国家高技术研究发展计划(2011AA02A209)
- 作品数：28 被引量：60H指数：5
- 相关作者：杨立荣胡燚吴坚平徐刚黄和更多>>
- 相关机构：浙江大学南京工业大学清华大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：理学生物学化学工程一般工业技术更多>>
- 酰基供体对动态动力学拆分1-四氢萘胺的影响被引量：1
- 2014年
- 采用新型消旋催化剂耦合Novozym 435成功构建1-四氢萘胺的动态动力学拆分体系用于制备光学纯(R)-1-四氢萘胺。该反应存在着自催化酰胺化反应,会降低反应的对映体选择性。从改变酰基供体结构的角度出发来抑制这种自催化酰胺化反应,考察了不同酸部以及不同醇部的酰基供体对1-四氢萘胺动态动力学拆分反应的影响,发现随着酰基供体结构变得复杂,1-四氢萘胺动态动力学拆分反应结果也相应变得越好,当采用戊酸对氯苯酯作为酰基供体时,动态动力学拆分反应结果就可达到最佳,即转化率>99%,光学纯度eeP>99%。
- 戴晓庭孟枭徐刚吴坚平杨立荣
- 关键词：动态动力学拆分
- S-2-氯丙酸脱卤酶在毕赤酵母中的重组表达被引量：1
- 2013年
- 根据S-2-氯丙酸脱卤酶的基因序列设计引物,克隆重组大肠杆菌中的S-2-氯丙酸脱卤酶基因。将目的基因片段构建到pPIC9K载体,经Sac I单酶切后转化到毕赤酵母GS115中,通过G418抗性YPD平板筛选高拷贝重组子,甲醇诱导成功实现胞外活性表达。重点考察了基因拷贝数和甲醇浓度的影响,结果表明重组子含有12个拷贝,甲醇浓度为1%时较佳,重组脱卤酶的酶活可达236U/L。重组毕赤酵母具有很好的遗传稳定性。对该酶最适反应温度及pH进行研究,表明其最适反应温度为50℃,最适pH为9.5。
- 秦迎春杨立荣徐刚吴坚平
- 关键词：毕赤酵母
- 水相中底物促进的铜催化氨基醇N-芳基化反应(英文)被引量：1
- 2013年
- 在水相体系中, 利用铜催化一系列氨基醇类底物(1.2 mmol)与碘代芳烃(1.0 mmol)进行N-芳基化反应. 由于氨基醇具有双齿配位及相转移催化能力, 该反应利用氨基醇类底物自身的促进作用, 在不使用外加配体与相转移催化剂的温和条件下以高收率获得了氨基醇N-芳基化产物(64% 93%).
- 金明赵丹何国珍童耀韩世清
- 关键词：氨基醇水相铜催化
- 稳定蓝相液晶的研究进展被引量：1
- 2012年
- 介绍了蓝相液晶特殊的"双轴螺旋"结构,并解释了其三维晶格的形成。阐述了蓝相液晶在显示器件中的应用优势和原理。分类详细介绍了诸如聚合物稳定、纳米粒子稳定、"香蕉"型或"T"型分子诱发稳定、双液晶基元以及氢键稳定等拓宽蓝相温度范围的方法,分析了各自的特点和优势。最后对蓝相液晶的应用前景进行了展望。
- 李宁郑成武张兴周兴丹李正强华瑞茂
- 关键词：KERR效应
- 基于分子模拟的离子液体修饰Porcine Pancreas脂肪酶催化性能和稳定性的相关研究被引量：6
- 2016年
- 采用分子模拟手段研究了功能性离子液体[HOOCBMIm]Cl修饰Porcine Pancreas脂肪酶(PPL)结构稳定性与催化性能增强的机理.在335和300 K下比较研究两种脂肪酶的一系列相互作用特点与结构性质,包括静电势(electrostatic potential,ESP)、均方根偏差(Root Mean Square Deviation,RMSD)、能量变化、溶剂化面积等等.分析结果表明:在335K下,修饰后的脂肪酶(Engineered PPL)的RMSD值(0.537?)小于未修饰的脂肪酶(Wild-type PPL)的RMSD值(0.68?),同时Engineered PPL的自由能也低于Wild-type PPL的自由能,说明Engineered PPL的构象更加稳定.修饰剂的引入使得Engineered PPL的疏水性面积和溶剂可及性面积(Solvent Accessible Surface Area,SASA)增大,增强了Engineered PPL的稳定性和水解活力.修饰剂的正电性与修饰位点附近的负电势氨基酸形成静电吸引作用,优化了蛋白表面电荷的相互作用,进一步提高了蛋白稳定性;同时也稳定了蛋白盖子结构的打开状态,有利于底物进入蛋白空腔催化位点,实现催化活性提升.本文从分子水平展示了离子液体修饰脂肪酶并提供了一种解析化学修饰改变酶学性质的方法.
- 张川张鲁嘉张洋黄和胡燚
- 关键词：分子动力学模拟稳定性
- 离子液体修饰的SBA-16材料在猪胰脂肪酶固定化中的应用被引量：2
- 2014年
- 合成了功能化的甲基咪唑类离子液体,并将功能化离子液体修饰介孔材料SBA-16。以三乙酸甘油酯的水解为探针反应,考察离子液体修饰的SBA-16固定化猪胰脂肪酶(PPL)的酶活、最适反应条件及重复稳定性等酶学性质。结果表明:固定化酶对温度的敏感度降低,酶活力及稳定性均显著提高,比酶活是原粉SBA-16固定化酶的1.75倍,重复使用6次后仍然保持最初活性的57%;与原粉SBA-16固定化酶保留的38%相比,有明显的提高。同时通过N2吸附-脱附、红外光谱和热重等方法分析了离子液体修饰对SBA-16结构的影响,结果发现,离子液体修饰后材料保持了原有的介孔结构,修饰后载体表面性质和结构性质导致了PPL酶学性质的变化。
- 邹彬初旭明张洋胡燚
- 关键词：固定化离子液体介孔材料脂肪酶修饰
- 碳纳米管固定化酶被引量：5
- 2015年
- 在固定化酶技术中,载体材料的选择至关重要,碳纳米管作为一种新型高效的酶固定化载体,具有较大的比表面积、有序的纳米孔道结构、良好的力学/电学/热学性能、突出的化学稳定性、生物相容性和可控的表面官能化修饰等优良特性,应用日益广泛。本文重点介绍了水解酶、氧化还原酶等具有重要工业应用价值的酶在碳纳米管上的固定化研究现状,探讨了载体的表面修饰和固定化方式对固定化酶的酶学性质的影响,并对碳纳米管固定化酶的发展前景进行了展望。
- 万晓梅张川余定华黄和胡燚
- 关键词：碳纳米管固定化水解酶氧化还原酶
- 信号肽优化在枯草芽孢杆菌体系中对脂肪酶LipS分泌表达的影响被引量：6
- 2015年
- 枯草芽孢杆菌具有良好的安全性和优异的外分泌能力,是目前常用的脂肪酶异源分泌表达体系。在枯草体系中如何提高脂肪酶分泌量是目前的研究热点。该体系中信号肽与目的基因不匹配和目标蛋白总表达量不高是导致脂肪酶LipS分泌表达效果较差的重要原因。针对这些问题,依据信号肽结构特征的不同(正电荷与疏水氨基酸个数的差异)对枯草芽孢杆菌体系中Sec和Tat这两个主要分泌途径的信号肽进行了筛选,结果显示Tat途径中的phoD信号肽分泌效果明显优于其他信号肽。在此基础上,通过替换使用诱导型表达载体、突变优化phoD信号肽,并考察了表达条件的影响,显著提高了脂肪酶LipS的分泌表达量,发酵液中转酯酶活达到62.07U/L,占总酶活的62.30%,较原始分泌表达体系的分泌量提高了13.7倍。
- 周勇徐刚杨立荣吴坚平
- 关键词：脂肪酶信号肽分泌表达
- 功能化离子液体化学修饰猪胰脂肪酶的催化性能被引量：1
- 2014年
- 选取氯化1-羧甲基-3-甲基咪唑、氯化1-羧甲基-3-乙基咪唑、氯化1-羧甲基-3-丁基咪唑3种离子液体对猪胰脂肪酶(PPL)进行化学修饰,得到3种修饰的脂肪酶分别命名为PPL-M、PPL-E、PPL-B。以三乙酸甘油酯水解为模型反应,考察离子液体修饰前后PPL的活力、热稳定性、耐有机溶剂性等酶学性质,并通过紫外光谱研究修饰对PPL空间结构的影响。结果表明:修饰后PPL的活力明显提高,对温度和pH的敏感度降低。修饰酶的热稳定性明显提高,在高浓度的甲醇及N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中仍能保持游离酶活力的100%。修饰后酶的特征吸收峰发生红移,吸收强度增强,修饰后酶的微环境发生了改变。
- 初旭明贾儒杨姣黄和胡燚
- 关键词：离子液体化学修饰
- 基于化学修饰法探讨脂肪酶对手性伯醇的识别机理被引量：1
- 2013年
- 洋葱假单胞菌脂肪酶(PcL)催化多种手性伯醇酯的不对称水解反应显示其对结构中含有额外的非酯键氧原子的手性伯醇酯的对映体选择性较高,而对不含额外氧原子的选择性差。分别用多种氨基酸残基特异性的修饰剂修饰PcL,结果发现经N-乙酰咪唑(NAI)修饰酪氨酸残基(Tyr)后PcL对含额外非酯键氧原子的手性伯醇酯对映体选择性显著降低,而对不含额外氧的伯醇酯选择性几乎不受影响。蛋白质谱证实产生主要影响的是位于PcL活性口袋内的Tyr29残基,手性伯醇酯能否与Tyr29形成额外氢键决定了PcL对其选择性。分子动力学模拟表明,Tyr29被修饰的PcL不能与底物形成氢键,因此选择性明显下降。这一发现成功揭示了脂肪酶对手性伯醇对映体选择性的分子识别机理。
- 周勤丽孟枭徐刚杨立荣
- 关键词：化学修饰对映体选择性分子动力学模拟
