国家自然科学基金(30270289)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 分枝杆菌中表达重组蛋白的新载体pMSL的构建
- 2005年
- 为了能够利用耻垢分枝杆菌表达和纯化结核分枝杆菌蛋白,构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pMSL。该质粒包括来源于牛型分枝杆菌hsp60基因启动子序列,目的蛋白插入的克隆位点和用于目的蛋白表达和定位进行跟踪的绿色荧光蛋白质(EGFP)基因,在目的蛋白插入位点和EGFP基因之间整合了凝血酶识别位点,便于融合蛋白纯化后目的蛋白与EGFP分离,在EGFP基因后面融合有6个组氨酸的密码子。结果表明,pMSL质粒能够在耻垢分枝杆菌中有效地表达绿色荧光蛋白,通过6个组氨酸尾,利用N i-NTA亲和层析柱很好地被纯化。
- 叶子坚刘冲陈效友昌增益
- 关键词：结核分枝杆菌绿色荧光蛋白纯化
- 多肽诱导的大肠杆菌DegP(HtrA)蛋白酶的构象变化(英文)
- 2006年
- 具有分子伴侣和蛋白酶双重活性的大肠杆菌DegP蛋白,在热休克和其他应激条件下,对于降解和清除膜间质中变性或损伤的蛋白质起着十分重要的作用.到目前为止,已有几种蛋白质被鉴定出是DegP的天然底物.以前的研究表明,DegP的体内底物之一,PapG菌毛蛋白的羧基端多肽能够激活DegP的蛋白酶活性.然而这种激活的机制及生理意义均未见报道.用合成的PapG菌毛蛋白的羧基端多肽对这种激活的机制进行了初步研究.结果表明,DegP与多肽结合后发生了可检测的构象变化.圆二色性光谱结果显示,结合多肽后DegP的二级结构和三级结构均发生了一定的变化.凝胶排阻层析和动态光散射实验也揭示出DegP分子在一定程度上变小.进一步实验表明,DegP在多肽存在下,其疏水表面和催化位点均有所暴露.荧光各向异性结果显示出DegP在结合多肽后其构象柔性降低.对上述结果的意义进行了探讨.
- 张雪峰郑益新昌增益
- 关键词：构象变化多肽
