结构域,与蜜蜂(Apis mel-lifera)SMC3编码的mRNA基因序列同源性最高(84%)。结论SJCWL06基因编码蛋白具有进一步研究的潜在价值。
- 曾少华汪世平张加祥吕志跃周松华刘雪琴徐绍锐姜孝新彭先楚李文凯
- 关键词：日本血吸虫生物信息学基因
- 日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP的安全性评价被引量：8
- 2007年
- 目的评价日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP的安全性。方法同体左右侧自身对比法对3只家兔进行局部肌肉刺激实验,22只豚鼠随机分为4组:A组为无菌生理盐水阴性对照组,B组为牛血清白蛋白阳性对照组,C组为pcDNA3/SjSDISP低剂量组,D组为pcDNA3/SjSDISP高剂量组,进行全身过敏实验。结果日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP对家兔局部肌肉刺激反应轻微,对豚鼠无全身过敏反应。结论日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP在该实验条件下安全。
- 刘芬汪世平蔡胜蓝余俊龙彭先楚
- 关键词：日本血吸虫DNA疫苗
- 日本血吸虫成虫38kDa天然分子抗原的分离纯化与免疫保护性的研究被引量：3
- 2005年
- 目的研究日本血吸虫成虫可溶性抗原38kDa(SjAWA38kDa)的动物保护作用,并对SjAWA38kDa作为抗日本血吸虫病分子疫苗的可行性进行评估。方法用SDS-PAGE电泳、切胶、电洗脱、超滤等方法分离纯化SjAWA38kDa,继而用SjAWA38kDa免疫昆明小鼠,然后进行尾蚴攻击感染(40尾/只),进行减虫率和减卵率研究。结果SjAWA 38kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用,其减虫率为33.8%,减卵率为51.7%,有统计学意义(P<0.05)。结论SjAWA 38kDa分子抗原具有刺激机体产生抗日本血吸虫病的免疫保护作用,可以作为抗日本血吸虫病分子疫苗研究的靶标。
- 姜孝新汪世平肖小芹曾少华周松华刘雪琴吕志跃徐绍锐彭先楚何卓
- 关键词：日本血吸虫抗原纯化
- 日本血吸虫中国大陆株琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白的克隆与表达被引量：2
- 2006年
- 目的:克隆日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)全长编码基因,并对所获基因在大肠杆菌中进行表达。方法:根据基因库中SjSDISP对应的EST(BU804141)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgt11多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjSDISP基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用电子软件拼接成全长cDNA,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1上,经琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化、PCR和测序鉴定后,选择阳性克隆进行表达及Western印迹分析。结果:获得1071bp全长cDNA,其理论推导为编码278个氨基酸残基的蛋白质。SjSDISP基因在大肠杆菌BL21中获得良好表达。该融合表达产物相对分子质量约为56kD,且能被日本血吸虫成虫抗原免疫血清特异识别。结论:编码日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达获得成功。
- 余俊龙汪世平何卓戴橄姜孝新曾少华肖晓芹周松华李文凯徐绍锐吕志跃彭先楚
- 关键词：日本血吸虫基因克隆基因表达
- 照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库被引量：5
- 2006年
- 目的 从日本血吸虫尾蚴cDNA文库中获得日本血吸虫新的蛋白编码基因，为防治血吸虫病提供候选疫苗和治疗药物靶点。方法 制备致弱尾蚴免疫兔血清作为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库，挑取阳性克隆，测序并进行生物信息学分析。结果 共筛选出8个阳性克隆，长度分布于0．6～3．0kb。随机选取4个阳性克隆进行PCR扩增及测序，获得2个日本血吸虫新基因；整合酶相似蛋白编码基因和蛋白磷酸酶1催化亚单位编码基因。前者长度为636bp，含一个462bp完整开放阅读框（ORF）；后者1879bp，含一个984bp完整ORF。两者GenBank的登录号分别为：AY855919、AY879341。结论 致弱尾蚴免疫兔血清可作为筛选日本血吸虫新基因的有效探针；发现了2个日本血吸虫新基因。
- 汪世平曾少华吕志跃陈晓光李文凯姜孝新肖小芹徐绍锐周松华彭先楚何卓
- 关键词：日本血吸虫致弱尾蚴免疫血清CDNA文库
- 基于酶生物催化沉积放大的日本血吸虫压电免疫传感器被引量：4
- 2008年
- 提出了一种基于酶生物催化沉积放大的日本血吸虫压电免疫传感器．采用混合自组装单层膜技术在石英晶振金电极表面制备巯基丙酸（MPA）和巯基乙醇（ME）混合功能基底膜，通过偶联剂盐酸1-乙基-3-（3-甲基氨基丙基）碳二亚胺（EDC）及N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活化混合膜上富含的羧基基团用于日本血吸虫抗原（SjAG）的高效共价固定．通过夹心式免疫反应，将辣根过氧化酶（HRP）标记的羊抗兔二抗固定到晶体表面，利用HRP催化H202氧化底物4-氯-1-萘酚在晶振表面形成不溶性沉积物，使免疫检测信号得以显著放大．在优化的实验条件下，该传感器可灵敏检测感染兔血清样中日本血吸虫抗体（SjAb）浓度（稀释比）的线性范围是1：10000～1：100，可望用于日本血吸虫病的早期临床诊断．
- 车宏莉张云汪世平吴朝阳沈国励
- 关键词：压电免疫传感器日本血吸虫
- 日本血吸虫合抱相关未知功能基因SJCHGC00821的克隆及生物信息学分析被引量：4
- 2006年
- 目的克隆与日本血吸虫合抱相关但未知功能的新基因SJCHGC00821,构建其真核表达载体,并应用生物信息学初步探讨其功能。方法应用PCR技术从日本血吸虫成虫cDNA文库中扩增SJCHGC00821基因全长ORF,将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3中,通过PCR、限制性酶切分析及测序进行鉴定。应用生物信息学初步分析其细胞定位、蛋白序列、结构域及功能。结果获得日本血吸虫合抱相关未知基因SJCHGC00821的克隆,序列分析结果提示该cDNA序列含有一个597bp的完整阅读框序列,编码198个氨基酸,其编码蛋白的理论分子量为22.76kDa,等电点为4.84。二级结构分析预测提示其具有一定抗原性。结论成功地克隆了日本血吸虫SJCHGC00821基因全长ORF,构建了其pcDNA3真核表达载体,为进一步研究其结构与功能创造了条件。
- 戴橄汪世平余俊龙姜孝新曾少华徐绍锐李文凯
- 关键词：日本血吸虫基因克隆生物信息学
