国家高技术研究发展计划(2003AA622030) 作品数:11 被引量:22 H指数:4 相关作者: 郑风荣 孙修勤 刘洪展 张进兴 吴兴安 更多>> 相关机构: 国家海洋局第一海洋研究所 山东大学 第四军医大学 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 更多>>
牙鲆淋巴囊肿病毒核酸疫苗的安全性研究 被引量:4 2006年 对牙鲆淋巴囊肿病毒核酸疫苗进行了安全性鉴定。试验采用PCR方法,通过检测该疫苗是否与牙鲆染色体整合,以及疫苗中的卡那霉素抗性基因是否对牙鲆体内和环境中抗性菌数量及种类产生影响,来确认疫苗的安全性。结果表明,该疫苗不与牙鲆染色体发生整合,也未对环境中的抗性苗数量和种类产生影响,表明本实验用核酸疫苗对于受免牙鲆和环境都是安全的。 郑风荣 孙修勤 刘洪展 吴谡琦 张进兴 曲凌云 洪旭光关键词:核酸疫苗 抗性基因 安全性 CpG DNA的免疫学活性及在鱼类疾病防治中的应用 被引量:1 2005年 研究发现,细菌中的CpGDNA和人工合成的CpGODN可激活T细胞、B细胞、NK细胞等免疫活性细胞,产生多种细胞因子,增强机体的非特异性和特异性免疫,并诱导Th1型介导的免疫反应,是高效、安全的新型免疫佐剂。该文简要介绍CpGDNA的结构特点、免疫学性质以及在鱼类疾病防治中的应用。 郑风荣 刘洪展 孙修勤关键词:佐剂 CPG 鱼类 免疫学活性 疾病防治 牙鲆淋巴囊肿病毒主要衣壳蛋白基因片段真核表达载体的构建、表达与免疫效果评价 被引量:1 2006年 用淋巴囊肿病毒LCDV-cn感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,用RTPCR法获得了LCDV-cn主要衣壳蛋白(MCP)0.6kb基因片段.将该LCDV-cn-MCP0.6kb片断克隆入真核表达载体pEGFP-N2,得到重组质粒pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6.采用脂质体法将重组质粒转染入牙鲆鳃细胞系FEC,并进行瞬时表达.通过荧光显微镜观察和特异性RT-PCR检测,证实重组质粒pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6kb已成功转染到FEC细胞,并得到了初步表达.将重组质粒肌注入牙鲆体内,检测牙鲆外周血、肠、脾脏、前肾和淋巴细胞的增殖反应、呼吸爆发活性及抗体产生水平.结果表明,构建的核酸疫苗pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6可诱导牙鲆特异性体液免疫和细胞免疫,具有明显的免疫保护作用. 孙修勤 郑风荣 李继业 吴兴安 曲凌云 张进兴 洪旭光关键词:核酸疫苗 真核表达载体构建 免疫效果 脂质体对牙鲆淋巴囊肿病毒核酸疫苗免疫活性的影响 被引量:1 2006年 将淋巴囊肿病毒核酸疫苗pEGFP-N2-LCDV0.6kb用脂质体梭华-Softast^TM包裹后肌肉注射入牙鲆体内,通过测定牙鲆外周血、肠、脾脏和前肾的淋巴细胞增殖反应、呼吸爆发活性以及抗体产生水平,评价脂质体对pEGFP-N2-LCDV0.6kb免疫活性的影响。结果表明,脂质体可显著增强该核酸疫苗的免疫活性和提高保护率,可作为一种有应用前景的核酸疫苗佐剂。 郑风荣 刘洪展 张进兴 孙修勤关键词:核酸疫苗 免疫效果 脂质体 佐剂 DNA疫苗的分子佐剂研究进展及其在鱼用疫苗中应用 被引量:4 2006年 DNA疫苗是一种能诱生机体产生免疫应答的新型疫苗,近年来成为一种新的研究热点,但存在免疫效果低的缺点,为优化DNA疫苗的免疫效果,人们开始研究一类新型的DNA疫苗分子佐剂。本文简述了当前DNA疫苗中几种常用的分子佐剂如细胞因子、CpG-ODN及其在鱼用疫苗中的应用。 郑风荣 刘洪展 孙修勤关键词:DNA疫苗 分子佐剂 细胞因子 CPG-ODN 淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白1.3kb基因片段的原核表达 被引量:4 2006年 取淋巴囊肿病病毒感染牙鲆组织,蛋白酶K裂解,PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白1.3kb基因片段。构建其原核表达载体,IPTG诱导表达。结果表明,该融合蛋白分子量约70kD,可与抗LCDV多克隆血清特异反应。为LCDV基因工程疫苗的研制奠定了实验基础。 钟楠 胡刚 张亮 张芳琳 白文涛 于澜 徐志凯 吴兴安关键词:原核表达 淋巴囊肿病毒核酸疫苗在牙鲆体内的表达及免疫效果评价 被引量:2 2007年 将本试验室得到的牙鲆淋巴囊肿病毒(LCDV-cn)衣壳蛋白0.6kb片段重组质粒pEGFP-N2-LCDV-cn MCP0.6肌注入牙鲆体内,荧光显微观察及特异性RT-PCR检测其在牙鲆组织内的表达,并进一步测定牙鲆外周血、肠、脾脏、前肾的淋巴细胞增殖反应、呼吸爆发活性及抗体产生水平.研究结果表明, pEGFP-N2-LCDV-cn MCP 0.6可分布于牙鲆各组织内,并在一定时间内持续表达;免疫学检测表明,该重组质粒诱导了牙鲆特异性体液免疫和细胞免疫.本试验成果为淋巴囊肿病毒核酸疫苗的生产应用和产业化提供了重要的理论依据. 郑风荣 孙修勤 张进兴 廉建华 吴谡琦关键词:淋巴囊肿病毒 核酸疫苗 免疫效果 PLD 的生化特性及在信号传导中的作用 被引量:2 2005年 磷脂酶 D(PLD)是一种分解磷脂的多功能酶,磷脂酶可激活调控许多重要的细胞生理功能,在信号转导、小泡运输、有丝分裂、激素作用的发挥、细胞骨架组装、防御反应以及种子萌发和衰老过程中都起重要作用.主要介绍了磷脂酶基因的生化特性及在植物信号转导中的作用. 刘洪展 郑风荣关键词:PLD 生化特性 信号转导 驯化处理对海水胁迫下玉米幼苗生长特性的影响 被引量:5 2007年 为了探讨海水灌溉时提高植物耐受盐分胁迫的有效调节措施,以抗性玉米品种农大108为材料,研究了用20%和70%海水分别驯化的萌发种子和萌发期幼苗在生长后期50%海水胁迫过程中某些生理指标的变化。结果表明:在海水处理过程中,叶绿素和类胡萝卜素含量、光合速率和幼苗鲜质量明显下降,其中种子驯化能减弱胁迫对上述特性的不利影响,70%海水驯化种子缓解了对叶绿体色素和光合作用的破环,20%海水驯化种子减轻了幼苗鲜质量的降低;叶绿素a/叶绿素b(chla/chlb)、根系活力、幼苗干质量和根冠比明显上升,其中驯化处理有利于胁迫下幼苗根系活力和根冠比的升高,20%海水驯化种子促进了幼苗干质量和根冠比的增加,70%海水驯化幼苗对chla/chlb和根系活力的促进作用比20%海水驯化种子稍微明显一些。说明在不同发育阶段采取合理的驯化方式可以提高植物生长过程中对海水胁迫的适应能力,从而改善植物对灌溉海水的利用效率。 刘洪展 郑风荣 孙修勤关键词:海水胁迫 玉米幼苗 Application of quantitative PCR method in detection of Lymphocystis disease virus China (LCDV-cn) in Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) 2007年 Lymphocystis disease causes serious economic losses in the fish farming industry. The causative agent of the disease is Lymphocystis disease virus China (LCDV-cn), which has a wide range of hosts. Based on competitive quantitative PCR technology, we established a method to quantify the LCDV-cn in tissue. Results demonstrate that the average amount of LCDV-cn in the peripheral blood of infected flounder with evident tumors is about 106virions/ml while the average amount in those flounder with no evident tumor but cultured with the flounder with evident tumor is about 104virions/ml. No virus was found in the negative samples of flounder. 昝金东 孙修勤 张之文 曲凌云 张进兴