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国家教育部博士点基金(20100201110051)
作品数:
1
被引量:1
H指数:1
相关作者:
刘勇
吕海侠
李卫松
郑娟
李玲
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相关机构:
西安交通大学医学院第二附属医院
西安交通大学
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发文基金:
教育部“新世纪优秀人才支持计划”
国家教育部博士点基金
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相关领域:
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机构
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西安交通大学
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张蓬勃
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李旭
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郑娟
1篇
李卫松
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吕海侠
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刘勇
传媒
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国际麻醉学与...
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1篇
2011
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抑制小鼠低氧诱导因子-1α基因的小干扰RNA腺病毒载体的构建和功能鉴定
被引量:1
2011年
目的构建针对小鼠低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible transcription factor-1α,HIF-1α)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)腺病毒载体AdHIF-1α-shRNA也GFP,鉴定AdHIF-1α-shRNA-FGFP在培养的小鼠胚胎神经干细胞中对HIF-1α表达的影响,为研究HIF-1α信号途径在神经干细胞生物学中的作用提供基础。方法采用生物信息学方法设计合成针对HIF-1α的siRNA靶DNA序列,通过DNA重组技术构建小鼠HIF-1α-shRNA-EGFP腺病毒载体,PCR和测序鉴定。体外转染培养的小鼠前脑皮质神经干细胞,流式细胞仪检测转染效率,对AdHIF-1α-shRNA-EGFP转染的细胞进行低氧处理,双重免疫荧光检测小鼠胚胎神经干细胞中HIF-1α表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot定量HIF-1α基因和蛋白水平。结果所克隆的序列和已知序列一致;AdHIF-1α-shRNA-EGFP可高效转染小鼠前脑皮质神经干细胞;RT-PCR和Westernblot结果显示,AdHIF-1α-shRNA-EGFP转染小鼠前脑皮质神经干细胞后,低氧条件下小鼠前脑皮质神经千细胞中HIF-1α的基因和蛋白表达分别降低52.05%和67.27%。结论构建的AdHIF-1α-shRNA也GFP能够成功抑制低氧条件下小鼠前脑皮质神经干细胞中HIF-1α的表达。
张蓬勃
李卫松
李旭
郑娟
李玲
王妮
雷珊
陈新林
吕海侠
刘勇
关键词:
神经干细胞
小鼠
低氧诱导因子-1Α
小干扰RNA
腺病毒载体
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