国家自然科学基金(30970110)
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
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- 相关机构：重庆医科大学遵义医学院附属医院更多>>
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- 肺炎链球菌溶血素减毒突变体免疫小鼠可诱导抗体依赖的保护效应
- 2010年
- 目的 优化肺炎链球菌溶血素减毒突变体（△A146 Ply）蛋白小鼠免疫方案,评价其保护效果,并揭示△A146 Ply特异性抗体在保护中的作用.方法 分别使用△A146 Ply免疫小鼠1、2、3次,利用ELISA分析血清内特异性IgG滴度,效价测定1周后,使用肺炎链球菌D39菌株鼻腔攻毒评价3种免疫方式保护效力.通过肺内定植模型和败血症模型分析△A146 Ply对肺炎链球菌感染的保护效果.利用抗体吸附试验和模拟被动保护试验分析Ply特异性抗体的保护作用.结果 随着免疫次数的增加,小鼠血清内的IgG滴度显著升高.相比免疫两次的小鼠,3次免疫后的小鼠其体内的IgG升高超过20倍.在攻毒试验中,免疫3次后的小组接受同等剂量的D39攻毒,存活率最高,保护效率为50%.在定植模型中,△A146 Ply免疫后的小鼠,其肺内肺炎链球菌血清型19F的细菌量减少约50倍,14血清型菌减少超过20倍.在败血症模型中,使用1200 CFU的D39腹腔注射到免疫组及对照组小鼠体内,△A146 Ply免疫组有60%的小鼠能够抵抗这种致命剂量的D39感染,对照组小鼠全部死亡（P=0.0018）.在被动保护试验中,Ply特异性抗体被吸附完全后的抗血清完全不能保护小鼠抵抗致死剂量的D39感染,60%的小鼠在接受抗体特异的抗血清后存活,两组存活率差异有统计学意义.结论 △A146 Ply能有效抵抗肺炎链球菌的感染,证实保护作用与其特异性抗体密切相关.
- 吴凯峰张薇薇史静杨晓亮刘鑫胥文春何於娟张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌
- 运用酶切自连法分析鉴定肺炎链球菌体内诱导基因
- 2010年
- 肺炎链球菌是严重侵袭性感染和上呼吸道感染最重要的条件致病菌之一,分析鉴定体内诱导基因序列变得尤为重要。本研究利用酶切自连法成功从129个体内诱导表达的肺炎链球菌中获得13个融合重组自杀质粒,通过与肺炎链球菌株TIGR4基因组序列的同源性比对,共得到10个不同的体内诱导基因,其中8个是从血液中筛选出的,另2个为从肺组织中筛选出;通过分析得到18个开放阅读框,其中大部分为已知功能基因,参与细菌多种生命活动,有2个为未知功能基因,编码假想蛋白。可见,酶切自连法可有效用于筛选基因的分析鉴定。
- 庞丹王虹尹楠林杨晓亮胥文春尹一兵张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌
- 肺炎链球菌的一种荚膜表面聚合连接酶的鉴定
- 肺炎链球菌的荚膜多糖生成后需连接到细胞壁形成荚膜,其机制尚不清楚。本课题组前期利用DFI技术筛出一个体内诱导基因spd1672,该基因编码的假想蛋白经过NCBI预测可能具有LipidA-O抗原连接酶的功能,本研究针对该蛋...
- 庞丹王虹杨晓亮刘鑫张雪梅尹一兵
- 关键词：肺炎链球菌荚膜多糖
- 文献传递
- 通过替代失活的方法分析核酸片段在肺炎链球菌毒力中的作用
- 2011年
- 目的鉴定基因spd—ABC、spd-1672、sp-1673和长间隔序列spd—J在肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae，S．pn）毒力中的作用。方法采用长臂同源聚合酶链反应（LFH—PCR）的方法分别构建这4个序列的红霉素抗性基因（erm）替代缺失突变体，通过PCR和测序鉴定是否构建成功；通过绘制生长曲线观察基因对细菌生长繁殖的影响，通过小鼠毒力实验观察基因对细菌致病性的影响。结果所构建缺陷菌目的基因由eFm基因完全替代；spd—ABC、spd-1673和长间隔序列spd—J3个片段缺陷菌的生长趋势与野生菌没有明显差异，生长大约5hA值均可达到峰值，而spd-1672缺陷菌出现明显的延迟现象，生长8h后其4值才达到最高值；野生菌与缺失spd—ABC、spd-1673和长间隔序列spd—J的缺陷菌感染小鼠各组半数死亡时间分别为19、22、24和24h，差异无统计学意义，而spd-1672缺陷菌感染小鼠的半数死亡时间在75h左右，显著长于野生菌感染小鼠组（P〈0．05）。结论在构建的4个单个基因缺失突变体中，spd-1672缺陷后．S．pn生长明显延迟，毒力显著下降，提示spd-1672是s-Pn的一个新的毒力因子。
- 张彦青黄健张群钟文胥文春王虹张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌毒力
- 肺炎链球菌疫苗候选蛋白质谷氨酰胺tRNA合成酶的保守性与抗原性分析被引量：2
- 2012年
- 目的分析作为肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)疫苗候选靶点的谷氨酰胺tRNA合成酶(glutamyl tRNA syn-thetase,Gts)的保守性和抗原性,并评价Gts抗原诱导产生的抗体在体内是否存在年龄依赖性。方法 PCR扩增S.pn D39标准菌株的Gts基因,构建pET32a(+)-Gts原核表达质粒并测序。扩增S.pn不同血清型的Gts基因,测序后比对分析其保守性。表达Gts重组蛋白质,并进行纯化和western blot鉴定。用Gts重组蛋白质免疫BALB/c小鼠制备抗Gts的多克隆抗体并测定其效价。western blot分析Gts在不同血清型S.pn中的表达情况。ELISA法测定本地区不同年龄段的健康人及患者血清中抗Gts抗体的效价。结果构建了以D39血清型S.pn为DNA模版的pET32a(+)-Gts表达质粒,其测序结果与预期相符。8株不同血清型S.pn的Gts基因编码区大小与D39菌株一致,约为1 461 bp;经测序后序列比对,其基因一致性>99.0%。经Ni柱纯化得到纯度>95%的Gts重组蛋白质,且能与抗His tag标签抗体特异性结合。采用Gts蛋白质经腹腔免疫小鼠后,其血清抗Gts抗体滴度高达1.024×106(5.12×105,4.096×106),与对照组比较有显著差异(P<0.01)。western blot分析证实,8种不同血清型S.pn全菌裂解物均在Mr约55.9×103处出现特异性反应条带。在不同年龄段的健康人群及患者血清中,均产生高滴度的抗Gts抗体,且随着年龄增加而递增。结论 Gts重组蛋白质免疫原性好,在不同血清型的S.pn中均高度保守,且诱导产生的抗体反应存在年龄依赖性,是一个良好的候选疫苗靶点。
- 闵迅黄美容黄健董杰陈特王虹钟文尹一兵
- 关键词：肺炎链球菌保守性抗原性疫苗
- 假想的脂蛋白连接酶对肺炎链球菌毒力的影响被引量：2
- 2010年
- 【目的】探索假想脂蛋白连接酶(putative lipoate-protein ligase,LPL)对肺炎链球菌毒力的影响。【方法】采用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)的方法失活lpl基因,通过PCR、测序鉴定缺陷菌株,采用细胞实验比较缺陷菌和野生菌对宿主细胞的粘附能力,并通过动物实验观察lpl基因缺陷后菌株毒力的变化。【结果】小鼠毒力实验表明野生菌株和缺陷株半数致死时间均为12h,两者比较无统计学差异;缺陷菌在对宿主细胞的粘附能力明显高于野生菌株(P<0.01);体外荚膜染色实验表明,野生菌和缺陷菌均有荚膜。【结论】实验结果提示lpl基因对细菌粘附宿主细胞有抑制作用,但不影响其腹腔感染小鼠的能力。
- 杨晓亮尹楠林庞丹吴凯峰尹一兵张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌毒力因子细菌粘附
