国家自然科学基金(30570095)
- 作品数：5 被引量：110H指数：2
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- 马尔尼菲青霉外分泌性酸性蛋白酶的分离纯化与鉴定
- 目的：对马尔尼菲青霉外分泌性酸性蛋白酶进行分离、纯化及鉴定.方法：①将马尔尼菲青霉B-6323株菌接种在pH4.0,以牛血红蛋白为底物的酵母碳基液基中进行蛋白酶诱导培养.②运用双向凝胶电泳(2D SDS-PAGE)技术对...
- 王鹏冉玉平尹斌庄凯文
- 关键词：马尔尼菲青霉分离纯化质谱分析
- 糠秕马拉色菌菌丝态和酵母态细胞差异表达片段的筛选被引量：1
- 2009年
- 目的获得糠秕马拉色菌菌丝态细胞表达而酵母态细胞不表达的基因片段。方法体外诱导培养糠秕马拉色菌标准株菌丝态和酵母态细胞并提取二者总RNA;逆转录生成糠秕马拉色菌两相细胞cDNA,运用消减杂交技术获得菌丝态细胞差异表达的cDNA,并建立差异cDNA文库;对差异cDNA片段进行克隆测序和分析。结果①改良菌丝诱导培养基培养糠秕马拉色菌第1d可见芽生菌丝生长,第2d可见较多菌丝,第6d菌丝更长更粗;②获得可满足多种分子生物学技术要求的RNA;③建立了菌丝态细胞差异表达的cDNA文库,并获得糠秕马拉色菌菌丝态细胞表达而酵母态细胞不表达的基因片段。结论体外诱导糠秕马拉色菌菌丝生成,建立了糠秕马拉色菌菌丝态细胞的差异cDNA文库,并对部分克隆片段进行测序和分析。
- 闫薇冉玉平梁作辉夏庆杰闫乃红张浩
- 关键词：糠秕马拉色菌菌丝消减杂交CDNA
- 一种适用于PCR反应的酵母菌、无绿藻及丝状真菌DNA提取方法被引量：30
- 2006年
- 目的介绍一种从酵母、无绿藻及丝状真菌中提取DNA以用于PCR反应的方法。方法所用菌种包括临床分离的未知菌株和保藏菌株共23株:未知酵母菌(5株)、真皮毛孢子菌(1株)、糠秕马拉色菌(1株)、季也蒙念珠菌(5株)、未知丝状真菌(6株)、无绿藻(1株)、烟曲霉(2株)、拟青霉菌(1株)、茎点霉(1株)。用溶细胞酶(lyticase)结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA,A260/A280检测纯度并计算质量浓度,用真菌通用引物ITS1/ITS4扩增真菌核糖体基因(rDNA)内转录间区ITS基因,经PCR扩增检验所提取的DNA质量。结果成功提取所有23株真菌基因组DNA,其纯度及质量浓度能满足PCR反应的要求。结论用溶细胞酶结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒从酵母菌、无绿藻及丝状真菌提取的DNA可用于PCR反应。
- 刘素玲冉玉平曾蔚张浩代亚玲李明远贾文祥
- 关键词：DNA提取
- 糠秕马拉色菌酵母态和菌丝态蛋白差异表达的研究被引量：1
- 2014年
- 目的通过双向电泳及串联质谱技术鉴定糠秕马拉色菌酵母态及菌丝态差异蛋白,在蛋白水平探讨两态转化机制及致病机理。方法分别诱导糠秕马拉色菌标准株酵母态和菌丝态菌体,利用玻璃珠研磨和超声波破碎细胞壁,三氯乙酸/丙酮沉淀获取总蛋白。双向电泳分离蛋白,PDQuest软件比对找出差异蛋白点。电喷雾串联质谱对差异点进行肽段测序,用Mascot和NCBI的Blast软件经蛋白质数据库鉴定蛋白质。结果经双向电泳分离的糠秕马拉色菌酵母态、菌丝态蛋白各有800多个蛋白点、64个蛋白点表达量有3倍以上差异,其中11个为酵母态特有,9个菌丝态特有。在选取的40个差异点中,成功鉴定出22个点,共16个蛋白。经Mascot和Blast软件检索,有明确功能的蛋白中,肌动蛋白、丝切蛋白等9个蛋白在菌丝态上调,谷胱甘肽转移酶、细胞支架信号蛋白等5个蛋白下调。结论鉴定出16个蛋白分别与细胞代谢、运动、氧化应激等功能相关,为了解糠秕马拉色菌表型转换机制和致病机理提供重要信息。
- 向耘冉玉平仝爱平勾蓝图王伟代亚玲
- 关键词：双向电泳蛋白糠秕马拉色菌
- 3株不同表型马尔尼菲青霉外分泌蛋白酶活性比较被引量：1
- 2014年
- 目的探讨如何有效诱导马尔尼菲青霉蛋白酶分泌及比较3株不同表型的马尔尼菲青霉菌株之间外分泌蛋白酶活性差异。方法选用临床分离的马尔尼菲青霉B-6323株(P株)及其两个不同表型的突变株M/M株和M/Y株,用以牛血红蛋白为底物的酵母碳基琼脂培养基(蛋白酶诱导培养琼脂基)诱导其外分泌蛋白酶分泌。将pH值为4.0、5.6及7.2的蛋白酶诱导培养琼脂基平板打孔后分别等量接种上述3株菌,分别置于25℃及37℃培养6 d后,行考马斯亮兰G-250染色,测定各菌株周围的透亮圈(蛋白分解环)直径。结果以牛血红蛋白为底物的酵母碳基琼脂培养基可有效诱导马尔尼菲青霉蛋白酶分泌;3株马尔尼菲青霉在任意3种pH值培养基中培养,37℃培养下菌周透亮圈直径大于25℃培养下,差异经t检验有统计学意义。经方差分析,37℃,pH4.0、5.6、7.2培养条件下马尔尼菲青霉菌周透亮圈直径之间差异有统计学意义(F值为97.198,P=0.000 1),用SNK法进行两两比较发现pH4.0与pH7.2菌周透亮圈直径及pH5.6与pH7.2菌周透亮圈直径差异均有统计学意义。当温度为37℃或25℃时,在任意一个pH值下,均为M/M株的菌周透亮圈直径均数最大,其次为P株,M/Y株最小。结论马尔尼菲青霉在37℃,酸性培养条件(pH4.0、5.6)下外分泌蛋白酶活性大,且不同表型株之间外分泌蛋白酶活性有差异,M/M株及P株为高外分泌蛋白酶活性株,M/Y株为低外分泌蛋白酶活性株。
- 王鹏冉玉平尹斌庄凯文林新瑜代亚玲
- 关键词：马尔尼菲青霉活性
- 中国大陆马尔尼菲青霉病的临床表现及流行病学特征的系统评价被引量：77
- 2007年
- 目的了解马尔尼菲青霉病在我国大陆地区的临床及流行病学特征。方法应用计算机和人工检索我国大陆地区1985～2006年间公开报道的有关马尔尼菲青霉病的文献,归纳其临床和流行病学特征。结果共纳入46篇文献,涉及138例马尔尼菲青霉病患者,其中人类免疫缺陷病毒(HIV)阳性者98例(71.0%),发病呈逐年上升趋势,男性发病远多于女性(3.6∶1)。临床表现中发热132例(95.7%);有网状内皮系统体征(肝、脾、淋巴结肿大)111例(80.4%);贫血104例(75.3%);皮疹100例(72.5%);肺部病变(肺部结核样阴影、间质性肺炎、胸膜炎、胸腔积液、肺纹理增粗等)91例(65.9%)。66例(47.8%)死亡。结论我国大陆地区的马尔尼菲青霉病发病逐年上升,患者HIV阳性率高,临床表现主要为发热、贫血、肝脾或淋巴结肿大、肺部病变、皮疹等。
- 赵国庆冉玉平向耘
- 关键词：马尔尼菲青霉病
