上海市自然科学基金(09ZR1425500)
- 作品数：6 被引量：19H指数：2
- 相关作者：朱文辉顾羊林王予彬陈鹏朱国兴更多>>
- 相关机构：同济大学附属东方医院南京医科大学同济大学更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金南京医科大学科技发展基金资助南京医科大学科技发展基金更多>>
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- 成肌细胞-PLGA支架复合物修复比格犬半月板损伤的实验研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨成肌细胞种植于聚乳酸聚乙酸共聚物(PLGA)支架上,软骨定向诱导后植入比格犬体内修复半月板缺损的可能性。方法将来源于比格犬的成肌细胞培养传代至第4代,收集后以5.0×106细胞/cm3材料体积密度将细胞接种于PLGA支架中,含50 ng/ml软骨源性形态发生蛋白-2(CDMP-2)和20 ng/ml转化生长因子β1(TGF-β1)软骨诱导培养基培养14 d。然后将细胞-支架复合体植入24只比格犬半月板缺损模型中,术后4、8、12周取材,采用大体观察、组织学、生物化学和生物力学作为评估指标。结果术后4、8、12周各项检测结果显示PLGA支架材料逐渐降解吸收,而成肌细胞可逐渐合成分泌新生胶原,并最终形成半月板样纤维组织,而对照各组缺损区则仅见少许纤维组织样的修复组织。结论利用成肌细胞经体外扩增及细胞因子刺激后,以PLGA支架为载体,按一定的细胞密度复合培养后,植入关节腔内修复半月板局部缺损的方法,是一种较为可行的修复半月板损伤的方法。
- 顾羊林陈鹏王予彬朱文辉朱国兴
- 关键词：成肌细胞软骨素半月板
- 犬成肌细胞复合聚乳酸聚乙酸共聚物支架在裸鼠体内异位成软骨的实验研究
- 2013年
- 目的探讨与聚乳酸聚乙酸共聚物[poly(lactide-co-glycolide),PLGA]支架复合后的成肌细胞体外经软骨来源形成蛋白2(cartilage-derived morphogenetic protein 2,CDMP-2)联合TGF-β1诱导后,能否在裸鼠体内异位构建组织工程软骨。方法取1岁龄雄性比格犬股直肌肌肉分离培养成肌细胞,取第4代成肌细胞接种于PLGA支架,加入含CDMP-2与TGF-β1的软骨诱导液体外培养2周。实验分为4组:A组为经软骨诱导的成肌细胞-PLGA复合物组,B组为未经软骨诱导的成肌细胞-PLGA复合物组,C组为经软骨诱导的单纯PLGA支架组,D组为单纯PLGA支架组。于24只裸鼠背部皮下两侧制备4个皮下腔隙,分别植入4组材料。术后8、12周处死裸鼠,取材行大体观察、HE及甲苯胺蓝染色、Ⅰ型胶原及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察,RT-PCR检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、蛋白聚糖(Aggrecan)、Sox9mRNA表达,阿利新蓝染色检测糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAG)含量,生物力学试验检测标本压缩弹性模量。结果 A组标本术后8周呈类软骨样,乳白色,表面光洁,有弹性;12周时外观和弹性与正常软骨相似。B组术后8周仅残余少许组织,12周已完全降解;C、D组标本术后8周均降解消失。HE染色示A组8、12周时有成熟软骨陷窝形成;B组8周时组织内未见软骨陷窝形成。甲苯胺蓝染色示A组8、12周时组织内新生软骨细胞形成,细胞椭圆,排列整齐,细胞陷窝形成,细胞质和细胞外基质均蓝染阳性;B组8周时组织内未见蓝染的细胞外基质。Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示A组8、12周时均呈阳性表达;B组8周时呈阴性表达。RT-PCR检测示术后8、12周A组均可见Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Aggrecan和Sox9 mRNA表达,B组均呈阴性。术后12周A组压缩弹性模量为(90.79±1.78)MPa,GAG含量为(10.20±1.07)μg/mL与正常半月板相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外CDMP-2联合TGF-β1软骨诱导的比格犬成肌细胞复合PLGA�
- 顾羊林王予彬施克勤杨玉生陈鹏朱文辉朱国兴
- 关键词：组织工程软骨成肌细胞裸鼠
- 犬成肌细胞体外向纤维软骨细胞表型分化的实验研究被引量：1
- 2012年
- 目的观察体外培养的犬成肌细胞在诱导培养液作用下向纤维软骨细胞表型分化的可行性。方法取成年比格犬大腿后群肌肉,以机械分解法与二步酶消化法相结合,分离获取成肌细胞,取第4代成肌细胞,实验组以2.0×104/cm2细胞密度接种于24孔板,在含有人源性软骨源性形态发生蛋白-2(human cartilage-derivedmorphogenic protein-2,hCDM P-2)的高糖DM EM完全培养液中诱导分化,对照组以相同细胞密度接种于24孔板,加入不含诱导因子的高糖DMEM完全培养液。诱导21 d后,倒置显微镜下观察诱导细胞形态学的改变,H-E染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学方法检测诱导细胞的分泌功能,RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白和Sox9的mRNA表达情况。结果诱导后成肌细胞的形态由长梭形向多角形类、圆形转变。甲苯胺蓝染色呈明显异染,Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学检测阳性,对照组阴性。RT-PCR检测显示经诱导后细胞Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白和Sox9的mRNA在对应区域均有目的条带出现,而对照组未见明显的目的条带亮带。结论在hCDM P-2诱导下,犬成肌细胞可定向分化为软骨细胞。
- 顾羊林朱文辉王予彬卢亮宇程晏李靖龙
- 关键词：成肌细胞软骨分化种子细胞软骨组织工程
- 大鼠膝关节骨性关节炎动物模型的两种实验方案被引量：15
- 2014年
- 通过前交叉韧带切断及膝关节制动两种实验方法,诱导大鼠膝关节发生骨性关节炎。将SD大鼠随机分为前交叉韧带切断组、膝关节制动组,分别进行前交叉韧带横断和伸膝位石膏固定。在处理后第3、6及8周处死大鼠,取膝关节股骨內髁关节软骨,测定各实验组膝关节软骨基质蛋白多糖、II型胶原纤维及软骨细胞凋亡的病理变化。以HE染色法评定Mankin关节软骨病理评分,判断骨性关节炎分期。结果表明:大鼠前交叉韧带切断法及膝关节制动法均能建立骨性关节炎动物模型,但不同方法建立的骨性关节炎模型的病变特点及病理分期不尽相同。前交叉韧带切断模型组造模时间较长,实验6、8周分别为早期和中期骨性关节炎,基质流失是其首动因素;膝关节制动模型组造模时间较短,实验3、6和8周分别为早期、中期和晚期骨性关节炎,软骨细胞损伤和基质分解共同作用是其病理特点。
- 钱洁邢雪松梁军
- 关键词：前交叉韧带骨性关节炎病理学分期
- 转化生长因子β1联合软骨源性形态发生蛋白-2体外诱导成肌细胞向软骨细胞的分化
- 2013年
- 目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)联合软骨源性形态发生蛋白-2(CDMP-2)体外诱导犬成肌细胞向软骨细胞表型定向分化的可行性。方法:取成年比格犬大腿股直肌肌肉,以机械分解法与二步酶消化法分离获得成肌细胞,取第4代成肌细胞,以2.0×104细胞/cm2的密度接种于24孔培养板,使用含CDMP-2和(或)TGF-β1的完全培养液诱导分化成肌细胞,观察细胞生长情况。诱导14 d后获取细胞,进行HE染色、甲苯胺蓝染色,观察细胞形态及胞内高硫酸化的蛋白聚糖变化。免疫细胞化学染色检测II型胶原蛋白着色情况。RT-PCR检测I型、II型胶原蛋白、aggrecan及Sox9 mRNA表达。阿尔新蓝法定量检测细胞糖胺聚糖(GAG)含量。结果:3个加入细胞因子的实验组成肌细胞形态由长梭形向多角形、类圆形转变;HE染色、甲苯胺蓝染色和软骨特异性I型和Ⅱ型胶原免疫组化法检测及RT-PCR检测中,实验组均有不同程度的阳性表达;TGF-β1与CDMP-2联合应用组糖胺聚糖含量明显高于其他三组(P<0.05)。结论:CDMP-2和TGF-β1可以单独诱导高密度单层培养的犬成肌细胞向软骨细胞分化,表达软骨细胞特异性细胞表型,并且CDMP-2和TGF-β1有协同作用。
- 顾羊林朱国兴施克勤杨玉生陈鹏朱文辉王予彬
- 关键词：成肌细胞软骨分化种子细胞
- 改良比格犬成肌细胞的体外分离纯化培养及其生物学特性研究被引量：1
- 2014年
- 目的:建立一种体外分离、纯化、培养成年犬骨骼肌成肌细胞的简便有效方法,观察其生长增殖情况,并鉴定其生物学特征。方法:以成年比格犬为研究对象,采用机械分解法与IV型胶原酶和胰蛋白酶的二步酶消化法相结合分离获取犬成肌细胞,并采用差速贴壁法与免疫磁珠分选法相结合纯化成肌细胞。镜下观察分离纯化后的成肌细胞的细胞形态、生长状况,绘制细胞生长曲线,并采用流式细胞仪和免疫细胞化学等方法鉴定成肌细胞纯度。结果:原代培养6 h后可见呈圆形的单核细胞贴壁生长,起初为小圆形,48 h后可见梭形贴壁细胞,3 d后贴壁细胞明显增多,5 d左右进入对数增长期,9 d左右细胞单层融合接近90%。流式细胞仪检测纯化后的第4代(P4)成肌细胞显示,95%细胞表达CD56,Desmin免疫细胞化学染色显示细胞呈阳性反应。结论:该法可获取高纯度、高产量,具有良好增殖、分化能力的成肌细胞,并且获得的成肌细胞的生长增殖能力较强,符合半月板组织工程种子细胞的基本条件。
- 顾羊林王予彬朱文辉陈鹏杨正杰朱国兴
- 关键词：成肌细胞细胞培养生物学特性
