广东省自然科学基金(010721)
- 作品数：11 被引量：52H指数：4
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- 相关机构：中山大学附属第二医院中山大学华中科技大学更多>>
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- 人参皂甙Rb1对脑缺血再灌注损伤半影区葡萄糖转运体1表达的影响被引量：14
- 2005年
- 目的 观察大鼠局灶性脑缺血 /再灌注后脑梗死体积的变化和葡萄糖转运体 1(GLUT1)在缺血半影区的表达情况以及人参皂甙Rb1对其的影响。方法 雄性成年SD大鼠 42只 ,随机分成 3组 :假手术组、对照组和人参皂甙Rb1干预组。用线栓法复制大脑中动脉阻塞 (MA CO)模型 ,在脑缺血 1h再灌注 5h时取材 ,用氯化三苯基四唑氮 (TTC)染色后 ,全自动图像分析系统进行图像分析脑梗死体积比 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)测定GLUT1mRNA水平的变化 ;用免疫组织化学半定量测定GLUT1蛋白水平的变化。结果 假手术组、对照组和人参皂甙Rb1干预组的梗死体积百分比分别为 0、(0 .0 4± 0 .0 1) %和 (0 .0 2± 0 .0 1) % ;3组半影区的GLUT1mR NA水平分别是 (0 .2 3± 0 .14 )、(0 .5 5± 0 .0 4)和 (0 .79± 0 .19) ;蛋白表达的PU值分别为 (5 .1±1.2 )、(13 .1± 1.7)和 (19.0± 1.9)。结论 人参皂甙Rb1明显缩小缺血再灌注损伤后脑梗死的体积 ,Rb1通过上调半影区GLUT1表达以维持脑组织的能量供给可能是其发挥脑保护作用的机制之一。
- 李方成陶宗玉刘安民李军亮吴中华林吉惠
- 关键词：人参皂甙RB1GLUT1葡萄糖转运体脑缺血再灌注损伤逆转录一聚合酶链反应
- 葡萄糖转运体3在大鼠脑缺血/再灌注后海马中的表达被引量：1
- 2005年
- 【目的】研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、海马区葡萄糖转运体3(GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达。【方法】健康雄性 SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分成3组:①缺血1h 再灌注组(MCAO1h/R)28只;②缺血3h 再灌注组(MCAO3h/R)24只;③假手术组(pseudo operation)4只。用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用 Kontron IBAS2.5全自动图像分析系统检测脑梗死体积比;剥取海马区皮质组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),测定 GLUT3 mRNA 水平的变化;用免疫组织化学半定量测定 GLUT3蛋白水平的变化。【结果】脑缺血1h 后再灌注(MCAO1h/R)较缺血3h 再灌注(MCAO3h/R)脑梗死体积明显减小。MCAO1h/R 组:GLUT3 mRNA 在6h 有1次升高,但以后各时相均低于正常对照组。MCAO3h/R 组:各时间点 GLUT3 mRNA 的表达均低于正常对照组,在72h、1周不能测到GLUT3 mRNA 的表达。GLUT3蛋白水平的表达与 mRNA 相符合。MCAO3h/R 组与 MCAO1h/R 组在相应的各时间点比较,GLUT3 mRNA 降低幅度差异有统计学意义。【结论】GLUT3在缺血海马区的表达下降,可能与脑缺血再灌注损伤后神经元退变或死亡有关。
- 李方成陶宗玉刘安民李军亮吴中华林吉惠
- 关键词：脑缺血-再灌注RT-PCR
- 大鼠GLUT1真核表达载体的构建及其在293细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的:构建大鼠葡萄糖转运体1(GLUT1)的真核表达载体。方法:以RT-PCR方法从大鼠脑组织中 获取GLUT1全长cDNA片段,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3．1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3．1(+)- Glutl,随后用lipofectamineTM2000介导转染HEK293细胞,以RT-PCR法检测重组质粒在mRNA水平的表达,以免疫 组化的方法检测重组质粒在蛋白水平的表达。结果:以构建的重组真核表达质粒pcDNA3．1(+)-Glutl转染293细 胞后,在基因及蛋白表达水平均检测到了葡萄糖转运体1的表达。结论:成功构建了携带大鼠葡萄糖转运体1的真 核表达载体pcDNA3．1(+)-Glutl,且证实其可在293细胞中成功表达目的基因,为进一步研究外源性GLUT1表达对 缺血缺氧脑细胞的保护作用奠定了基础。
- 李方成李军亮刘然义吴中华张培峰刘安民
- 关键词：葡萄糖转运体1真核表达脑缺血293细胞免疫组织化学
- 大鼠GLUT3基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的构建携带大鼠葡萄糖转运体3(GLUT3)基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,为研究GLUT3的生物学功能提供工具。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT3基因全长cDNA片段,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-GLUT3,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-GLUT3,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印记法(westernblot)的方法从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒。结果经DNA测序和PCR分析显示GLUT3cDNA序列正确。成功筛选出重组腺病毒质粒pAd-GLUT3后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及westernblot检测表明重组腺病毒包装成功。结论本研究成功构建了携带大鼠GLUT3基因的复制缺陷型重组腺病毒载体。
- 李方成李军亮吴中华张培峰黄文林刘然义
- 关键词：基因克隆重组腺病毒
- 异丙酚预先给药对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织葡萄糖转运体-3表达的影响被引量：3
- 2006年
- 目的研究异丙酚预先给药对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织葡萄糖转运体-3(GLUT3)表达的影响。方法健康雄性SD大鼠90只,体重290-310 g,随机分成3组:假手术组(S组,n=6)、生理盐水组(NS组,n=42)、异丙酚组(P组,n=42)。NS、P组采用线栓法阻断大脑中动脉1 h行再灌注,制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,P组在缺血前10 min腹腔注射异丙酚10 mg／100 g,NS组给予等量生理盐水,S组只作切口,不行缺血。NS、P组分别在再灌注即刻、2 h、5 h、11 h、23 h、71 h、1周各处死6只大鼠,S组于实验11 h处死大鼠,断头取脑,计算脑梗塞体积比,用RT-PCR法测定GLUT3 mRNA表达水平,用免疫组织化学法测定GLUT3蛋白表达水平。结果NS组及P组再灌注期脑梗塞体积比、GLUT3 mRNA及GLUT3蛋白表达均高于S组,与NS组比较,P组脑梗塞体积比降低,脑组织GLUT3 mRNA及GLUT3蛋白表达升高(P<0．05)。结论异丙酚预先给药可上调脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织GLUT3的表达,可能是其减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的机制之一。
- 叶西就李方成曹德雄曹明辉陶宗玉彭书崚
- 关键词：二异丙酚单糖转运蛋白质类再灌注损伤
- 大鼠脑缺血/再灌注过程中脑型葡萄糖转运体在缺血半影区的表达被引量：9
- 2005年
- 【目的】研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、皮质半影区脑型葡萄糖转运体(GLUT1、GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达。【方法】用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用KontronIBAS2.5全自动图像分析系统检测脑梗死体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),测定GLUT1、GLUT3mRNA水平的变化;用免疫组织化学半定量测定GLUT1、GLUT3蛋白水平的变化。【结果】脑缺血1h后再灌注(MCAO1h/R)较缺血3h再灌注(MCAO3h/R)脑梗死体积明显减小。MCAO1h/R组GLUT1、GLUT3mRNA缺血后升高,24h到达高峰,但GLUT1比GLUT3提前升高,且升高的幅度更大。MCAO3h/R组GLUT1在3h开始升高,24h到高峰;GLUT3在缺血3h有一下降点,然后升高,24h到高峰,一周恢复正常,同样GLUT1比GLUT3提前升高,且升高的幅度更大。MCAO3h/R组较MCAO1h/R组的GLUT1、GLUT3峰值低。GLUT1、3蛋白水平的表达与mRNA相符合。【结论】GLUT1、GLUT3在缺血半影区的表达上调,可能是机体对缺血/再灌注损伤的保护性反应。
- 李方成陶宗玉刘安民李军亮吴中华林吉惠
- 关键词：脑缺血-再灌注葡萄糖转运体1
- 大鼠脑缺血/再灌注过程中葡萄糖转运体1在缺血半影区的表达被引量：16
- 2004年
- 目的 :研究局灶性脑缺血大鼠在不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗塞体积比、皮质半影区葡萄糖转运体 1(GLUT1)转录水平和蛋白水平的表达。方法 :用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型 ,用KontronIBAS2 5全自动图像分析系统进行图像分析脑梗塞体积比 ;剥取缺血半影区皮质组织 ,采用反转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR) ,测定GLUT1mRNA水平的变化 ;用免疫组织化学半定量测定GLUT1蛋白水平的变化。结果 :脑缺血 1h后再灌注脑梗塞体积明显小于缺血 3h再灌注。GLUT1mRNA自 1h即开始升高 ,2 4h到达高峰 ,1周时仍高于假手术对照组 ;缺血 3h再灌注组在 3h开始升高 ,2 4h到高峰 ,1周后仍高于正常 ,但升高幅度不及MCAO 1h/R组。MCAO 1h/R组GLUT1蛋白水平自 3h开始升高 ,2 4h达到高峰 ,1周时接近正常 ;MCAO 3h/R组GLUT1在 3h下降 ,继之升高 ,2 4h到高峰 ,1周时接近正常。结论 :GLUT1在缺血半影区的表达上调 。
- 李方成陶宗玉刘安民李军亮吴中华林吉惠
- 关键词：脑缺血再灌注单糖转运蛋白质类
- 大鼠脑缺血再灌注后半影区葡萄糖转运体3表达的变化(英文)
- 2005年
- 背景:近年来的研究表明,缺血缺氧导致脑内代谢异常乃至能量衰竭,是引起脑组织损伤坏死的重要原因,可见能量代谢障碍是脑缺血再灌注损伤的中心问题。在脑的能量代谢中葡萄糖转运体3中发挥着重要作用。目的:观察大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、皮质半影区葡萄糖转运体3转录水平和蛋白水平的表达。设计:随机对照实验。单位:中山大学附属第二医院神经外科。材料:实验于2002-08/10在中山大学附属第二医院医学研究中心动物试验室完成。选择SD大鼠56只,随机分成3组:①缺血1h再灌注组28只。②缺血3h再灌注组24只。③假手术对照组4只。缺血1h再灌注组自缺血开始分别选取1,3,6,12,24,72h,1周7个时间点,每个时间点7只大鼠;缺血3h再灌注组除无1h时点外,其余时间点与缺血1h再灌注组相同,假手术对照组只作切口,不作插线。方法:用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,检测缺血中心区和缺血半影区脑梗死体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用反转录-聚合酶链反应测定葡萄糖转运体3mRNA水平的变化;用免疫组织化学方法半定量测定葡萄糖转运体3蛋白水平的变化。主要观察指标:①各组大鼠脑缺血再灌注后的脑梗死面积。②各组大鼠脑缺血再灌注后的葡萄糖转运体3mRNA表达水平的变化。③各组大鼠脑缺血再灌注后的葡萄糖转运体3蛋白水平表达的变化。结果:56只大鼠均进入结果分析。①脑缺血1h后再灌注组的脑梗死体积明显小于缺血3h再灌注组梗死体积。②葡萄糖转运体3mRNA及蛋白水平表达变化:葡萄糖转运体3自3h即开始升高,24h到达高峰,1周时仍高于假手术对照组;缺血3h再灌注组在3h有一下降点,然后升高,24h到高峰,1周时接近正常水平。葡萄糖转运体3蛋白水平的表达与mRNA相符合。结论:葡萄糖转运体3在缺血半影区的表达上调
- 李方成陶宗玉刘安民李军亮张蕲吴中华林吉惠
- 关键词：脑缺血再灌注单糖转运蛋白质类免疫组织化学
- 葡萄糖转运体3在脑缺血/再灌注后半影区表达的变化及意义被引量：5
- 2004年
- 目的研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗塞体积比、皮质半影区葡萄糖转运体3(GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达。方法用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用KontronIBAS25全自动图像分析系统检测脑梗塞体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定GLUT3mRNA水平的变化;用免疫组织化学方法半定量测定GLUT3蛋白水平的变化。结果脑缺血1h后再灌注组的脑梗塞体积明显小于缺血3h再灌注组梗塞体积。GLUT3自3h即开始升高,24h到达高峰,1周时仍高于假手术对照组;缺血3h再灌注组在3h有一下降点,然后升高,24h到高峰,1周时接近正常水平。GLUT3蛋白水平的表达与mRNA相符合。结论GLUT3在缺血半影区的表达上调,可能是机体对缺血/再灌注的保护性反应。
- 李方成陶宗玉刘安民李军亮张蕲吴中华林吉惠
- 关键词：脑缺血再灌注单糖转运蛋白质类免疫组织化学
- 人参皂甙Rb1对脑缺血半影区葡萄糖转运体3表达的影响被引量：4
- 2005年
- 李方成陶宗玉刘安民李军亮吴中华林吉惠
- 关键词：人参皂甙RB1缺血半影区脑缺血再灌注模型增强机体免疫力脑梗塞体积神经保护机制
