国家自然科学基金(81000735) 作品数:6 被引量:2 H指数:1 相关作者: 白冰珂 胡燕 罗声栋 侯俊 貌盼勇 更多>> 相关机构: 解放军第302医院 中国食品药品检定研究院 解放军第三〇二医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
新型呼肠病毒S1基因的表达鉴定 2012年 目的构建新型呼肠病毒主要抗原蛋白的编码基因S1的重组原核表达质粒,对其在原核细胞内的表达进行研究。方法将S1基因克隆入原核表达载体pProEX HTa,构建重组原核表达载体pPLS,通过IPTG诱导,利用蛋白电泳和蛋白免疫印迹等方法对其在大肠杆菌中的表达进行研究。结果酶切分析表明重组质粒构建成功。SDS-PAGE和Western-blot的检测结果一致表明,诱导后1-5h均可检测到目的蛋白的表达,其中以5h的蛋白表达量最大,且表达的目的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在。结论通过构建重组原核表达质粒,可使目的蛋白σ1得到诱导表达,为后续抗体制备及研究病毒一宿主相互作用提供实验基础。 白冰珂 胡燕 侯俊 沈宏辉 陆日北 罗声栋 黄维芝 柴艳涛 貌盼勇关键词:S1基因 新型呼肠病毒S基因DNA疫苗在小鼠体内的免疫原性 被引量:1 2014年 目的探讨新型呼肠病毒R4株S片段免疫小鼠后引发的免疫应答。方法构建4个不同S基因节段的重组真核表达质粒,并免疫小鼠;ELISA检测血清以研究R4特异性抗体升高水平,并对其抗体亚型进行鉴定;ELISPOT检测小鼠淋巴细胞INF-γ的表达情况。结果与对照组相比,4个重组质粒免疫的小鼠血清都有明显的R4特异性抗体升高,尤其以S1和S3基因免疫后抗体水平较高,且均以IgG2a占绝对优势;S1基因免疫组小鼠的细胞免疫应答最强。结论 S1基因重组质粒免疫小鼠后可同时引发较强的体液免疫和细胞免疫应答,是较为理想的疫苗备选基因片段。 侯俊 刘泽 谢国明 罗声栋 李瑞生 白冰珂关键词:呼肠病毒 DNA疫苗 体液免疫 细胞免疫 小鼠 新型呼肠病毒M片段对核转录因子κB的活性抑制的研究 2013年 目的探讨新型呼肠病毒M片段能否抑制核转录因子-κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)的活性。方法构建3个不同中基因节段的重组真核表达质粒,并瞬时转染真核细胞,利用荧光素酶双报告系统检测其对NF-κB激活有抑制效应的基因。结果酶切鉴定3个基因重组质粒均构建成功。其中M3基因表达的蛋白对肿瘤坏死因子α介导的NF-κB激活有较明显的抑制,抑制率达55%。而M1和M2基因表达的蛋白较之于空载体均无明显的抑制效果。结论 M3基因能显著抑制肿瘤坏死因子α介导的NF-κB激活,为研究病毒的致病及免疫调控机制提供了重要理论依据。 白冰珂 陶玲 沈宏辉 侯俊 胡燕 罗声栋 杨锐创 貌盼勇关键词:质粒 新型呼肠病毒S1基因真核表达质粒的构建及表达 被引量:1 2011年 目的构建新型呼肠病毒主要抗原蛋白盯1蛋白的真核表达质粒,研究其在真核细胞内的表达。方法将s1基因克隆人真核表达载体pCAGGS/MCS,构建真核表达质粒pc—s并转染~ero细胞。通过SDS—PAGE和Western—Blot试验,对转染后24,48及72h的细胞内蛋白表达进行研究。结果酶切分析表明重组质粒构建成功。SDS—PAGE和Western—Blot的检测结果一致表明,转染后s1基因可在Vero细胞内表达且72h的细胞内蛋白表达量最高。结论通过构建重组真核表达质粒,可使s1基因在真核细胞内高效表达,为进一步研究新型呼肠病毒与宿主受体的相互作用打下基础。 白冰珂 黄维芝 罗声栋 胡燕 高蓉 王志杰 黄琼 柳昊东 貌盼勇关键词:基因表达调控 病毒 病毒蛋白质类 新型呼肠病毒S1基因与宿主细胞相互作用的初步研究 2014年 目的筛选出新型呼肠病毒S1基因和宿主相互作用的关键区段,为后续的宿主受体蛋白筛选工作提供可靠的基础。方法将编码全长S1基因,以及N端和C端阅读框分别克隆入真核表达载体pIRSE2-EGFP,转染敏感细胞株鼠成纤维细胞(L929)和人宫颈癌细胞(Hela)后,通过荧光报告基因EGFP的表达分析,筛选出S1基因与宿主细胞相互作用时起决定性影响的区段。结果同等量的3种真核表达质粒在单独转染L929时,pGSN质粒转染后荧光表达量最大,pGSC质粒转染后荧光表达量最小。不同比例混合的pGS与pGSN进行共转染时,pGSN在转染质粒中的比例越高,荧光表达量也越高。在Hela细胞中的转染结果与L929相同。结论新型呼肠病毒R4株的S1基因N端阅读框编码区(62—406 bp)在S1基因转染时起关键作用。 白冰珂 貌达 侯俊 胡燕 谢国明 李瑞生关键词:抗原蛋白 受体蛋白 不同人群中新型呼肠病毒既往感染状况调查 2015年 目的调查不同人群中新型呼肠病毒既往感染情况。方法选取健康人群以及手足口病、腹泻、麻疹、乙型肝炎等患者的血清标本,利用微量中和试验检测其血清标本中新型呼肠病毒IgG抗体。结果中和试验结果表明,健康人群中新型呼肠病毒IgG抗体阳性率为29.90%,抗体滴度的中位数为1:32;手足口病患者中抗体阳性率为70.83%,抗体滴度的中位数为1:64;乙型肝炎和麻疹患者抗体阳性率分别为90.22%和90.70%,抗体滴度的中位数均为1:128;腹泻患者中抗体阳性率和抗体滴度的中位数均最高,分别为100%和1:256。结论健康人群与不同疾病患者中薪型呼肠病毒特异性IgG抗体阳性率及滴度存在显著差异。 胡燕 貌达 刘泽 姜棋予 谢国明 白冰珂关键词:血清分型